一种穿透肽及其在敲除金黄色葡萄球菌黏附因子中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种穿透肽及其在体外敲除金黄色葡萄球菌黏附因子的应用，即首先依据金黄色葡萄球菌黏附因子sgRNA识别区的靶点序列构建CRISPR‑Cas9系统，靶点序列的碱基序列如SEQ NO.1所示，所构建CRISPR‑Cas9系统中，是将T7启动子插入sgRNA转录起始位点前，构建Cas9蛋白的原核表达载体，以T7启动子进行调控，接着利用氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的细胞穿透肽CPP5L将金黄色葡萄球菌黏附因子敲除载体pCas9‑FnBP带入微生物细胞内，以实现在体外敲除金黄色葡萄球菌黏附因子。

【技术实现步骤摘要】
一种穿透肽及其在敲除金黄色葡萄球菌黏附因子中的应用
本专利技术涉及微生物基因工程和生物
，特别是一种细胞穿透肽CPP5L，以及利用该细胞穿透肽通过CRISPR-Cas9系统体外敲除金黄色葡萄球菌黏附因子的方法。
技术介绍
CRISPR(clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats)技术为开发新型微生物基因治疗措施提供了可能。CRISPR-Cas9系统是2013年新发现的强大基因定点编辑技术，能够方便而精确的对DNA和核苷酸序列进行编辑、切割、修饰。CRISPR-Cas9系统的工作原理是成簇的、规律间隔的短回文重复序列crRNA(CRISPR-derivedRNA)通过碱基配对与tracrRNA(trans-activatingRNA)结合形成tracrRNA/crRNA组合物，此组合物引导核酸酶Cas9蛋白在与crRNA配对的序列靶位点实现定点剪切双链DNA。在实际应用中tracrRNA/crRNA组合物可优化为一条sgRNA序列，包含tracrRNA/crRNA的双重功能。...

【技术保护点】
1.一种穿透肽，其特征在于，所述穿透肽氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种穿透肽，其特征在于，所述穿透肽氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.如权利要求1所述的穿透肽在在携带蛋白质或者核酸进入微生物细胞中的应用。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述核酸为pCas9-FnBP质粒。


4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述微生物为金黄色葡萄球菌。


5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用是指，利用所述穿透肽敲除金黄色葡萄球菌的黏附因子。


6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用具体步骤如下：
A）按照SEQIDNO.5合成DNA序列并进行退火处理，获得杂交双链；
B）利用BsaI酶切载体pCas9；
C）利用T4连接酶连接杂交双链与酶切后的载体pCas9，获得载体pCas9-FnBP；

【专利技术属性】
技术研发人员：孙利厂，王冉，陈冠雄，张莉莉，董俊，庞茂达，何涛，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，宜兴市天石饲料有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32