甲鱼蛋白源具有ACE抑制活性肽HQTWTKVHF及用途制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，特别涉及一个来源于中华鳖甲鱼的蛋白。本发明专利技术公开了一种甲鱼蛋白源具有ACE抑制活性的肽HQTWTKVHF，肽HQTWTKVHF的氨基酸序列为：His‑Gln‑Thr‑Trp‑Thr‑Lys‑Val‑His‑Phe。本发明专利技术还同时公开了上述肽HQTWTKVHF在制备ACE抑制剂中的应用。

Turtle protein source with ACE inhibitory peptide hqtwtkvhf and its application

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to a protein from soft shelled turtle. The invention discloses a turtle protein source peptide hqtwtkvhf with ACE inhibitory activity. The amino acid sequence of the peptide hqtwtkvhf is: his \u2011 Gln \u2011 thr \u2011 TRP \u2011 thr \u2011 Lys \u2011 val \u2011 his \u2011 PHE. The invention also discloses the application of the peptide hqtwtkvhf in the preparation of ACE inhibitor.

【技术实现步骤摘要】
甲鱼蛋白源具有ACE抑制活性肽HQTWTKVHF及用途
本专利技术属于生物
，特别涉及一个来源于中华鳖甲鱼(GenBank:AHE37801.1，cytochromeoxidasesubunit1,partial(mitochondrion)[Pelodiscussinensis])蛋白。
技术介绍
血管紧张素转换酶(Angiotensinconvertingenzyme,ACE,EC3.4.15.1，文献中曾用名有kininaseIl,dipeptidylcarboxypeptidaseI等)是一种二羧肽酶，是导致高血压的一个关键酶，它通过水解作用把血管紧张肽Ⅰ转化成血管紧张肽Ⅱ，与此同时，ACE还可钝化血管舒缓激肽，这两种作用均可导致血管收缩，从而引起高血压。因此ACE被认为是引起高血压的一个重要因素。经研究发现血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)，可通过抑制ACE的活性而达到降血压的作用。ACE抑制剂广泛用于治疗心血管、高血压、心力衰竭、肾衰竭等疾病。ACE抑制剂最初是从蛇毒中发现的，随后人们发现从食物原料中提取的ACE抑制肽，如明胶、酪蛋白、鱼、无花果树胶、α-玉米蛋白等都可作为制备ACE抑制肽的原料。降血压的药物常见的有：①利尿剂：代表药物有氢氯噬嗓、氨苯蝶吮、螺内酉旨等。②片受体阻滞剂：代表药物有普蔡洛尔、美托洛尔、阿替洛尔、纳多洛尔等。③钙通道阻滞剂：代表药物有硝苯地平、氨氯地平、非洛地平、尼群地平、拉西地平等。④血管紧张素转换酶抑制剂：代表药物有卡托普利、苯那普利、赖诺普利、依那普利、西拉普利等。⑤a一受体阻滞剂：代表药物有呱哇嗓、特拉哩嗦等。⑥血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂：代表药物有洛沙坦、撷沙坦、厄贝沙坦、坎地沙坦、伊贝沙坦、替米沙坦等。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种甲鱼蛋白源具有ACE抑制活性肽序列HQTWTKVHF及其用途。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种甲鱼蛋白源具有ACE抑制活性的肽HQTWTKVHF，所述肽HQTWTKVHF的氨基酸序列为：His-Gln-Thr-Trp-Thr-Lys-Val-His-Phe。本专利技术还同时提供了上述肽HQTWTKVHF在制备ACE抑制剂中的应用。本专利技术的9肽HQTWTKVHF具有降血压功能，能与血管紧张素转换酶结合，抑制其活性。本专利技术的9肽HQTWTKVHF可通过委托吉尔生化(上海)有限公司合成获得。本专利技术所报道的9肽针对ACE靶标具有抑制活性，从而表现出同时具有降血压的特性。本专利技术基于中华鳖甲鱼(GenBank:AHE37801.1，cytochromeoxidasesubunit1,partial(mitochondrion)[Pelodiscussinensis])蛋白，通过计算机辅助虚拟酶解技术，获得了在胃蛋白酶(pH≦1.3)的作用条件下的ACE抑制肽。