本发明专利技术涉及含有抗真菌作用的白花玉簪根部提取物有效部位及其制备方法，所述有效部位选择白花玉簪根部乙醇提物及其萃取得到的石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位之一及其组合，研究证明，其中石油醚部位、氯仿部位和正丁醇部位具有明显的体外抗动物源真菌的能力，因此，所述有效部位可应用于治疗皮肤真菌病害。
Preparation and application of the effective part of the root of Hosta hairpin
The invention relates to an effective part of the root extract of white flower Hosta hairpin with antifungal effect and a preparation method thereof. The effective part selects the ethanol extract of the root of white flower Hosta hairpin and one of the extracted petroleum ether parts, chloroform parts, ethyl acetate parts and n-butanol parts and their combinations. The research proves that the petroleum ether parts, chloroform parts and n-butanol parts have obvious In vitro anti fungal ability of animal origin, therefore, the effective part can be applied to the treatment of skin fungal diseases.
【技术实现步骤摘要】
白花玉簪根抗动物源真菌有效部位制备方法及其应用
本专利技术涉及一种白花玉簪根乙醇提取物有效部位及其制备方法；本专利技术进一步涉及所述有效部位的药物组合；本专利技术还涉及所述有效部位在体外抗动物源真菌药物中的应用；属于民族药领域。
技术介绍
近年来受环境污染和生态系统失调等问题的影响，人与自然的冲突越来越频繁。人类面临着诸如不断出现的化学药品毒副作用、日益增加的医源性疾病的严重问题，“崇尚自然，返璞归真”的呼声越来越高，人们对天然药物和天然保健品的社会需求日益增长，而蒙医是世界传统医学的重要组成部分，它是蒙古族人民在长期适应自然，与疾病斗争的实践中不断创造、积累和精选出来的经验结晶。在其发展的过程中，不断吸取兄弟民族药物的理论和实践经验并结合本民族用药经验，总结出一套完整的药物理论应用于临床，起着防病、治病、保健等多种作用。事实上，蒙药距今已有2800多年的历史。《神农本草经》、《本草纲目》等古籍中均记载过蒙古族医药的经验和方剂。这些都为蒙药的发展创造了良好的契机。玉簪(Hostaplantaginea(Lam.)Ascherson)，别名白萼,为百合科多年生草本植物。据报道玉簪花的正丁醇部位对白色念珠菌、红色毛癣菌、犬小孢子菌、须癣毛癣菌和热带念珠菌有一定抑制作用，但其根部并无抗菌活性报道，更未见到白花玉簪根部及其有效部位抗动物源真菌作用研究与应用方面的报道，仅有根的水提取物经整体动物证明对艾氏腹水癌细胞具有高度抗肿瘤活。由于不同药用部位，其有效成分的差异较大，玉簪根部的抗真菌活性是无法预测的。因此，本专利技术对玉簪根部乙醇总提物及不同溶剂极性部位进行了体外抗动物源真菌活性的初步研究，活性实验表明：其根部乙醇总提物和多个极性部位具有良好的体外抗动物源真菌活性。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是，提供一种白花玉簪根部抗真菌有效部位及其制备方法。本专利技术的目的之二是，提供一种以所述有效部位为有效成分的药物组合物。本专利技术的目的之三是，将所述有效部位应用于治疗皮肤动物源真菌病害。本专利技术比较根部提取物不同溶剂萃取部位体外抗动物源真菌活性，确定了具有抗真菌有效部位及其制备方法。本专利技术所述白花玉簪提取物有效部位选自根部乙醇醇提物及其萃取得到的石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位之一及其组合。本专利技术的有效部位可以经过提取、浓缩、系列萃取得到，其制备方法包括以下步骤：1）取晒干的白花玉簪根，烘干，粉碎。用10倍量的70％乙醇将白花玉簪根部的粉末先浸泡半小时。2）70-80℃回流提取两次，每次两小时，过滤，收集滤液，浓缩至200mL。3）依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。减压浓缩得到各相关部位。本专利技术还提供以所述方法制备的各活性部位的药物组合。所述药物组合是以本专利技术的活性部位为有效成分，与药学上可接受的载体所组成，并以核实的药用制剂形式存在，这些制剂可以是片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、缓释片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、口服液、合剂、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴丸、滴丸剂、贴剂等。