一种具有高ACE抑制活性的大豆肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于食品生物技术领域，公开了一种具有高ACE抑制活性的大豆肽及其制备方法与应用。所述大豆肽具有高ACE抑制活性，其制备方法包括如下步骤：将大豆分离蛋白加入碱性蛋白酶酶解得到酶解产物；采用膜超滤法对酶解产物进行分离得到大豆肽粉I；采用乙醇分级分离法对大豆肽粉I进一步纯化，得到大豆肽粉Ⅱ；采用活性炭吸附色谱对大豆肽粉Ⅱ进一步分离纯化，得到具有高ACE抑制活性的大豆肽。本发明专利技术的大豆肽具有优异的ACE抑制活性和良好的降血压功效，可应用于食品、保健品领域，且制备方法简单可控，适用于工厂量产。

A soybean peptide with high ACE inhibitory activity and its preparation and Application

The invention belongs to the field of food biotechnology, and discloses a soybean peptide with high ACE inhibitory activity and a preparation method and application thereof. The soybean peptide has high ACE inhibitory activity, and the preparation method comprises the following steps: adding the soybean protein isolate to the alkaline protease for enzymolysis to obtain the enzymolysis product; separating the enzymolysis product with the membrane ultrafiltration method to obtain the soybean peptide powder I; further purifying the soybean peptide powder I with the ethanol fractionation method to obtain the soybean peptide powder II; adopting the active carbon adsorption chromatography to obtain the soybean peptide powder II The soybean peptide with high ACE inhibitory activity was obtained by one step separation and purification. The soybean peptide of the invention has excellent ACE inhibitory activity and good blood pressure reducing effect, can be applied to the field of food and health products, and the preparation method is simple and controllable, and is suitable for mass production in factories.

