一种改性琼脂粉制造技术

本发明专利技术涉及琼脂粉的改性，具体涉及一种改性琼脂粉，其通过以下方法制得：将琼脂粉用50mmol/L pH 9.0的Tris‑HCl缓冲液溶解，以便获得琼脂粉溶液；将芳香基硫酸酯酶加入所述琼脂粉溶液中，再置于50℃下温浴6h，以便获得所述改性琼脂粉。本发明专利技术制得的改性琼脂粉的性质类似于商品琼脂糖，在核酸电泳试验时，对凝胶电泳的DNA片段具有较好的分离分辨率。

A modified agar powder

【技术实现步骤摘要】
一种改性琼脂粉
本专利技术涉及琼脂粉的改性领域，具体涉及一种改性琼脂粉。
技术介绍
琼脂糖主要由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖相间结合构成的链状中性多糖；由于其硫酸根、丙酮酸等带电基团含量低，因此电内渗小，对蛋白质、碱性染料无吸附，可作为理想的电泳介质，通常用于核酸电泳试验。目前，国产琼脂糖的获取主要是使琼脂糖与硫琼脂分离，以达到纯化琼脂糖的目的；由此，国产琼脂糖产品质量不高，导致实验室用的商品琼脂糖大多依赖国外进口。为此，一种可替代商品琼脂糖的物质，有待研究。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提供一种改性琼脂粉。本专利技术制得的改性琼脂粉的性质类似于商品琼脂糖，在核酸电泳试验时，对凝胶电泳的DNA片段具有较好的分离分辨率。有鉴于此，在本专利技术的一方面，本专利技术提出了一种改性琼脂粉，其通过以下方法制得：将琼脂粉用50mmol/LpH9.0的Tris-HCl缓冲液溶解，以便获得琼脂粉溶液；将芳香基硫酸酯酶加入所述琼脂粉溶液中，再置于50℃下温浴6h，以便获得所述改性琼脂粉。本专利技术采用芳香基硫酸酯酶对琼脂粉进行脱硫处理，改变琼脂粉的性质，使得改性后的琼脂粉性质接近于商品琼脂糖，可应用在核酸电泳上，在核酸电泳试验时，对凝胶电泳的DNA片段具有较好的分离分辨率。另外，根据本专利技术上述实施例提出的一种改性琼脂粉，还可以具有如下附加的技术特征：根据本专利技术的实施例，在温浴结束后，取1mL的样品，离心处理，获得上清液，向所述上清液中加入BaCl2·2H2O-吐温80混合液和浓盐酸，在室温下静置30min后，置于420nm处测量吸光度，吸光度带入硫酸标准曲线，即可计算释放的硫酸盐量。根据本专利技术的实施例，所述芳香基硫酸酯酶的加酶量为1.20U/mL。根据本专利技术的实施例，所述上清液、BaCl2·2H2O-吐温80混合液与浓盐酸的比例为9:6:2。根据本专利技术的实施例，所述芳香基硫酸酯酶通过以下方法制得：将含有芳香基硫酸酯酶基因的工程菌，按体积比1：100转接到250mL的LB液体培养基中，37℃、180r/min下培养至OD600达到0.8，加入终浓度为0.1mmol/LIPTG，18℃、180r/min培养20h，离心，收集菌体；菌体再重悬于结合缓冲液中，置于冰上进行超声波破碎处理，离心，收集上清液，上清液再进行Ni-NTA亲和层析，经洗涤缓冲液洗涤后，利用洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液，以便获得所述芳香基硫酸酯酶。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明图1本专利技术实施例的改性琼脂粉、商品琼脂粉和商品琼脂糖的溶解温度；图2为专利技术实施例的改性琼脂粉、商品琼脂粉和商品琼脂糖的融化温度；图3为专利技术实施例的改性琼脂粉、商品琼脂粉和商品琼脂糖的凝固温度；图4为专利技术实施例的改性琼脂粉、商品琼脂粉和商品琼脂糖的凝胶强度；图5为专利技术实施例的改性琼脂粉、商品琼脂粉和商品琼脂糖的透明度；图6为专利技术实施例的改性琼脂粉、商品琼脂粉和商品琼脂糖的粘度；图7为专利技术实施例的改性琼脂粉、商品琼脂粉和商品琼脂糖的白度；图8为专利技术实施例的改性琼脂粉、商品琼脂粉和商品琼脂糖的凝胶电泳图；其中*表示改性琼脂粉和商业琼脂粉存在显著差异，P<0.05；**表示改性琼脂粉和商业琼脂粉存在极显著差异，P<0.01。具体实施方式以下通过特定的具体实例说明本专利技术的技术方案。应理解，本专利技术提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本专利技术可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更
技术实现思路
