一种与控制印度南瓜红果皮性状紧密连锁的分子标记、引物及应用制造技术

一种与控制印度南瓜红果皮性状紧密连锁的分子标记、引物及应用，属于分子标记辅助育种技术领域。分子标记FC‑01由SEQ ID NO.1所示的核苷酸的序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸的序列组成。FC‑02由序列表中SEQ ID NO.3所示的核苷酸的序列和SEQ ID NO.4所示的核苷酸的序列组成。本发明专利技术公开了用于扩增上述分子标记的引物序列，具有较高稳定性。利用印度南瓜红果皮的分子辅助选择，可在南瓜幼苗期简便、快速地用于红果皮类型的筛选，回交转育的方法可快速培养出印度南瓜红果皮品种改良品系。

【技术实现步骤摘要】
一种与控制印度南瓜红果皮性状紧密连锁的分子标记、引物及应用
本专利技术涉及分子标记
，具体涉及一种与控制印度南瓜红果皮性状紧密连锁的分子标记、引物及应用。
技术介绍
分子标记辅助育种是一种快速发展的新技术，通过在分子水平上对个体的遗传组成进行快速准确地分析来实现对基因型的直接选择，从而进行分子育种。印度南瓜(CucurbitamaximaL.)是葫芦科(Cucurbitaceae)南瓜属(Cucurbita)一年生蔓生的草本植物，起源于墨西哥至中美洲和南美洲一带，在世界范围内广泛种植，也是我国重要的瓜类作物之一。其果肉和籽粒均可食用，且具有栽培容易、产量高、营养价值丰富等优点；果实是南瓜经济性状最重要的部分，南瓜果实属于瓠果，由下位子房发育而成。在南瓜果实上有一个重要品质性状就是果皮颜色，果皮颜色是南瓜重要的商品性状。印度南瓜果皮颜色有着丰富的多样性，有橘红色，橘黄色，深绿色，浅绿色，灰色等不同的颜色。果皮颜色性状主要由类胡萝卜素调控，在果实不断成熟的过程中，叶绿体逐渐转变为有色体,叶绿素不断减少,叶黄素、胡萝卜素等类胡萝卜素大量生成并积累在有色体中,使得南瓜果皮表现为以叶黄素为主的橘红色或橘黄色。而鲜明的颜色是南瓜重要的商品性状之一，因此，对南瓜橘红果皮性状的利用，选育出有橘红果皮性状的印度南瓜果实具有广阔的应用前景和巨大的经济价值。传统育种方法在印度橘红果皮果实选育过程中存在育种周期长等问题。用与目的性状紧密连锁的分子标记进行标记辅助选择在南瓜遗传育种中是十分有效的方法，可以有效拓宽这一性状的应用，推动品质育种进程。因此，开发印度南瓜橘红果皮性状紧密连锁的分子标记，对于提高印度南瓜果实品质，揭示橘红果皮形成的分子机制具有十分重要的意义。
技术实现思路
为了能够快速，高效鉴定印度南瓜红果皮性状，加速红果皮南瓜选育进程，本专利技术提供了一种与控制印度南瓜红果皮性状紧密连锁的分子标记，所述分子标记为FC-01和FC-02，所述分子标记FC-01由SEQIDNO.1所示的DNA片段和SEQIDNO.2所示的DNA片段组成；所述分子标记FC-02由SEQIDNO.3所示的DNA片段和SEQIDNO.4所示的DNA片段组成。进一步地限定，所述分子标记FC-01中SEQIDNO.1所示的DNA片段与印度南瓜红果皮性状基因R连锁，SEQIDNO.2所示的DNA片段与印度南瓜非红果皮性状基因r连锁。进一步地限定，所述分子标记FC-02中SEQIDNO.3所示的DNA片段与印度南瓜红果皮性状基因R连锁，SEQIDNO.4所示的DNA片段与印度南瓜非红果皮性状基因r连锁。本专利技术还提供了扩增上述分子标记的引物，扩增分子标记FC-01的引物序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示；扩增分子标记FC-02的引物序列如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示。本专利技术还提供了上述分子标记在红果皮性状南瓜育种中的应用。本专利技术还提供了上述引物在红果皮性状南瓜育种中的应用。本专利技术还提供了一种红果皮性状南瓜育种的方法，包括如下步骤：1)以印度南瓜红果皮品系2013-12为母本，以南瓜灰果皮9-6品系为父本，将所述母本与父本进行杂交，所得F1代与所述父本进行回交，得到后代BC1F1，分别利用本专利技术所述的分子标记FC-01和分子标记FC-02扫描BC1F1群体，选择经分子标记FC-01扫描后具有44nt、396nt、326nt和722nt核苷酸片段且经分子标记FC-02扫描后具有420nt、421nt和841nt核苷酸片段的植株，与所述父本进行回交，得到后代BC2F1；2)分别利用分子标记FC-01和分子标记FC-02扫描BC2F1群体，选择经分子标记FC-01扫描后具有44nt、396nt、326nt和722nt核苷酸片段且经分子标记FC-02扫描后具有420nt、421nt和841nt核苷酸片段的植株，再与所述父本进行回交得到回交三代BC3F1；3)利用分子标记FC-01和分子标记FC-02扫描BC3F1群体，选择经分子标记FC-01扫描后具有44nt、396nt、326nt和722nt核苷酸片段且经分子标记FC-02扫描后具有420nt、421nt和841nt核苷酸片段的植株，进行自交，后代记为BC3F2；4)利用分子标记FC-01和FC-02扫描BC3F2，选择经分子标记FC-01扫描后具有44nt和722nt核苷酸片段且在标记FC-02具有841nt核苷酸片段的植株，即为改良红果皮自交系。