一种犬冠状病毒快速检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术提供一种犬冠状病毒快速检测试剂盒，包括包装盒、隔板、微流控芯片A、微流控芯片B、试剂管基座、试剂管、鲁尔塞、说明书，隔板将包装盒区分为左中右三个腔室，第一腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片A若干；第二腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片B若干；微流控芯片上均设有加样孔、微流道、DNA分离室、废液室、三角阀、PCR反应区和/或荧光检测室；第三腔室被试剂管基座分为上下两层，盛放DNA分离磁珠的试剂管置于试剂管基座的孔内，试剂管基座下部放置鲁尔塞。本实用新型专利技术能够一步实现犬冠状病毒的高灵敏度、快速、荧光定量PCR检测，操作简便快捷。

A rapid detection kit for canine coronavirus

The utility model provides a rapid detection kit for canine coronavirus, which comprises a packing box, a separator, a microfluidic chip a, a microfluidic chip B, a reagent tube base, a reagent tube, a Rousse and a specification. The separator divides the packing box into three chambers on the left, the middle and the right. In the first chamber, a number of microfluidic chips a are placed in parallel in the vertical direction; in the second chamber, micro chips are placed in parallel in the vertical direction There are a number of flow control chips B; the microfluidic chips are equipped with sample adding holes, micro flow channels, DNA separation room, waste liquid room, triangle valve, PCR reaction area and / or fluorescence detection room; the third chamber is divided into two layers by the reagent tube base, the reagent tube containing the DNA separation beads is placed in the hole of the reagent tube base, and the lower part of the reagent tube base is placed with ruersai. The utility model can realize the high sensitivity, fast, fluorescent quantitative PCR detection of canine coronavirus in one step, and the operation is simple and fast.

