一种长效抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种长效抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法，包括(1)将一定量再生人发角蛋白完全溶解于98v/v％甲酸溶液，搅拌均匀，角蛋白溶液；(2)采用冷冻干燥，得到角蛋白冻干海绵；(3)将角蛋白冻干海绵经等离子处理器处理活化；(4)将活化处理的角蛋白冻干海绵浸泡在重组人表皮生长因子hEGF、二硫苏糖醇和N,N‑二(癸基丙胺基)‑巯基甘氨酸的溶液中进行负压闪爆，之后进行接枝反应；(5)将完成接枝反应的角蛋白海绵离心冻干。本发明专利技术制备的角蛋白海绵是一种能够诱导皮肤组织损伤部的再生的医疗用材料，能够抑制伤口微生物的生长，刺激皮肤成纤维细胞的增殖，促进伤口愈合。

Preparation of a long-term antibacterial and healing promoting keratin dressing

The invention discloses a preparation method of long-term antibacterial and healing promoting keratin dressing, which comprises: (1) completely dissolving a certain amount of regenerated human hair keratin in 98V / v% formic acid solution, stirring evenly, keratin solution; (2) obtaining keratin lyophilized sponge by freeze-drying; (3) activating keratin lyophilized sponge by plasma processor; (4) lyophilizing the activated keratin sea The sponge was immersed in the solution of recombinant human epidermal growth factor hggf, dithiothreitol and N, n \u2011 bis (decylamino) - mercaptoglycine for negative pressure flash, and then grafted; (5) the grafted keratin sponge was centrifugally freeze-dried. The keratin sponge prepared by the invention is a medical material which can induce the regeneration of the injured part of skin tissue, inhibit the growth of wound microorganism, stimulate the proliferation of skin fibroblasts, and promote wound healing.