本专利技术进一步提供了各活性部位在抗动物源真菌的应用。为此进行的体外抗真菌实验以抑菌圈半径、抑菌率以及最小抑菌浓度为活性指标。实验结果表明，石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均具有较好的体外抗动物源真菌能力，可应用于治疗皮肤真菌的病害。附图说明：图1：真菌抑制率计算公式图2：白花玉簪根部乙醇提取物及不同极性部位真菌生长菌圈半径（cm）图3：白花玉簪根部乙醇提取物及不同极性部位抗真菌抑制率图4：白花玉簪根部乙醇提取物石油醚部位抗真菌MIC（mg/ml）图5：白花玉簪根部乙醇提取物氯仿部位抗真菌MIC（mg/ml）图6：白花玉簪根部乙醇提取物乙酸乙酯部位抗真菌MIC（mg/ml）图7：白花玉簪根部乙醇提取物正丁醇部位抗真菌MIC（mg/ml）图8：白花玉簪根部乙醇提取物水部位抗真菌MIC（mg/ml）具体实施方案：实施例1：各有效部位的制备方法：1）总提物提取取晒干的白花玉簪根300g，烘干，粉碎。用10倍量的70％乙醇将白花玉簪根部的粉末浸泡半小时。2）回流提取70-80℃回流提取两次，每次两小时，过滤，收集滤液，浓缩至200mL。3）梯度萃取依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取稀释后的浓缩液，合并相同有机相，减压浓缩，得到石油醚部位（0.2074g,提取率:0.0691%）、氯仿部位（1.5708g,提取率:0.524%）、乙酸乙酯部位（0.8724g,提取率：0.291%）、正丁醇部位（20.5678g，提取率：6.86%）和水部位（42.0368g，提取率：14%）。实施例2：白花玉簪根部乙醇提取物及其不同极性部位抑动物源真菌效果1）菌株复苏活化：将保存在4℃冰箱中的犬小孢子菌、须毛癣菌、石膏样小孢子菌接种到PDA培养基中，置于27℃真菌恒温培养箱中培养7d，活化，在活化好的菌落周围挑取菌丝体接种到PDA培养基中，置于25℃真菌培养箱中培养7d，使真菌恢复正常长势。2）白花玉簪根部乙醇提取物及其不同极性部位抗真菌活性测定：将实例1中乙醇提取物以及四种极性部位用500μL无菌蒸馏水溶解后用蒸馏水稀释至50mg/mL，在超净工作台中，水溶液经微孔滤膜（0.22μm）过滤后，按1:9加入融化状态的PDA培养基（40～50℃），使最终浓度为5mg/mL，然后倒平板。3）抑菌实验：采用菌丝生长速率法对抑菌活性进行测定，用无菌蒸馏水做空白对照，待凝固后接病原菌菌饼(6mm)，处理、对照各重复3次，置27℃真菌恒温培养箱内培养4d后，用十字交叉法测量菌落直径，取其平均值。按照下式计算抑制率见图1：实验结果见图2-图3。白花玉簪根部提取物及有效部位抗真菌活性见图2-图3，由图可知白花玉簪根部提取物及有效部位均具有广谱抗真菌活性，其中氯仿部位抗菌活性最优，石油醚和正丁醇部位次之，接着是乙酸乙酯部位，水部位活性较低。实施例3：白花玉簪根部乙醇提取物及其不同极性部位抑动物源真菌MIC测定96孔板，1～6号孔各加新鲜配制的PDB培养基100μL，于1号孔中加入配制的药液100μL（20mg/mL），采用倍比稀释法于2～6孔稀释药物。1～6孔中分别加入新鲜配制的菌液100μL（106CFU/mL）。第9孔中只加入200μL菌液，第10孔中只加入200μL液体培养基，第11孔加入100μLPDB培养基和100μL菌液，第12孔中加入100μLPDB培养基和100μL药液，分别作为对照。将各板置于35℃培养箱中培养48小时后，与对照组比较，观察药物对受试菌的生长抑制作用。实验结果见图4-图8。抗真菌活性极性部位MIC测本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一组具有抗动物源真菌作用的白花玉簪根部乙醇提取物及其活性部位，其特征是所述部位选自白花玉簪根部乙醇醇提物及其萃取得到的石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位之一及其组合。/n
【技术特征摘要】
1.一组具有抗动物源真菌作用的白花玉簪根部乙醇提取物及其活性部位，其特征是所述部位选自白花玉簪根部乙醇醇提物及其萃取得到的石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位之一及其组合。
2.一种制备如权利要求1所述的活性部位的方法，其特征是所述方法包括以下步骤：（1）取晒干的白花玉簪根，烘干，粉碎；用10倍量的70％乙醇将白花玉簪根部的粉末先浸泡半小时；（2）70-80℃回流提取两次，每次两小时，过滤，收集滤液，浓缩；（3）依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,减压浓缩得到各相关部位。
3.权利要求1所述活性部位为有效成分与药学上可接受的载体所组成的药物组合。
【专利技术属性】
技术研发人员：梁晓霞，胡云锴，吴强，王昊，王涵，杨星月，冯长青，黄思慧，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51
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