【技术实现步骤摘要】
一种具有高ACE抑制活性的大豆肽及其制备方法与应用
本专利技术属于生物活性肽领域，具体涉及一种具有ACE抑制活性的大豆肽及其制备方法与用途。
技术介绍
高血压是一种全球性公共健康问题，长期高血压是引发冠状动脉疾病，中风，心力衰竭，心房颤动，外周血管疾病，视力丧失的主要危险因素，同时仍是全球死亡率的最大单一因素。在中国，中国慢性病前瞻性研究(CKB研究)开展的大样本队列研究结果表明每十名居民就有三名患有高血压，患病率为高达32.5％，而高血压的控制率低至4.2％。目前，治疗高血压主要还是通过药物作用实现，而长期服用抗高血压药物所引起的副作用也不容忽视，包括干咳，高钾血症，疲劳，头晕，头痛，味觉丧失和血管性水肿等。血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽，是一类通过抑制ACE活性从而达到降血压效果的小分子生物活性多肽总称。通常是由蛋白酶水解食源性蛋白获得，因其降血压效果明显、无毒副作用而受到广泛关注。目前已从食源性蛋白中获得具有ACE抑制活性的生物活性肽，其中利用酪蛋白为原料制备的12肽FFVAPFPGVFGK表现出较好的ACE抑制活性，且包含此肽的酪蛋白水解产物已经申请专利技术专利(专利号为：US6514941B1)，并作为降血压产品实现了商业化生产和销售。中国专利申请CN105524966A也公开了一种酶解豆粕制备ACE抑制肽的方法，但由于采用的原料为成分复杂的豆粕(含有蛋白、多糖、矿物质等)，且仅采用简单的分离工艺(酸沉及超滤)，所得的ACE抑制肽纯度较低，整体ACE抑制活性不高。专利
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于提供一种具有高ACE抑制活性的大豆肽的制备方法，该方法的要点在于结合生物酶解技术、超滤分离技术以及活性炭色谱层析技术高效释放和收集大豆分离蛋白中具有高ACE抑制活性的大豆肽。本专利技术的另一目的在于提供上述方法制得的大豆肽。本专利技术的再一目的在于提供上述大豆肽的用途。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种大豆肽的制备方法，包括如下步骤：(1)将大豆分离蛋白加水混合，加入碱性蛋白酶，在温度为45～55℃，pH值为7.0～8.0条件下酶解6～10h，灭酶、离心收集上清液，得到大豆分离蛋白酶解产物；(2)将大豆分离蛋白酶解产物加水稀释后通过3kDa的超滤膜，收集＜3kDa组分，冷冻干燥，得到大豆肽粉I；(3)将大豆肽粉I溶于61～80％乙醇溶液中，搅拌混匀后静置，离心，收集上清液，冷冻干燥，得到大豆肽粉Ⅱ；(4)加水将大豆肽粉Ⅱ溶解，加入活性炭吸附，然后抽滤，收集沉淀，用去离子水冲洗至中性，加入61～80％乙醇溶液，在室温下震荡解析，抽滤收集上清液，冷冻干燥后得到一种具有高ACE抑制活性的大豆肽；步骤(1)中，碱性蛋白酶优选为诺维信(中国)生物技术有限公司的2.4L；步骤(1)中，碱性蛋白酶的添加量为大豆分离蛋白质量的0.5～1.0％；步骤(1)中所述的灭酶是将反应物在85～100℃下保温10～20min；步骤(1)中所述的离心是指在1500～4000g下离心15～30min；步骤(1)中，加水混合后，底物浓度为5～10％(w/w)；步骤(2)所述的加水稀释，是稀释至固形物含量为0.5～1.0％(w/w)；步骤(2)中所述的超滤法其分离参数为：上样量5L，温度4～8℃，压力0.5MPa；步骤(3)中，将大豆肽粉I溶于61～80％乙醇溶液中，使其终浓度为5～10mg/ml；步骤(3)中所述的离心是指在1500～4000g下离心15～30min；步骤(4)所述活性炭的加入量为大豆肽粉Ⅱ质量1～3倍；步骤(4)所述的吸附，体系pH值为2.0～4.0、室温下震荡吸附1～3h；步骤(4)所述的震荡解析，优选解析1～3h。本专利技术具有高ACE抑制活性的大豆肽可用于制备降血压药物、保健品和食品。大豆分离蛋白(soybeanproteinisolate，SPI)是大豆经过脱壳、脱脂、去碳水化合物等处理后分离出来的蛋白组分，蛋白含量高达90％以上。以大豆分离蛋白为原料，利用现代生物控制酶解技术和分离纯化技术制取具有高ACE抑制活性的大豆肽，具有极高的社会意义和经济价值。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术采用大豆分离蛋白为酶解原料，因大豆分离蛋白的蛋白含量高达90％以上，酶解所制备的水解产物成分相对单一；且大豆分离蛋白中疏水性氨基酸含量丰富，对ACE抑制活性贡献大。(2)本专利技术结合生物酶解技术、膜超滤技术、乙醇分级纯化技术及吸附分离技术制备出的大豆肽ACE抑制活性高。(3)本专利技术采用的制备方法简单可控，制备周期短，适用于工厂量产。附图说明图1是实施例1中不同膜超滤组分的ACE抑制活性。图2是实施例1中不同浓度乙醇分级组分的ACE抑制活性。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1一种具有高ACE抑制活性的大豆肽其制备方法，包括如下步骤：(1)将大豆分离蛋白加水混合，使其底物浓度为7.5％(w/w)，在2.4L添加量为0.75％(w/w)，温度为55℃，pH值为7.5的条件下酶解8h后在100℃的水中保温10min，在4000g的离心力下离心15min，收集上清液，得到大豆分离蛋白酶解产物(SPIH)，获得大豆分离蛋白酶解产物(SPIH)，酶解液水解度为6.07±0.08％。(2)采用膜超滤法对SPIH进行分离纯化，将SPIH加水稀释至固形物含量0.8％后将其通过10kDa超滤膜，然后将透过液依次通过5kDa和3kDa的超滤膜，收集各个组分，冷冻干燥，得到大豆肽粉I。(3)采用乙醇分级分离法对大豆肽粉I进一步纯化，将大豆肽粉I分别溶于15％、35％、55％、75％、95％乙醇溶液中，其使其终浓度为10mg/ml，搅拌混匀后静置30min，在4000g的离心力下离心15min，收集各浓度乙醇组分上清液，冷冻干燥，得到大豆肽粉Ⅱ。(4)采用活性炭吸附分离法对大豆肽粉Ⅱ进一步纯化，将大豆肽粉Ⅱ加水溶解，使其终浓度为10mg/ml，按底物蛋白:活性炭质量比为2:1质量比加入活性炭，调节体系pH值至3.0于室温下震荡吸附2h后抽滤，收集沉淀，并用去离子水冲洗至中性，加入等体积75％乙醇溶液，在室温下震荡解析2h后，抽滤收集上清液，冷冻干燥后得到一种具有高ACE抑制活性的大豆肽。对本实施例步骤(1)所得酶解产物(SPIH)和步骤(2)中所得4个组分的ACE抑制活性进行测定，结果如图1所示，结果表明＜3kDa组分的ACE抑制活性最高。对本实施例步骤(3)中不同乙醇浓度组分的ACE抑制活性进行测定，结果如图2所示，结果表明61～80％乙醇组分的ACE抑制活性最高。表1不同组分的ACE抑制活性注：检测浓度为0.2mg/mL。已本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大豆肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：/n(1)将大豆分离蛋白加水混合，加入碱性蛋白酶，在温度为45～55℃，pH值为7.0～8.0条件下酶解6～10h，灭酶、离心收集上清液，得到大豆分离蛋白酶解产物；/n(2)将大豆分离蛋白酶解产物加水稀释后通过3kDa的超滤膜，收集＜3kDa组分，冷冻干燥，得到大豆肽粉I；/n(3)将大豆肽粉I溶于61～80％乙醇溶液中，搅拌混匀后静置，离心，收集上清液，冷冻干燥，得到大豆肽粉Ⅱ；/n(4)加水将大豆肽粉Ⅱ溶解，加入活性炭吸附，然后抽滤，收集沉淀，用去离子水冲洗至中性，加入61～80％乙醇溶液，在室温下震荡解析，抽滤收集上清液，冷冻干燥后得到大豆肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种大豆肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将大豆分离蛋白加水混合，加入碱性蛋白酶，在温度为45～55℃，pH值为7.0～8.0条件下酶解6～10h，灭酶、离心收集上清液，得到大豆分离蛋白酶解产物；
(2)将大豆分离蛋白酶解产物加水稀释后通过3kDa的超滤膜，收集＜3kDa组分，冷冻干燥，得到大豆肽粉I；
(3)将大豆肽粉I溶于61～80％乙醇溶液中，搅拌混匀后静置，离心，收集上清液，冷冻干燥，得到大豆肽粉Ⅱ；
(4)加水将大豆肽粉Ⅱ溶解，加入活性炭吸附，然后抽滤，收集沉淀，用去离子水冲洗至中性，加入61～80％乙醇溶液，在室温下震荡解析，抽滤收集上清液，冷冻干燥后得到大豆肽。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，碱性蛋白酶是2.4L。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，碱性蛋白酶的添加量为大豆分离蛋白质量的0.5～1.0％。...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵谋明，苏国万，赵翊君，
申请(专利权)人：广东华肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44