本发明专利技术公开了与免疫缀合物有关的方法和组合物。特别公开了免疫缀合物，所述免疫缀合物包含IgG3的Fc部分以及因子VII轻链或因子VII。还公开了免疫缀合物蛋白，其中所述免疫缀合物蛋白包含缀合到因子VII的IgG1和IgG3免疫球蛋白的杂合Fc区。这些免疫缀合物能够靶向表达组织因子(TF)的细胞。
Methods and compositions related to IgG3 immunoconjugates targeting tissue factors
The invention discloses methods and compositions related to immunoconjugates. In particular, immunoconjugates comprising the Fc portion of IgG3 and the light chain or factor VII of factor VII are disclosed. Also disclosed is an immunoconjugate protein, wherein the immunoconjugate protein comprises a heterozygous Fc region of IgG1 and IgG3 immunoglobulins conjugated to factor VII. These immunoconjugates can target cells expressing tissue factor (TF).
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与靶向组织因子的IGG3免疫缀合物有关的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求2017年3月14日提交的美国临时申请号62/471,045；2017年10月24日提交的美国临时申请号62/576,278；以及2018年1月29日提交的美国临时申请号62/623,269的权益，所有这三份临时申请据此全文以引用方式并入本文。政府支持条款本专利技术是在由国家转化科学促进中心(NationalCenterforAdvancingTranslationalSciences)授予的批准号UL1TR001070的政府资助下完成的。政府对本专利技术拥有一定的权利。
技术介绍
组织因子(“TF”)是作为凝血级联主要引发剂的跨膜糖蛋白。在正常生理状况下，活性TF不与血液接触。在血管损伤期间，内皮下TF和胶原暴露于血液会导致凝血因子和血小板活化，并且随后引起止血栓子形成。多种临床环境中TF表达的不当诱导能够引起危及生命的血栓形成和/或促成病理性并发症。据信斑块破裂后的TF暴露会引起血栓性闭塞，从而引起急性心肌梗塞和中风。在这些环境中，凝血因子所活化的促炎信号通路还会促成水肿形成和梗塞面积增加。与血管成形术相关的血管损伤引起SMC上的TF上调，据信这会诱导与再狭窄相关的细胞信号通路。癌症和革兰氏阴性脓毒症中的TF过表达引起危及生命的血栓形成以及炎性通路的活化。TF是病理性血管生成的调节剂。体内研究表明，TF也是体内唯一病理性血管生成血管内皮细胞(VEC)表面受体，这是因为其在体内选择性表达于患者或动物模型的肿瘤血管(Contrino等人，1996年；Folkman等人，1996年；Hu等人，1999年；Hu等人，2001年；Cheng等人，2011年；Duanmu等人，2011年)、眼部(Bora等人，2003年)和异位子宫内膜(Krikun等人，2010年)新生血管中的血管生成VEC上。血管内皮生长因子(VEGF)在血管生成依赖性癌和非恶性人疾病(Ferrara等人，2002年)诸如黄斑变性(Klagsbrun等人，1987年)、类风湿性关节炎(Afuwape等人，2002年)和子宫内膜异位(Fujimoto等人，1999年)中起着中心作用。具体地讲，VEGF通过结合于这些血管生成依赖性疾病的病理性新生血管(通常为微血管或毛细血管)中VEC上的VEGR受体来刺激血管生成(Hu等人，《血管生成》(Angiogenesis)，2016年)。通过使用VEGF诱导的体外血管生成血管内皮模型，证实了TF是血管生成特异性受体及因子VII靶向治疗的靶标，从而表明TF靶向剂能够具有治疗癌(实体癌和白血病)、湿性年龄相关性黄斑变性(AMD)、子宫内膜异位和类风湿性关节炎的治疗潜能。TF是一种常见又有特异性的生物标志物，而且是实体癌中的癌细胞、癌干细胞(CSC)(Hu等人，《肿瘤靶标》(Oncotarget)，2016年)和肿瘤血管内皮细胞的治疗靶标。TF在这些癌细胞中高表达，例如，乳腺癌中表达率为80％-100％，三阴性乳腺癌中表达率为50％-85％(Hu等人，《癌症免疫研究》(CancerImmunolRes)，2018年)，肺癌中表达率为40％-80％，并且卵巢癌中表达率为84％。这三种类型的癌症不仅难以控制，而且是美国和全世界的主要死因且通常会形成基于CSC的化疗和放疗抗性(Vidal等人，2014年；Moncharmont等人，2012年；Koch等人，2010年)。除了乳腺、肺和卵巢癌之外，TF还以高百分比表达于许多其他人实体癌以及白血病和肉瘤中(Hu，《抗体》(Antibodies)，2018年)，例如原发性黑色素瘤中表达率为95％且转移性黑色素瘤中表达率为100％，胰腺癌中表达率为53％-90％，结肠直肠癌中表达率为57％-100％，肝细胞癌中表达率为63％-100％，原发性和转移性前列腺癌中表达率为60％-78％，并且神经胶质瘤中表达率为47％-75％。最近已证实，乳腺、肺和卵巢癌中的癌干细胞表达了TF，并且TF靶向剂能够根除这些表达TF的癌干细胞而不出现药物抗性(Hu等人，《肿瘤靶标》(Oncotarget)，2016年)。还已证实，实验动物的一种AMD模型脉络膜新生血管(CNV)表达了TF(Bora等人，2003年)。最近已证实，异位子宫内膜病灶中的血管生成血管内皮细胞表达了TF(Krikun等人，2010年)。需要的是与免疫靶向剂有关的方法和组合物，该免疫靶向剂特异性地靶向表达TF的血管生成VEC和癌细胞，并且表现出相比于靶向表达TF的细胞的其他试剂更强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)。
