自动染色机He染色工艺制造技术

本发明专利技术公开一种自动染色机He染色工艺，包括以下步骤：（1）脱蜡；（2）洗脱二甲苯；（3）组织入水；（4）细胞核染色；（5）细胞质染色；（6）酒精清洗；（7）组织透明；（8）封固。采用本发明专利技术所述的工艺对切片组织进行染色，细胞核、细胞质着色鲜艳，着色均匀、稳定性好，细胞核、细胞质颜色对比清晰，从而使试验结果判断更准确。

He dyeing process of automatic dyeing machine

The invention discloses an automatic dyeing machine he dyeing process, which comprises the following steps: (1) dewaxing; (2) xylene elution; (3) tissue entering water; (4) nuclear dyeing; (5) cytoplasmic dyeing; (6) alcohol cleaning; (7) tissue transparency; (8) sealing. The process of the invention is used to dye the section tissue, the nucleus and cytoplasm are brightly colored, the coloring is uniform, the stability is good, and the color contrast of the nucleus and cytoplasm is clear, so that the judgment of the test result is more accurate.

【技术实现步骤摘要】
自动染色机He染色工艺
本专利技术涉及生物组织样本处理
，具体指一种自动染色机He染色工艺。
技术介绍
苏木精—伊红染色法，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。现有的He染色工艺，细胞组织分别只用一缸苏木精染色液和一缸伊红液染色进行染色，对于没有染上色的没有补色措施，染色力度不够。另外，采用现有方法存在细胞核染色深浅不一以及细胞浆染色深浅不一，着色过深或过浅的问题，染色稳定性不佳，细胞核与细胞质染色不够鲜艳，对比度不够鲜明，影响试验操作人员的判断，从而影响最终实验判断的准确性。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种自动染色机He染色工艺。本专利技术的技术方案如下：自动染色机He染色工艺，包括以下步骤：(1)脱蜡：将组织切片放入二甲苯中脱蜡四次，每次脱蜡时间为5-8min；(2)洗脱二甲苯：脱蜡后将切片放入无水乙醇洗脱二甲苯三次，每次1-3min；(3)组织入水：洗脱二甲苯后用高浓度到低浓度梯度的酒精依次进行组织进水过程，在每个浓度的酒精内浸泡1-3min，然后水洗，高浓度到低浓度的酒精是指体积浓度为95％、85％、75％的浓度梯度酒精；(4)细胞核染色：水洗后将切片先后放入两缸苏木精染色液中染色，每缸浸泡5-8min，切片先放入较新一缸的苏木精染色液，然后再放入较旧一缸的苏木精染色液，然后依次进行水洗、分化返蓝、水洗，在显微镜下观察染色是否深浅合适，再用自来水冲洗蓝化8-10min；(5)细胞质染色：用自来水蓝化后，将切片先后放入两缸伊红染色液中染色，每缸浸泡20s-60s，切片先放入较新一缸的伊红染色液，再放入较旧一缸的伊红染色液；(6)酒精清洗：切片用伊红染色液着色后，采用低浓度到高浓度梯度的酒精依次进行组织清洗，然后再用无水乙醇洗涤三次，每次1-3min，低浓度到高浓度的酒精是指体积浓度为75％、85％、95％的浓度梯度酒精；(7)组织透明：酒精清洗完成后，将切片分四次放在二甲苯或环保透明剂中进行透明，每次浸泡1-3min；(8)封固：将透明后的切片用中性树胶封固。步骤(4)所述的分化返蓝用0.05％-1％的盐酸乙醇溶液浸泡1-5s。本专利技术的有益效果在于：1.本专利技术细胞核、细胞质的染色液采用两缸且先新后旧的方法，新的染色液可以让细胞核或细胞质的中心部位着色鲜艳，均匀性好，而旧的染色液作为补充可以使未完全上色的部位充分着色，可以增加着色力度和染色的稳定性。2.本专利技术将组织切片放入二甲苯中脱蜡四次且脱蜡后用无水乙醇洗脱二甲苯三次，脱蜡干净，且脱蜡后二甲苯洗脱干净，因此后续用染色液染色时着色均匀，细胞核、细胞质染色边界清晰，再加上细胞核、细胞质着色鲜艳，因此细胞核、细胞质对比清晰，试验准确性高。具体实施方式下面对本专利技术作进一步的说明。实施例1自动染色机He染色工艺，包括以下步骤：(1)脱蜡：将组织切片放入二甲苯中脱蜡四次，每次脱蜡时间为5min；(2)洗脱二甲苯：脱蜡后将切片放入无水乙醇洗脱二甲苯三次，每次1min；(3)组织入水：洗脱二甲苯后用高浓度到低浓度梯度的酒精依次进行组织进水过程，在每个浓度的酒精内浸泡1min，然后水洗，高浓度到低浓度的酒精是指体积浓度为95％、85％、75％的浓度梯度酒精；(4)细胞核染色：水洗后将切片先后放入两缸苏木精染色液中染色，每缸浸泡5min，切片先放入较新一缸的苏木精染色液，然后再放入较旧一缸的苏木精染色液，然后依次进行水洗、分化返蓝、水洗，在显微镜下观察染色是否深浅合适，再用自来水冲洗蓝化8min；(5)细胞质染色：用自来水蓝化后，将切片先后放入两缸伊红染色液中染色，每缸浸泡20s，切片先放入较新一缸的伊红染色液，再放入较旧一缸的伊红染色液；(6)酒精清洗：切片用伊红染色液着色后，采用低浓度到高浓度梯度的酒精依次进行组织清洗，然后再用无水乙醇洗涤三次，每次1min，低浓度到高浓度的酒精是指体积浓度为75％、85％、95％的浓度梯度酒精；(7)组织透明：酒精清洗完成后，将切片分四次放在二甲苯或环保透明剂中进行透明，每次浸泡1min；(8)封固：将透明后的切片用中性树胶封固。