本专利技术中所涉及的各项检测方法具体如下：ACE抑制活性的检测方法：ACE在37℃，pH值为8.3的条件下催化分解血管紧张素I的模拟物Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine(HHL)产生马尿酸(HA)，该物质在紫外225nm处具有特征吸收峰；当加入ACE抑制剂时ACE对HHL的催化分解作用受到抑制，马尿酸的生成量减少，通过HPLC方法，测定加入抑制剂前后所生成马尿酸的量的变化即可算出抑制活性的大小。反应体系为：依次分别加入20μL0.1U/mL的ACE、50μLACE抑制肽(即9肽HQTWTKVHF，短肽抑制剂)在37℃温浴5min，然后加入10μL5mM的HHL底物启动ACE的催化反应，在37℃振荡水浴30min后加入250μL1.0moL/L的HCl终止反应，体系溶液过0.45μm滤膜后进行RP-HPLC检测分析马尿酸(HA)的含量。上述同样条件，以50μL0.1moL/L的硼酸缓冲液中(含0.3moL/L的NaCl，pH＝8.3)代替ACE抑制剂作为空白反应体系。注：上述ACE、HHL底物均是以0.1moL/L的硼酸缓冲液(含0.3moL/L的NaCl，pH＝8.3)为溶剂。ACE抑制肽(HQTWTKVHF)，以不同浓度溶解在0.1moL/L的硼酸缓冲液中(含0.3moL/L的NaCl，pH＝8.3)中而得。RP-HPLC检测：溶剂Ⅰ为0.05％(V/V)三氟乙酸(TFA)和0.05％(v/v)的三乙胺(TTA)溶于去离子水中，溶剂Ⅱ为100％的色谱纯乙睛。溶剂Ⅰ与溶剂Ⅱ的比例为70％：30％(体积比)，流速为0.5mL/min，检测波长为225nm,检测柱温为30℃。ACE抑制活性根据下式计算：I％＝(A-B)/A×100％A：不加入短肽抑制剂时的马尿酸的峰面积；B：加入短肽抑制剂时的马尿酸的峰面积；ACE：1U单位定义为，在标准检测条件下，在37℃，1min时间内催化底物(Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine,HHL)，产生1μM马尿酸所消耗ACE的量。即，为ACE的活性单位。本专利技术的优点：该9肽可以抑制血管紧张素转换酶的活性。依据本专利技术所述的氨基酸序列，可委托吉尔生化(上海)有限公司合成，从而获得本专利技术所述的ACE抑制肽(或简称为肽HQTWTKVHF)。本专利技术的ACE抑制肽的用法和用量如下：本专利技术的9肽为口服型，用量为口服，每次1.5g，每日2～3次。具体实施方式实施例1、肽HQTWTKVHF在1.0mg/mL的浓度下的ACE抑制活性：色谱条件：溶剂Ⅰ为0.05％三氟乙酸(TFA)和0.05％的三乙胺(TTA)溶于去离子水中(即每升溶剂Ⅰ中含有0.5mL的三氟乙酸和0.5mL的三乙胺)，溶剂Ⅱ为100％的色谱纯乙睛。溶剂Ⅰ与溶剂Ⅱ的比例为70％：30％(体积比)，ultimate3000戴安液相色谱仪，色谱柱为watersSymmetryC185μm4.6×250mm，流速为0.5mL/min，进样量10μL，检测波长为225nm，检测柱温为30℃。检测方法：将通过化学合成法获得此肽HQTWTKVHF，进行活性检测(检测方法同上)。此时肽HQTWTKVHF浓度为1.0mg/mL。结果：肽HQTWTKVHF在1.0mg/mL时的ACE抑制活性为75.86％。实施例2、肽HQTWTKVHF在2.0mg/mL的浓度下的ACE抑制活性：色谱条件：溶剂Ⅰ为0.05％三氟乙酸(TFA)和0.05％的三乙胺(TTA)溶于去离子水中；溶剂Ⅱ为100％的色谱纯乙睛。溶剂Ⅰ与溶剂Ⅱ的比例为70％：30％，ultimate3000戴安液相色谱仪，色谱柱为watersSymmetryC185μm4.6×250mm,流速为0.5mL/min，进样量10μL，检测波长为225nm,检测柱温为30℃。检测方法：将通过化学合成法获得此肽HQTW本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.甲鱼蛋白源具有ACE抑制活性肽HQTWTKVHF，其特征是：所述肽HQTWTKVHF的氨基酸序列为：His-Gln-Thr-Trp-Thr-Lys-Val-His-Phe。/n

【技术特征摘要】
1.甲鱼蛋白源具有ACE抑制活性肽HQTWTKVHF，其特征是：所述肽HQTWTKVHF的氨基酸序列为：His-Gln-Thr-Trp...

【专利技术属性】
技术研发人员：王伟，王楠，张玉，王君虹，李雪，朱作艺，蒋有水，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33