技术实现思路
本文公开了包含免疫缀合物蛋白的组合物，其中所述免疫缀合物蛋白包含缀合到因子VII轻链或全长(含或不含K341A)的IgG3免疫球蛋白的Fc区。这些免疫缀合物在本文中称为第三代靶向组织因子的ICON，分别被命名为L-ICON3和ICON3。还公开了使用L-ICON3和ICON3的方法和试剂盒。本文还公开了包含免疫缀合物蛋白的组合物，其中所述免疫缀合物蛋白包含缀合到因子VII轻链或全长(含或不含K341A)的IgG1和IgG3免疫球蛋白的杂合Fc区。这些免疫缀合物在本文中称为第四代靶向组织因子的ICON，分别被命名为L-ICON4和ICON4。在附图和下面的描述中阐述了本专利技术的一个或多个实施方案的细节。根据下面的描述和附图以及权利要求，本专利技术的其他特征、目标和优点将显而易见。附图说明并入本说明书中并且构成本说明书一部分的附图示出了本公开的若干方面，并与说明书一起用于解释本公开的原理。图1A至图1C示出了靶向组织因子的免疫缀合物(ICON)的第三代和第四代的示意图和表征。1A示出了靶向TF的免疫缀合物(ICON)的第一代、第二代、第三代(L-ICON3和ICON3)和第四代(L-ICON4和ICON4)的示意图。1B示出了ICON1、L-ICON1、L-ICON3和ICON3的分子量。1C示出了L-ICON1和L-ICON3的荧光蛋白印迹。注意：L-ICON1和ICON1蛋白的上样量为3μg/泳道，并且L-ICON3蛋白的量为L-ICON1和ICON1的约一半(1.5μg)。图2示出了重组L-ICON1和L-ICON3蛋白之间的亲和纯化差异。将从L-ICON1或L-ICON3的CHO生产细胞获取的、补充有1μg/ml维生素K1的1ml无血清培养基(SFM4CHO)(西格玛公司(Sigma))与蛋白A或蛋白G磁微珠(伯乐公司(Bio-Rad))一起温育，并且将所捕获的蛋白在1×SDS上样缓冲液中洗脱并通过SDS-PAGE进行分析，然后使用1:10,000稀释的抗人IgGHRP缀合物(西格玛公司(Sigma))和ECL试剂(Peirce公司)进行蛋白印迹。不含L-ICON蛋白的新鲜无血清培养基(SFM)用作阴性培养基对照。图3A至图3F示出了L-ICON3蛋白能够结合鼠和人癌细胞两者，这允许从动物研究转化成人临床试验并且表明L-ICON3疗法具有治疗多种实本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种包含免疫缀合物蛋白的组合物，其中所述免疫缀合物蛋白包含缀合到因子VII的IgG3免疫球蛋白的Fc区。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170314 US 62/471,045;20171024 US 62/576,278;20181.一种包含免疫缀合物蛋白的组合物，其中所述免疫缀合物蛋白包含缀合到因子VII的IgG3免疫球蛋白的Fc区。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述因子VII是因子VII轻链。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述因子VII是全长。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述因子VII包含K341A突变。
5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物靶向表达组织因子(TF)的细胞。
6.根据权利要求2所述的组合物，其中因子VII轻链包含人和鼠因子VII。
7.根据权利要求1所述的组合物，其中IgG3包含R435H突变。
8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述免疫缀合物蛋白包含SEQIDNO:2。
9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述免疫缀合物蛋白由包含SEQIDNO:1的核酸编码。
10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述免疫缀合物蛋白被编码为表达载体中的分泌分子。
11.根据权利要求6所述的组合物，其中所述表达载体是复制缺陷型腺病毒载体。
12.根据权利要求6所述的组合物，其中所述表达载体是腺相关表达载体。
13.根据权利要求1所述的组合物，其中光敏剂偶联到所述免疫缀合物。
14.根据权利要求10所述的组合物，其中所述光敏剂包含光动力学染料。
15.一种用于治疗或预防对其有需要的受试者的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1所述的组合物。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述疾病与组织因子(TF)表达相关。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述疾病包括涉及已血管化的肿瘤、血栓...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡志伟，
申请(专利权)人：俄亥俄州创新基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US
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