一种克氏原螯虾i型溶菌酶gLysi2基因、其编码的gLysi2蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术首次发现了一种克氏原螯虾i型溶菌酶gLysi2基因，所述gLysi2基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。本发明专利技术利用该基因编码制备了一种gLysi2蛋白，所述gLysi2蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明专利技术还提供了上述基因和蛋白在预防和治疗对虾白斑综合症领域的应用。本发明专利技术具有有效的抗病毒作用，对白斑综合症杆状病毒有极强的抑制和杀灭效果，能够有效解决白斑综合症的免疫和治疗问题。

Glysi2 gene, glysi2 protein and its application

A lysozyme glysi2 gene of crayfish type I is first discovered in the invention, and the nucleotide sequence of the glysi2 gene is SEQ ID No.1. The invention uses the gene to code and prepare a glysi2 protein, and the amino acid sequence of the glysi2 protein is SEQ ID No.2. The invention also provides the application of the genes and proteins in the field of preventing and treating white spot syndrome of prawn. The invention has the advantages of effective antiviral effect, strong inhibition and killing effect on baculovirus of white spot syndrome, and can effectively solve the immune and treatment problems of white spot syndrome.

【技术实现步骤摘要】
一种克氏原螯虾i型溶菌酶gLysi2基因、其编码的gLysi2蛋白及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种克氏原螯虾i型溶菌酶gLysi2基因、其编码的gLysi2蛋白及其应用。
技术介绍
克氏原螯虾又称淡水小龙虾，形似虾而甲壳坚硬；成体长约5.6～11.9厘米。克氏原螯虾是淡水经济虾类，因肉味鲜美广受人们欢迎。因其杂食性、生长速度快、适应能力强而在当地生态环境中形成绝对的竞争优势。其摄食范围包括水草、藻类、水生昆虫、动物尸体等。近年来，克氏原螯虾在我国已经成为重要经济养殖品种，产量巨大。对虾白斑综合症是由白斑综合症杆状病毒引发的一种综合性病症。白斑综合症杆状病毒主要对虾体的造血组织、结缔组织、前后肠的上皮、血细胞、鳃等系统进行感染破坏。此类病毒复合体的毒力较强，从出现症状到死亡只有3～5天的时间，甚至更短。此病的感染率较高，7天左右可使池中70℅以上的虾得病，甚至死亡。上述疾病对于虾类的养殖而言十分致命，一旦养殖的虾患病，则会造成大面积死亡，而目前对上述疾病没有较好的治疗手段，因此养殖户养殖的虾一旦发病，会造成巨大的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种克氏原螯虾i型溶菌酶gLysi2基因，其特征在于：所述gLysi2基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。/n

【技术特征摘要】
1.一种克氏原螯虾i型溶菌酶gLysi2基因，其特征在于：所述gLysi2基因的核苷酸序列为SEQIDNO.1。


2.如权利要求1所述克氏原螯虾i型溶菌酶gLysi2基因在抗对虾白斑综合症领域的应用。


3.一种权利要求1所述克氏原螯虾i型溶菌酶gLysi2基因编码的gLysi2蛋白，其特征在于：所述gLysi2蛋白氨基酸序列为SEQIDNO.2。


4.如权利要求3所述的gLysi2蛋白在对虾白斑综合症治疗领域的应用。


5.一种权利要求3所述的gLysi2蛋白构建的表达载体，其特征在于：所述表达载体为pGEX-4T-1-Lysi2。


6.一种权利要求5所述的pGEX-4T-1-Lysi2表达载体的构建方法，其特征在于包括以下步骤：
①RNA提取及反转录：
选取克氏原螯虾，抽血解剖取组织样：血淋巴、心、肝、鳃、胃、肠，采用TRIzol法取总RNA，反转录合成cDNA；
②gLysi2全长编码区基因扩增：
设计用于序列扩增的专一性引物，以反转录得到的cDNA为模板作PCR扩增，扩增产物用1.0％琼脂糖凝胶电泳检测后，胶回收试剂盒回收PCR产物；
③pGEX-4T-1-Lysi2表达载体的构建：
将pGEX-4T-1载体和胶回收后的gLysi2PCR产物分别用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切，电泳检测并分别胶回收纯化，然后用T4DNA连接酶将其于恒温水浴锅中连接反应，连接产物转化到大肠杆菌DH5α，进行培养，挑取单菌落以primer-Lysi2引物作PCR鉴定，阳性克隆按1％比例扩大培养，扩增后提取质粒。


7.根据权利要求6所述的pGEX-4T-1-Lysi2表达载体的构建方法，其特征在于：
所述步骤②中，用于序列扩增的专一性引物的上游引物为Pc-Lysi2-EcoRI：5‘(TACTCAGAATTCCTGGTGGTCTTTTCTGCGGC)3’；
用于序列扩增的专一性引物的下游引物为Pc-Lysi2-NotI：5‘(TACTCAGCGGCCGCGCCGCAGAAAAGACC...

【专利技术属性】
技术研发人员：兰江风，张英豪，李通，曹晓彤，殷成明，顾泽茂，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42