溶瘤病毒疗法制造技术

本文公开的主题涉及由溶瘤病毒诱导的肿瘤浸润T细胞(“OV诱导T细胞”)，制备和使用所述OV诱导T细胞用于过继性T细胞疗法的方法。本文公开的主题还涉及溶瘤病毒和武装溶瘤病毒，制备和使用所述溶瘤病毒的方法，以及包含所述溶瘤病毒的药物组合物和试剂盒。

oncolytic virotherapy

The subject matter disclosed herein relates to tumor infiltrating T cells (\ov induced T cells\) induced by oncolytic viruses, methods for preparing and using the OV induced T cells for adoptive T cell therapy. The subject matter disclosed herein also relates to oncolytic viruses and armed oncolytic viruses, methods for preparing and using the oncolytic viruses, and pharmaceutical compositions and kits containing the oncolytic viruses.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】溶瘤病毒疗法优先权声明本申请要求2017年2月3日提交的美国临时专利申请序列号62/454,526的优先权，该申请的内容通过引用整体纳入本文。资助信息无。1.介绍本文公开的主题涉及以可表达形式编码免疫调节剂分子的武装溶瘤病毒、溶瘤病毒，以及制备和使用所述溶瘤病毒的组合物和方法。本文公开的主题还涉及由溶瘤病毒诱导的肿瘤浸润T细胞(“OV诱导T细胞”)，以及制备和使用所述OV诱导T细胞用于过继性T细胞疗法的方法。2.
技术介绍
在癌细胞中选择性复制并杀死癌细胞的溶瘤病毒通过多种方式发挥其抗癌作用(BartlettDL等，2013，MolecularCancer12：103-120)。首先，正如其名称所暗示的，是细胞裂解，其可以通过细胞凋亡、坏死、焦磷酸化、自噬或这些的组合来实现(GuoZS等，2014，FrontOncol4:74)。此外，溶瘤病毒可以攻击癌症的血液供应，导致感染细胞和非感染细胞的细胞凋亡和坏死。最后，溶瘤病毒诱导癌细胞的免疫原性细胞死亡(ICD)，释放并向原初T细胞呈递危险信号分子(信号0)、还有炎性细胞因子和交叉存在的肿瘤相关抗原(TAA)，由此引发抗肿瘤免疫(GuoZS等，2014，FrontOncol4:74)。强效溶瘤病毒不仅引发强效全身性适应性抗肿瘤免疫，而且还促进肿瘤特异性CD8+T细胞向肿瘤组织的转移(BartlettDL等，2013，MolCancer12：103；GuoZS等，2017,8：555)。这种针对癌症的免疫应答不限于被感染的癌细胞，而是扩展到转移性病变。FDA在2015年批准首创新药T-VEC用于治疗晚期黑色素瘤，这展示了这种新型癌症治疗方法的潜力(AndtbackaRH等，2015，JClinOncol33：2780-8)。尽管它们具有优势，但迄今为止，溶瘤病毒还面临许多挑战，这包括需以足够的数量抵达肿瘤结节内的癌细胞、抗病毒免疫应答和高度免疫抑制的肿瘤环境(ZouW.，2005，NatRevCancer5)：263-74)。此外，肿瘤特异性T细胞的浸润，如果它们确实产生并被激活，会遇到障碍，主要是要渗透到肿瘤组织中在那里对癌细胞和相关的基质细胞发挥其细胞毒性。调节免疫系统的药剂可以有利地改善这些难题—例如增加抗癌免疫力和/或降低抗病毒免疫力的药物。然而，有此免疫调节能力的药物—细胞因子等—如果全身性分布可能对接受治疗的对象有复杂的潜在危险性。3.专利技术概述本文公开的主题涉及溶瘤病毒疗法背景下促进抗癌免疫的组合物和方法。某些实施方式中，过继性T细胞疗法作为使用溶瘤病毒的抗癌方案的一部分，该方案促进针对癌细胞的免疫应答，任选地，溶瘤病毒可与免疫调节剂一起给药。某些实施方式中，免疫调节剂与溶瘤病毒相联。某些实施方式中，本文公开的主题提供产生肿瘤浸润性溶瘤病毒诱导T细胞的方法，包括：(a)给予患有癌症的对象有效量的溶瘤病毒以诱导一种或多种T细胞浸润到癌症中；(b)从对象的癌症中分离肿瘤浸润T细胞；和(c)离体(exvivo)扩增肿瘤浸润T细胞。