【技术实现步骤摘要】
一种长效抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法
本专利技术涉及生物医学工程领域，具体涉及一种长效抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法。
技术介绍
在临床上，由于伤口表面是一个温暖而潮湿的环境，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌等病原体在伤口上快速繁殖，造成伤口易感染且不易愈合。为了遏制微生物繁殖，控制伤口感染，大量医用敷料被广泛应用于伤口覆盖保护，并在医用敷料使用的同时考虑加入抗生素或其他抗菌剂，以协助控制止血、保护伤口、减少感染、吸收分泌物、保持体温和促进伤口愈合。在新型抗菌剂中，载银抗菌敷料因其优良的抗菌性和无耐药性，在医用敷料中的应用已被广泛重视，如应用于烧烫伤外科、创伤外科、多种疾病引起的皮肤溃疡，特别是用于久治不愈的褥疮或其他慢性感染创面。但是纳米银对人体和环境存在一定的危险性。有研究报道纳米银对动物生殖系统有较大影响。因此，需要一种新型的医用敷料，能够持久抗菌，且具有生物相容性和生态相容性。角蛋白具有可生物降解、生物活性高和相容性好的优势，从人发中提取的角蛋白还具有低免疫排异性。相对于其他本体材料，角蛋白来源几乎不受限制，因而在化妆品领域的研究应用受到越来越多的重视。近年来，人发角蛋白以凝胶、海绵支架、涂层、膜以及复合材料的形式应用于神经材料、皮肤敷料、细胞培养、药物载体以及软组织修复等方面，显示出其在再生医学领域的发展潜力。角蛋白是各种类型上皮细胞的主要结构蛋白，对伤口愈合有重要作用。因此，将再生人发角蛋白用于面膜的基质能够大大减弱其致敏性，生物相容性更佳。但是由于角蛋白的疏水、耐酸、耐碱特性，对其进行化学加工不易，因此分子间作用力较弱，角蛋白材料较松散，机械强度不高、弹性差。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种长效抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法，本专利技术提供的方法制备得到的角蛋白敷料能够抑制微生物生长，修复皮肤细胞。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种长效抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：S1：将再生人发角蛋白完全溶解于98v/v％甲酸溶液，搅拌均匀，得到角蛋白溶液；S2：将所述角蛋白溶液冷冻干燥，得到角蛋白冻干海绵；S3：将所述角蛋白冻干海绵经等离子处理器处理活化，得活化角蛋白冻干海绵；S4：将所述活化角蛋白冻干海绵浸泡在含有重组人表皮生长因子、二硫苏糖醇和N,N-二(癸基丙胺基)-巯基甘氨酸的混合溶液中进行负压闪爆，之后进行接枝反应，离心冻干得长效抗菌促愈合角蛋白敷料。优选的，步骤S1中，所述角蛋白溶液中再生人发角蛋白的浓度为10～30g/L。优选的，步骤S2中，冷冻干燥的温度为-30～-20℃，真空度为0.100～0.024mBar，冻干时间为3～5d。优选的，步骤S3中，所述等离子处理器处理的条件为：气体采用氮气或氧气，处理功率为250～300W，压强50～60Pa，处理时间为10～15min。优选的，步骤S4中，所述混合溶液中重组人表皮生长因子的浓度为40～80mg/L，二硫苏糖醇的浓度为4～8g/L，N,N-二(癸基丙胺基)-巯基甘氨酸的浓度为5～10g/L。优选的，步骤S4中，所述负压闪爆的真空度为0.100～0.024mBar。优选的，步骤S4中，所述接枝反应的浸泡浴比为1:100～300，反应温度为0～4℃，反应时间为12～24h。优选的，步骤S5中，所述离心的重力加速度为10000g，时间为10min，所述冻干的温度为-30～-20℃，真空度为0.100～0.024mBar，冻干时间为3～5d。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果：1)本专利技术利用角蛋白中大量的胱氨酸，加入二硫苏糖醇对其二硫键进行重整连接，大大优化了其力学性能，增大了角蛋白敷料拉伸强度和断裂伸长率。2)同时，抗菌剂N,N-二(癸基丙胺基)-巯基甘氨酸也具有巯基能够通过等离子处理接枝到角蛋白和重组人表皮生长因子上，能够使得重组人表皮生长因子具有一定的抗菌活性。敷料使用在皮肤表面，皮肤有拉伸和形变。所以敷料要有一定的强度和柔韧性。另外，抗菌剂接枝到角蛋白上能够使敷料长期抗菌，抗菌剂分子不易发生降解变质；抗菌剂接枝到重组人表皮生长因子上能够将抗菌作用渗透至伤口内部伤口内部有许多组织渗出液，容易滋生细菌，但是抗菌剂释放太多会刺激伤口愈合，抗菌剂太少有达不到抗菌效果，通过重组人表皮生长因子携带抗菌剂可以有效控制抗菌剂释放量。附图说明图1本专利技术实施例及对比例处理下的小鼠L929成纤维细胞增殖率具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为了进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制。本专利技术所有原料，对其来源没有特别限制，在市场上购买的或按照本领域技术人员熟知的常规方法制备的即可。本专利技术提供了一种长效抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：S1：将再生人发角蛋白完全溶解于98v/v％甲酸溶液，搅拌均匀，得到角蛋白溶液；S2：将所述角蛋白溶液冷冻干燥，得到角蛋白冻干海绵；S3：将所述角蛋白冻干海绵经等离子处理器处理活化，得活化角蛋白冻干海绵；S4：将所述活化角蛋白冻干海绵浸泡在含有重组人表皮生长因子、二硫苏糖醇和N,N-二(癸基丙胺基)-巯基甘氨酸的混合溶液中进行负压闪爆，之后进行接枝反应，离心冻干得长效抗菌促愈合角蛋白敷料。具体的，首先将再生人发角蛋白完全溶解于98v/v％甲酸溶液，搅拌均匀，得到角蛋白溶液。角蛋白溶液中再生人发角蛋白的浓度优选为10～30g/L，更优选为20g/L。得到角蛋白溶液后，将角蛋白溶液冷冻干燥，得到角蛋白冻干海绵。本专利技术中冷冻干燥的温度优选为-30～-20℃，更优选为-30℃，真空度优选为0.100～0.024mBar，更优选为0.024mBar，冻干时间优选为3～5d，更优选为4d。得到角蛋白冻干海绵后，经等离子器处理活化，得到活化角蛋白冻干海绵。本专利技术中等离子器处理的条件为：气体优选采用氮气或氧气，更优选为氧气，处理功率优选为250～300W，更优选为280W，压强优选为50～60Pa，更优选为55Pa，处理时间优选为10～15min，更优选为15min。得到活化角蛋白冻干海绵后，将活化角蛋白冻干海绵浸泡在含有重组人表皮生长因子、二硫苏糖醇和N,N-二(癸基丙胺基)-巯基甘氨酸的混合溶液中进行负压闪爆，之后进行接枝反应，离心冻干得长效抗菌促愈合角蛋白敷料。本专利技术混合溶液中重组人表皮生长因子的浓度优选为40～80mg/L，更优选为60mg/L，二硫苏糖醇的浓度优选为4～8g/L，更优选为6g/L，N,N-二(癸基丙胺基)-巯基甘氨酸的浓优选为5～10g/L，更优选为6g/L。为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术提供的一种长效抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法进行详细说明，本专利技术的保护范围不受以下实施例的限制。实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1：将再生人发角蛋白完全溶解于98v/v％甲酸溶液，搅拌均匀，得到角蛋白溶液；/nS2：将所述角蛋白溶液冷冻干燥，得到角蛋白冻干海绵；/nS3：将所述角蛋白冻干海绵经等离子处理器处理活化，得活化角蛋白冻干海绵；/nS4：将所述活化角蛋白冻干海绵浸泡在含有重组人表皮生长因子、二硫苏糖醇和N,N-二(癸基丙胺基)-巯基甘氨酸的混合溶液中进行负压闪爆，之后进行接枝反应，离心冻干得抗菌促愈合角蛋白敷料。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：将再生人发角蛋白完全溶解于98v/v％甲酸溶液，搅拌均匀，得到角蛋白溶液；
S2：将所述角蛋白溶液冷冻干燥，得到角蛋白冻干海绵；
S3：将所述角蛋白冻干海绵经等离子处理器处理活化，得活化角蛋白冻干海绵；
S4：将所述活化角蛋白冻干海绵浸泡在含有重组人表皮生长因子、二硫苏糖醇和N,N-二(癸基丙胺基)-巯基甘氨酸的混合溶液中进行负压闪爆，之后进行接枝反应，离心冻干得抗菌促愈合角蛋白敷料。


2.根据权利要求1所述的一种抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述角蛋白溶液中再生人发角蛋白的浓度为10～30g/L。


3.根据权利要求1所述的一种抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述冷冻干燥的温度为-30～-20℃，真空度为0.100～0.024mBar，冻干时间为3～5d。


4.根据权利要求1所述的一种抗菌促愈合角蛋白敷料的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述等离子处理器处...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤佳鹏，葛彦，刘希文，朱俐，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32