步骤(4)所述的分化返蓝用0.5％-1％的盐酸乙醇溶液浸泡1s。实施例2自动染色机He染色工艺，包括以下步骤：(1)脱蜡：将组织切片放入二甲苯中脱蜡四次，每次脱蜡时间为6min；(2)洗脱二甲苯：脱蜡后将切片放入无水乙醇洗脱二甲苯三次，每次2min；(3)组织入水：洗脱二甲苯后用高浓度到低浓度梯度的酒精依次进行组织进水过程，在每个浓度的酒精内浸泡2min，然后水洗，高浓度到低浓度的酒精是指体积浓度为95％、85％、75％的浓度梯度酒精；(4)细胞核染色：水洗后将切片先后放入两缸苏木精染色液中染色，每缸浸泡7min，切片先放入较新一缸的苏木精染色液，然后再放入较旧一缸的苏木精染色液，然后依次进行水洗、分化返蓝、水洗，在显微镜下观察染色是否深浅合适，再用自来水冲洗蓝化9min；(5)细胞质染色：用自来水蓝化后，将切片先后放入两缸伊红染色液中染色，每缸浸泡40s，切片先放入较新一缸的伊红染色液，再放入较旧一缸的伊红染色液；(6)酒精清洗：切片用伊红染色液着色后，采用低浓度到高浓度梯度的酒精依次进行组织清洗，然后再用无水乙醇洗涤三次，每次2min，低浓度到高浓度的酒精是指体积浓度为75％、85％、95％的浓度梯度酒精；(7)组织透明：酒精清洗完成后，将切片分四次放在二甲苯或环保透明剂中进行透明，每次浸泡2min；(8)封固：将透明后的切片用中性树胶封固。步骤(4)所述的分化返蓝用0.5％-1％的盐酸乙醇溶液浸泡3s。实施例3自动染色机He染色工艺，包括以下步骤：(1)脱蜡：将组织切片放入二甲苯中脱蜡四次，每次脱蜡时间为8min；(2)洗脱二甲苯：脱蜡后将切片放入无水乙醇洗脱二甲苯三次，每次3min；(3)组织入水：洗脱二甲苯后用高浓度到低浓度梯度的酒精依次进行组织进水过程，在每个浓度的酒精内浸泡3min，然后水洗，高浓度到低浓度的酒精是指体积浓度为95％、85％、75％的浓度梯度酒精；(4)细胞核染色：水洗后将切片先后放入两缸苏木精染色液中染色，每缸浸泡8min，切片先放入较新一缸的苏木精染色液，然后再放入较旧一缸的苏木精染色液，然后依次进行水洗、分化返蓝、水洗，在显微镜下观察染色是否深浅合适，再用自来水冲洗蓝化10min；(5)细胞质染色：用自来水蓝化后，将切片先后放入两缸伊红染色液中染色，每缸浸泡60s，切片先放入较新一缸的伊本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.自动染色机He染色工艺，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）脱蜡：将组织切片放入二甲苯中脱蜡四次，每次脱蜡时间为5-8min；/n（2）洗脱二甲苯：脱蜡后将切片放入无水乙醇洗脱二甲苯三次，每次1-3min；/n（3）组织入水：洗脱二甲苯后用高浓度到低浓度梯度的酒精依次进行组织进水过程，在每个浓度的酒精内浸泡1-3min，然后水洗；/n（4）细胞核染色：水洗后将切片先后放入两缸苏木精染色液中染色，每缸浸泡5-8min，切片先放入较新一缸的苏木精染色液，然后再放入较旧一缸的苏木精染色液，然后依次进行水洗、分化返蓝、水洗，在显微镜下观察染色是否深浅合适，再用自来水冲洗蓝化8-10min；/n（5）细胞质染色：用自来水蓝化后，将切片先后放入两缸伊红染色液中染色，每缸浸泡20s-60s，切片先放入较新一缸的伊红染色液，再放入较旧一缸的伊红染色液；/n（6）酒精清洗：切片用伊红染色液着色后，采用低浓度到高浓度梯度的酒精依次进行清洗，然后再用无水乙醇洗涤三次，每次1-3min；/n（7）组织透明：酒精清洗完成后，将切片分四次放在二甲苯或环保透明剂中进行透明，每次浸泡1-3min；/n（8）封固：将透明后的切片用中性树胶封固。/n...

【技术特征摘要】
1.自动染色机He染色工艺，其特征在于，包括以下步骤：
（1）脱蜡：将组织切片放入二甲苯中脱蜡四次，每次脱蜡时间为5-8min；
（2）洗脱二甲苯：脱蜡后将切片放入无水乙醇洗脱二甲苯三次，每次1-3min；
（3）组织入水：洗脱二甲苯后用高浓度到低浓度梯度的酒精依次进行组织进水过程，在每个浓度的酒精内浸泡1-3min，然后水洗；
（4）细胞核染色：水洗后将切片先后放入两缸苏木精染色液中染色，每缸浸泡5-8min，切片先放入较新一缸的苏木精染色液，然后再放入较旧一缸的苏木精染色液，然后依次进行水洗、分化返蓝、水洗，在显微镜下观察染色是否深浅合适，再用自来水冲洗蓝化8-10min；
（5）细胞质染色：用自来水蓝化后，将切片先后放入两缸伊红染色液中染色，每缸浸泡20s-60s，切片先放入较新一缸的伊红...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋建华，杨达平，李雄，刘勇青，
申请(专利权)人：宋建华，
类型：发明
国别省市：广西;45