某些实施方式中，本文公开的主题提供治疗患有癌症的对象的方法，包括给予所述对象本文公开的一种或多种肿瘤浸润性溶瘤病毒诱导T细胞。某些实施方式中，本文公开的主题提供治疗患有癌症的对象的方法，包括：(a)给予所述对象有效量的溶瘤病毒以诱导一种或多种T细胞浸润到癌症中；(b)从对象的癌症中分离肿瘤浸润T细胞；(c)离体扩增肿瘤浸润T细胞；和(d)将经扩增的肿瘤浸润T细胞转移至患有癌症的对象。某些实施方式中，溶瘤病毒是痘苗病毒(vacciniavirus)。某些实施方式中，溶瘤病毒是重组痘苗病毒，具有胸苷激酶基因失活突变、痘苗病毒生长因子(vacciniagrowthfactor)基因失活突变或以上两者。某些实施方式中，溶瘤病毒是单纯性疱疹病毒。某些实施方式中，溶瘤病毒是腺病毒。某些实施方式中，肿瘤浸润T细胞在IL-2和IL-7存在下离体扩增。某些实施方式中，扩增肿瘤浸润T细胞包括肿瘤浸润T细胞与树突细胞和癌细胞共培养。某些实施方式中，扩增肿瘤浸润T细胞包括肿瘤浸润T细胞与细胞因子和/或药剂共培养。某些实施方式中，细胞因子和/或药剂包括以下一项或多项：IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL-24、IL-27、IFN-α、IFN-α2、IFN-β、或IFN-γ、TNF-α、TNF-β和GM-CSF。某些实施方式中，扩增肿瘤浸润T细胞包括将肿瘤浸润T细胞与IL-2、IL-7和/或GSK3b一起培养。某些实施方式中，在将肿瘤浸润T细胞转移至患癌对象之前，患癌对象接受癌症疗法的治疗。某些实施方式中，患癌对象进一步接受癌症疗法的治疗。某些实施方式中，患癌对象进一步接受一种或多种外源性细胞因子和/或药剂。某些实施方式中，在肿瘤浸润T细胞转移后，患癌对象进一步接受外源性IL-2。某些实施方式中，肿瘤浸润T细胞是腹膜内或瘤内转移的。某些实施方式中，本文公开的主题是溶瘤病毒用于治疗患癌对象的用途。某些实施方式中，本文公开的主题是溶瘤病毒用于产生肿瘤浸润性溶瘤病毒诱导T细胞的用途。某些实施方式中，本文公开的主题是肿瘤浸润性溶瘤病毒诱导T细胞用于治疗患癌对象的用途。某些实施方式中，肿瘤浸润性溶瘤病毒诱导T细胞是用包括以下步骤的方法产生的：(a)给予患有癌症的对象有效量的溶瘤病毒以诱导一种或多种T细胞浸润到癌症中；(b)从对象的癌症中分离肿瘤浸润T细胞；和(c)离体扩增肿瘤浸润T细胞。多种实施方式中，本文公开的主题提供溶瘤病毒、诱导的肿瘤浸润T细胞、包含所述病毒和T细胞的治疗组合物，以及治疗所患病症免疫调节对其有益的对象的方法，包括各种癌症患者。某些实施方式中，本文公开的主题提供编码膜关联蛋白的溶瘤病毒，所述膜关联蛋白包含与锚定肽相连免疫调节剂分子。某些实施方式中，本文公开的主题提供在其基因组内含有膜关联蛋白编码核酸的溶瘤病毒，所述膜关联蛋白包含与锚定肽相连的免疫调节剂分子。某些实施方式中，溶瘤病毒是痘苗病毒。某些实施方式中，溶瘤病毒是重组痘苗病毒，具有胸苷激酶基因失活突变、痘苗病毒生长因子基因失活突变或以上两者。某些实施方式中，编码连接锚定肽的免疫调节剂分子的核酸与p7.5e/l启动子操作性相连。某些实施方式中，锚定肽含有GPI-锚受体肽或PD-L1跨膜结构域。某些实施方式中，免疫调节剂分子通过连接肽与锚定肽连接。某些实施方式中，连接区是柔性连接区或是刚性连接区。某些实施方式中，免疫调节剂分子是白细胞介素-2和/或干扰素-γ和/或肿瘤坏死因子-α。某些实施方式中，溶瘤病毒以治疗组合物的形式给药。某些实施方式中，本文公开的主题提供治疗组合物，其包含溶瘤病毒和生理缓冲液。某些实施方式中，治疗组合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括：/n(a)给予所述对象有效量的溶瘤病毒以诱导一种或多种T细胞浸润到癌症中；/n(b)从所述对象的癌症中分离肿瘤浸润T细胞；/n(c)离体扩增肿瘤浸润T细胞；和/n(d)将经扩增的肿瘤浸润T细胞转移至所述患有癌症的对象。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170203 US 62/454,5261.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括：
(a)给予所述对象有效量的溶瘤病毒以诱导一种或多种T细胞浸润到癌症中；
(b)从所述对象的癌症中分离肿瘤浸润T细胞；
(c)离体扩增肿瘤浸润T细胞；和
(d)将经扩增的肿瘤浸润T细胞转移至所述患有癌症的对象。