优选地，步骤1)所述的南瓜灰果皮品系为印度南瓜灰果皮9-6。本专利技术中具体使用的亲本印度南瓜红果皮系“2013-12”和印度南瓜灰果皮系“9-6”记载在“Morphological,TranscriptomicandHormonalCharacterizationofTrimonoeciousandSubandroeciousPumpkin(Cucurbitamaxima)SuggestsImportantRolesofEthyleneinSexExpression”(Wangetal.,2019)，公众可通过东北农业大学获得。有益效果本专利技术利用印度南瓜红果皮‘2013-12’与灰果皮‘9-6’杂交获得F1植株，F1植株自交获得1627株F2分离群体，通过表型分析确定了印度南瓜红果皮性状属于单基因控制的显性性状。后分别取F2分离群体每株嫩叶提取基因组DNA，结合SLAF-seq的方法筛选与印度南瓜红果皮性状基因R紧密连锁的分子标记。利用高密度图谱的分子标记，最终提供的两个与印度南瓜红果皮紧密连锁的分子标记，分别坐落在控制目标性状基因的两侧，两标记遗传距离为64.47Kb，便于红果皮的分子标记辅助育种体系的建立。本专利技术的分子标记可简便、快捷、高通量的应用与育种实践中。本专利技术还提供了利用上述分子标记快速培育红果皮性状印度南瓜的应用。利用回交转育的方法，红果皮‘2013-12’作为非轮回亲本，灰果皮‘9-6’为轮回亲本，利用本专利技术的两个分子标记FC-01和FC-02扫描回交群体，根据PCR扩增产物的酶切条带，快速准确的改良灰果皮‘9-6’的果皮颜色。CAPS分子标记具有高稳定特征，利用这些分子标记构建高密度遗传图谱和物理图谱，将有助于建立印度南瓜红果皮颜色目标基因筛选的分子标记辅助育种系。附图说明图1为CAPS标记FC-01和FC-02和控制印度南瓜红果皮基因R紧密连锁，每一个叉号代表2个单交换事件；图2为CAPS标记FC-01P1，P2，F1，F2群体PCR产物的酶切条带，其中M为D2000Marker，条带长度由高到低分别为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，P1代表红果皮品系‘2013-12’，P2代表灰果皮品系‘9-6’，F1为P1和P2的杂交第一代，F2为F1代自交后代，F2红果皮群体和F2非红果皮群体分别表示在F2群体中随机挑选的10株红果皮和10株本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与控制印度南瓜红果皮性状紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记为FC-01和FC-02，所述分子标记FC-01由SEQ ID NO.1所示的DNA片段和SEQ ID NO.2所示的DNA片段组成；所述分子标记FC-02由SEQ ID NO.3所示的DNA片段和SEQ ID NO.4所示的DNA片段组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种与控制印度南瓜红果皮性状紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记为FC-01和FC-02，所述分子标记FC-01由SEQIDNO.1所示的DNA片段和SEQIDNO.2所示的DNA片段组成；所述分子标记FC-02由SEQIDNO.3所示的DNA片段和SEQIDNO.4所示的DNA片段组成。


2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述分子标记FC-01中SEQIDNO.1所示的DNA片段与印度南瓜红果皮性状基因R连锁,SEQIDNO.2所示的DNA片段与印度南瓜非红果皮性状基因r连锁。


3.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述分子标记FC-02中SEQIDNO.3所示的DNA片段与印度南瓜红果皮性状基因R连锁，SEQIDNO.4所示的DNA片段与印度南瓜非红果皮性状基因r连锁。


4.扩增权利要求1所述的分子标记的引物，其特征在于，扩增分子标记FC-01的引物序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示；扩增分子标记FC-02的引物序列如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示。


5.权利要求1-3任意一项所述的分子标记在红果皮性状南瓜育种中的应用。


6.权利要求4所述的引物在红果皮性状南瓜育种中的应用。


7.一种红果皮性状南瓜育种的方法，包括如下步骤：
1)以印度南瓜红果皮品系2013-12为母...

【专利技术属性】
技术研发人员：王云莉，罗玉松，屈淑平，徐文龙，韩宏宇，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙;23