The invention relates to a fluorescent detection method for alkaline phosphatase activity, which takes 4 \u2011 hydroxyphenyl sodium phosphate (4 \u2011 HPP) as a substrate, in an aqueous solution, the substrate molecule is hydrolyzed by alkaline phosphatase to generate 1,4 \u2011 hydroquinone (HQ), 1,4 \u2011 hydroquinone can react with 3 \u2011 (2 \u2011 aminoethyl amino) propyltrimethoxysilane (Damo) added subsequently to generate green fluorescence emission Silicon nanoparticles (SiNPs). The higher the alkaline phosphatase activity in the system, the more fluorescent silicon nanoparticles are generated, and the greater the fluorescence intensity. According to the change of fluorescence intensity of the detection solution, the quantitative analysis of alkaline phosphatase activity is carried out. Compared with the prior art, the reagent medicine required by the invention is simple and easy to obtain, convenient to operate, fast and accurate, and provides a sensitive and reliable method for quantitative detection of alkaline phosphatase activity in clinical samples. The detection limit of the fluorescent detection method is 0.1mu/ml, which has the advantages of high sensitivity, high selectivity, wide linear range, etc.
【技术实现步骤摘要】
一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法
本专利技术属于分析检测
,具体涉及一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法。
技术介绍
碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP,EC3.1.3.1)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶,可以催化多种含磷酸酯基底物的去磷酸化过程,对于细胞生长、凋亡进程中的信号传导和细胞内调节有极其重要的作用。碱性磷酸酶是反映肝胆、骨骼等系统疾病的重要指标,当人体患有黄疽、肝癌、胆汁淤积性肝炎等疾病时,血清中的碱性磷酸酶含量将会明显升高;当发生骨折或患有骨软化症、佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松等骨胳疾病时,血清中的碱性磷酸酶含量也会升高。因此,建立灵敏高效并能在临床血液中进行检测的碱性磷酸酶活性测定方法显得尤为重要。一直以来,许多分析化学和检测技术的研究者致力于发展性能优良的分析方法用于碱性磷酸酶活性检测。传统检测碱性磷酸酶活性的方法包括同位素标记法,操作复杂,耗时低效,且需要危害较大的放射性同位素标记物。之后,研究者又基于色谱法,比色法,化学发光法,电化学法,荧光法,表面增强共振拉曼散射等不同的分析技术创建了一系列碱性磷酸酶活性的检测新方法。其中,荧光传感技术由于其简单灵敏、实时性和在体检测等优势,一直是人们的研究重点。目前的碱性磷酸酶荧光检测方法,大多数通过繁琐的有机合成,制备出较为复杂的底物分子,通过底物分子和碱性磷酸酶酶解产物之间的荧光差别来进行检测。然而,基于商业化的简单小分子,反应生成荧光物质的过程,构建的荧光“点亮”型生物分析技术,通 ...
【技术保护点】
1.一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法,其特征在于,包括以下步骤:/n步骤一:将4-羟基苯基磷酸钠水溶液分别与不同已知活性的碱性磷酸酶标准溶液在缓冲溶液中混合孵育,得到一系列混合溶液;/n步骤二:在步骤一制备的一系列混合溶液中分别加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液,进一步混合孵育,进行荧光光谱测试;/n步骤三:利用碱性磷酸酶标准溶液活性和荧光光谱强度的线性关系,绘制标准曲线;/n步骤四:将4-羟基苯基磷酸钠水溶液与待测碱性磷酸酶溶液在缓冲溶液中混合孵育,得到待测碱性磷酸酶混合溶液;/n步骤五:在步骤四制备的待测碱性磷酸酶混合溶液中加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液,进一步混合孵育,进行荧光光谱测试,得到待测碱性磷酸酶的荧光光谱强度;/n步骤六:利用步骤三的标准曲线及步骤五测得的荧光光谱强度,计算得到待测碱性磷酸酶的活性。/n
【技术特征摘要】
1.一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一:将4-羟基苯基磷酸钠水溶液分别与不同已知活性的碱性磷酸酶标准溶液在缓冲溶液中混合孵育,得到一系列混合溶液;
步骤二:在步骤一制备的一系列混合溶液中分别加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液,进一步混合孵育,进行荧光光谱测试;
步骤三:利用碱性磷酸酶标准溶液活性和荧光光谱强度的线性关系,绘制标准曲线;
步骤四:将4-羟基苯基磷酸钠水溶液与待测碱性磷酸酶溶液在缓冲溶液中混合孵育,得到待测碱性磷酸酶混合溶液;
步骤五:在步骤四制备的待测碱性磷酸酶混合溶液中加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液,进一步混合孵育,进行荧光光谱测试,得到待测碱性磷酸酶的荧光光谱强度;
步骤六:利用步骤三的标准曲线及步骤五测得的荧光光谱强度,计算得到待测碱性磷酸酶的活性。
2.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法,其特征在于,碱性磷酸酶标...
【专利技术属性】
技术研发人员:孙健,杨秀荣,刘国永,赵佳会,卢沙沙,
申请(专利权)人:中国科学院长春应用化学研究所,
类型:发明
国别省市:吉林;22
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。