的情况下，当亦视为本专利技术可实施的范畴。为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本专利技术的示例性实施例。虽然显示了本专利技术的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本专利技术，并且能够将本专利技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。本专利技术采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。本专利技术提出了一种改性琼脂粉，下面将对其进行详细描述。根据本专利技术的实施例，该改性琼脂粉，通过以下方法制得：将琼脂粉用50mmol/LTris-HCl缓冲液(pH9.0)溶解，以便获得琼脂粉溶液；在该步骤中，将琼脂粉溶解，制得琼脂粉溶液。具体的，称取4g的琼脂粉置于100mL的缓冲液中，以获得浓度为4％的琼脂粉溶液。专利技术人发现，琼脂粉溶液的pH为9时，有助于芳香基硫酸酯酶对琼脂粉进行更好地脱硫处理，以获得接近于商品琼脂糖性质的改性琼脂粉。根据本专利技术的一个实施例，琼脂粉的种类并不受特别限制，本领域的技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本专利技术的一个具体实施例，琼脂粉可以选自市售的商品琼脂粉(生产厂商：广东环凯微生物科技有限公司)。将芳香基硫酸酯酶加入所述琼脂粉溶液中，再置于50℃下温浴6h，以便获得所述改性琼脂粉。在该步骤中，将芳香基硫酸酯酶加入所述琼脂粉溶液中，温浴，进行脱硫处理，以便获得所述改性琼脂粉。专利技术人发现，采用芳香基硫酸酯酶对琼脂粉溶液进行脱硫处理，可改变琼脂粉的性质，使得商品琼脂粉的质量明显提高，使得改性后的琼脂粉性质接近于商品琼脂糖，可应用在核酸电泳上，在核酸电泳试验时，该琼脂粉对凝胶电泳的DNA片段具有较好的分离分辨率。根据本专利技术的一个实施例，芳香基硫酸酯酶处理琼脂粉溶液的加酶量并不受特别限制，本领域的技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本专利技术的一个具体实施例，所述芳香基硫酸酯酶的加酶量为1.20U/mL。专利技术人发现，若芳香基硫酸酯酶的加入量较少时，会造成琼脂粉脱硫速率慢。由此，采用该加酶量，可以保证琼脂粉的脱硫速率的同时保证改性琼脂粉的品质。根据本专利技术的再一个实施例，上述琼脂粉与芳香基硫酸酯酶在温浴后，取1mL的样品，离心处理，获得上清液，向所述上清液中加入BaCl2·2H2O-吐温80混合液和浓盐酸，在室温下静置30min后，置于420nm处测量吸光度，吸光度带入硫酸标准曲线，即可计算释放的硫酸盐量。根据本专利技术的一个具体示例，温浴6h后，取样1mL，置于12000×g离心10min，获得上清液，取0.9mL上清液与0.2mL浓盐酸和0.6mL13.33％BaCl2·2H2O-2.67％吐温80混合溶液混合，之后，在室温下静置30min后，在420nm处测量吸光度。使用在2～20μg/mL硫酸范围内稳定的标准曲线计算释放的硫酸盐量。以灭活酶处理的琼脂粉为参照。测定加酶处理的琼脂粉的硫酸盐含量，从而计算出芳香本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改性琼脂粉，其特征在于，其通过以下方法制得：/n将琼脂粉用50mmol/L pH 9.0的Tris-HCl缓冲液溶解，以便获得琼脂粉溶液；/n将芳香基硫酸酯酶加入所述琼脂粉溶液中，再置于50℃下温浴6h，以便获得所述改性琼脂粉。/n

【技术特征摘要】
1.一种改性琼脂粉，其特征在于，其通过以下方法制得：
将琼脂粉用50mmol/LpH9.0的Tris-HCl缓冲液溶解，以便获得琼脂粉溶液；
将芳香基硫酸酯酶加入所述琼脂粉溶液中，再置于50℃下温浴6h，以便获得所述改性琼脂粉。


2.如权利要求1所述的一种改性琼脂粉，其特征在于：在温浴结束后，取1mL的样品，离心处理，获得上清液，向所述上清液中加入BaCl2·2H2O-吐温80混合液和浓盐酸，在室温下静置30min后，置于420nm处测量吸光度，吸光度带入硫酸根含量标准曲线，即可计算释放的硫酸盐量。


3.如权利要求1所述的一种改性琼脂粉，其特征在于：所述芳香基硫酸酯酶的加酶量为1.20U/mL。
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【专利技术属性】
技术研发人员：朱艳冰，梁梅芳，倪辉，姜泽东，肖安风，李利君，杨远帆，杜希萍，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建;35