2.如权利要求1所述的方法，所述溶瘤病毒是痘苗病毒。


3.如权利要求1所述的方法，所述溶瘤病毒是单纯性疱疹病毒。


4.如权利要求1所述的方法，所述溶瘤病毒是重组痘苗病毒，具有其胸苷激酶基因失活突变、痘苗病毒生长因子基因失活突变或以上两者。


5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，所述溶瘤病毒包含编码免疫调节剂分子的核酸。


6.如权利要求1-4中任一项所述的方法，所述溶瘤病毒包含编码膜关联蛋白的核酸，所述膜关联蛋白包含免疫调节剂分子。


7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述癌症是局部侵入性的。


8.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述癌症是转移性的。


9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，离体扩增肿瘤浸润T细胞包括所述肿瘤浸润T细胞与树突细胞和癌细胞共培养。


10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中，扩增肿瘤浸润T细胞包括所述肿瘤浸润T细胞与细胞因子和/或药剂共培养。


11.如权利要求10所述的方法，所述细胞因子和/或药剂包括以下一项或多项：IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL-24、IL-27、IFN-α、IFN-α2、IFN-β、或IFN-γ、TNF-α、TNF-β和GM-CSF。


12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，扩增肿瘤浸润T细胞包括所述肿瘤浸润T细胞与IL-2、IL-7和/或GSK3b共培养。


13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，在将肿瘤浸润T细胞转移至所述患有癌症的对象之前，所述患有癌症的对象接受癌症疗法的治疗。


14.如权利要求1-12中任一项所述的方法，还包括用癌症疗法治疗所述患有癌症的对象。


15.如权利要求1-12中任一项所述的方法，还包括给予所述患有癌症的对象一种或多种外源性细胞因子和/或药剂。


16.如权利要求1-12中任一项所述的方法，还包括在肿瘤浸润T细胞转移后给予所述患有癌症的对象外源性IL-2。


17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，所述肿瘤浸润细胞腹膜内转移。


18.如权利要求1-16中任一项所述的方法，所述肿瘤浸润细胞瘤内转移。


19.一种产生肿瘤浸润性溶瘤病毒诱导T细胞的方法，所述方法包括：
(a)给予患有癌症的对象有效量的溶瘤病毒以诱导一种或多种T细胞浸润到癌症中；
(b)从所述对象的癌症中分离肿瘤浸润T细胞；和
(c)离体扩增肿瘤浸润T细胞。


20.如权利要求19所述的方法，所述溶瘤病毒是痘苗病毒。


21.如权利要求19所述的方法，所述溶瘤病毒是单纯性疱疹病毒。


22.如权利要求19所述的方法，所述溶瘤病毒是重组痘苗病毒，具有其胸苷激酶基因失活突变、痘苗病毒生长因子基因失活突变或以上两者。


23.如权利要求19-22中任一项所述的方法，所述溶瘤病毒包含编码免疫调节剂分子的核酸。


24.如权利要求19-22中任一项所述的方法，所述溶瘤病毒包含编码膜关联蛋白的核酸，所述膜关联蛋白包含免疫调节剂分子。


25.如权利要求19-24中任一项所述的方法，其中，在IL-2、IL-7和/或GSK3b存在下离体扩增肿瘤浸润T细胞。


26.一种治疗患有癌症的对象的方法，包括给所述对象权利要求19-25中任一项所述方法产生的一种或多种肿瘤浸润性溶瘤病毒诱导T细胞。


27.一种溶瘤病毒，其编码包含与锚定肽相连的免疫调节剂分子的膜关联蛋白。

【专利技术属性】
技术研发人员：郭宗圣，D·巴特赖特，刘祖强，M·费斯特，
申请(专利权)人：匹兹堡大学联邦系统高等教育，
类型：发明
国别省市：美国;US