【技术实现步骤摘要】
一种犬冠状病毒快速检测试剂盒
本技术涉及动物疫病检测
，具体涉及一种犬冠状病毒快速检测试剂盒。
技术介绍
犬冠状病毒病(ccv)属冠状病毒科冠状病毒属成员。病毒具有冠状病毒的确一般形态特征，呈圆形或椭圆形，长径80～120nm，宽径为75～80nm，有囊膜，囊膜表面有花瓣状纤突，长约20nm，冻融极易脱落，是去感染性。核衣壳呈螺旋状。病毒基因型为单股RNA。病毒在CsCL中的浮密度为1.15～1.16克/立方厘米。病毒对氯仿、乙醚、脱氧胆酸盐敏感。对热也敏感。用甲醛、紫外线能灭活。对胰蛋白酶和酸有抵抗力。病毒在粪便中存活6～9天。犬冠状病毒潜伏期1～5天，临床症状轻重不一。主要表现为呕吐和腹泻，严重病犬精神不振，呈嗜睡状，食欲减少或废绝，多数无体温变化。口渴、鼻镜干燥，呕吐，持续数天出现腹泻。粪便呈粥样或水样，红色或暗褐色，或黄绿色，恶臭，混有黏液或少量血液。白细胞数正常，病程7～10天，有些病犬尤其是幼犬发病后1～2天内死亡，成年犬很少死亡。目前本病尚无有效疫苗预防和特效疗法。因此，能够尽早的诊断出该病毒感染在宠物疫病防治中显得更加重要。目前，犬冠状病毒检测主要方法有病毒分离、实验动物感染、包涵体检查、电镜观察、CAV的中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金试纸、酶标SPA染色法、免疫荧光试验、链式聚合酶反应等方法。但是这些方法各有缺陷，病毒分离鉴定及中和试验过程繁琐，耗时过长；电镜技术难以在基层普及应用；ELISA仅能够定性检测病毒，且操作过程中需长时间孵育和冲洗，耗时较长，这些检测方法难以在兽医临床现场应用；胶体金试纸虽能够实现快速检测，却无法实现病毒的定量检测。
技术实现思路
本技术所要解决的技术问题是：如何快速且定量的检测犬冠状病毒，优化兽医临床现场应用。为解决上述问题，专利技术人基于荧光定量PCR和微流控技术原理，设计出一种犬冠状病毒快速检测试剂盒，可以短时间内实现犬冠状病毒的快速定量检测，操作快速便捷。本技术提供了一种犬冠状病毒快速检测试剂盒，包括包装盒、隔板、微流控芯片A、微流控芯片B、试剂管基座、试剂管、鲁尔塞、说明书，其特征在于：所述隔板将包装盒区分为左中右三个腔室，第一腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片A若干，所述微流控芯片A为矩形结构，微流控芯片A上设有2个进样孔、1个DNA分离室、1个三角阀、1个废液室、1个混合室、1个S形微流道PCR反应区、1个荧光检测室和连接各室的微流道；第二腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片B若干；所述微流控芯片B为矩形结构，微流控芯片B上设有2个进样孔、1个DNA分离室、1个三角阀、1个废液室、1个PCR反应室和连接各室的微流道；第三腔室内设置1个试剂管基座，盛放DNA分离磁珠的试剂管置于试剂管基座的孔内，试剂管基座下方放置鲁尔塞。所述微流控芯片材质可选自玻璃、PMMA、PC、COC或COP。微流控芯片A的规格为102×76mm；微流控芯片B的规格优选为76×26mm。微流控反应室底面、微流道内表面可进行亲水或疏水处理。本技术与现有技术相比具有下述优点：1、本技术能够一步实现犬DNA分离和冠状病毒的高灵敏度、快速、定量检测。2、本技术操作过程简便快捷，搭配不同检测试剂，能够分别进行单一荧光定量分析，或同时进行多重荧光定量PCR分析。3、本技术提供两种不同的微流控芯片，供使用者根据需求进行选择，简便灵活。附图说明图1.本技术犬冠状病毒快速检测试剂盒的结构示意图，图中标记：1-包装盒，2-隔板，3-微流控芯片A，4-微流控芯片B，5-试剂管基座，6-试剂管，7-鲁尔塞，8-说明书。图2.本技术犬冠状病毒快速检测试剂盒中微流控芯片A的结构示意图，图中标记：3-微流控芯片，31-进样孔、32-DNA分离室、33-三角阀、34-废液室、35-混合室、36-PCR反应区、37-荧光检测室。图3.本技术犬冠状病毒快速检测试剂盒中微流控芯片B的结构示意图，图中标记：4-微流控芯片，41-进样孔、42-DNA分离室、43-三角阀、44-废液室、45-PCR反应室。具体实施方式下面结合附图及实施例对本技术作进一步描述。应当注意，实施例中未详细说明的常规条件和方法，均按照所属领域人员常规采用的实验条件和方法进行。实施例：如图1-图3所示，一种犬冠状病毒快速检测试剂盒，包括包装盒(1)、隔板(2)、微流控芯片A3、微流控芯片B4、试剂管基座5、试剂管6、鲁尔塞7、说明书8；所述隔板(2)将包装盒(1)区分为左中右三个腔室，第一腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片A3若干，所述微流控芯片A3为矩形结构，微流控芯片A3上设有2个进样孔31、1个DNA分离室32、1个三角阀33、1个废液室34、1个混合室35、1个S形微流道PCR反应区36、1个荧光检测室37和连接各室的微流道；第二腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片B4若干；所述微流控芯片B4为矩形结构，微流控芯片B4上设有2个进样孔41、1个DNA分离室42、1个三角阀43、1个废液室44、1个PCR反应室45和连接各室的微流道；第三腔室内设置1个试剂管基座5，盛放DNA分离磁珠的试剂管6置于试剂管基座5的孔内，试剂管基座5下方放置鲁尔塞7若干。所述微流控芯片A3的规格为102×76mm；微流控芯片B4的规格为76×26mm。所述微流控芯片A3和微流控芯片B(4)的材质可选自玻璃、PMMA、PC、COC或COP。本技术所述犬冠状病毒快速检测试剂盒的使用方法：1、微流控芯片A：1)撕开进样孔A(与DNA分离室直接连接的进样孔)处的保护膜，将DNA分离磁珠2-5μl注入DNA分离室；2)将动物血清、唾液、尿液等待测样品50-100μl自进样孔A注入DNA分离室，反应室内空气自三角阀测通孔排出，尽量避免在反应室内吹出气泡，使用鲁尔塞或堵头封闭进样孔，控制三角阀将连接DNA分离室的通孔关闭；3)将微流控芯片置于磁力混匀仪上，开启开关，通过磁力带动DNA分离磁珠在样品中反复流动，将DNA吸附于磁珠上，此步骤约5-10分钟；4)控制三角阀将DNA分离室与废液室连通，将缓冲液自进样孔A注入，将剩余样品排入废液室，关闭三角阀内连接DNA分离室的通孔(此过程中磁力混匀仪始终开启，保证吸附DNA的磁珠不会被冲走)；5)使用缓冲液冲洗磁珠30-60s，控制三角阀将DNA分离室与废液室连通，将废液排入废液室；重复此冲洗过程1-3次，使用气泵将废液全部排出；6)自进样孔A注入DNA洗脱液，与上述冲洗步骤相同，将DNA洗脱；7)控制三角阀将DNA分离室与混合室连通，使用气泵将洗脱的DNA注入混合室内，将PCR反应试剂混合物自进样孔B(与混合室直接连接的进样孔)注入混合室，可手动晃动混合，也可芯片内预置磁力转子，使用磁力混匀仪混匀；8)控制三角阀将混合室与PCR反应区连通本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种犬冠状病毒快速检测试剂盒，包括包装盒(1)、隔板(2)、微流控芯片A(3)、微流控芯片B(4)、试剂管基座(5)、试剂管(6)、鲁尔塞(7)、说明书(8)，其特征在于：所述隔板(2)将包装盒(1)区分为左中右三个腔室，第一腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片A(3)若干，所述微流控芯片A(3)为矩形结构，微流控芯片A(3)上设有2个进样孔(31)、1个DNA分离室(32)、1个三角阀(33)、1个废液室(34)、1个混合室(35)、1个S形微流道PCR反应区(36)、1个荧光检测室(37)和连接各室的微流道；第二腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片B(4)若干；所述微流控芯片B(4)为矩形结构，微流控芯片B(4)上设有2个进样孔(41)、1个DNA分离室(42)、1个三角阀(43)、1个废液室(44)、1个PCR反应室(45)和连接各室的微流道；第三腔室内设置1个试剂管基座(5)，盛放DNA分离磁珠的试剂管(6)置于试剂管基座(5)的孔内，试剂管基座(5)下方放置鲁尔塞(7)。/n

【技术特征摘要】
1.一种犬冠状病毒快速检测试剂盒，包括包装盒(1)、隔板(2)、微流控芯片A(3)、微流控芯片B(4)、试剂管基座(5)、试剂管(6)、鲁尔塞(7)、说明书(8)，其特征在于：所述隔板(2)将包装盒(1)区分为左中右三个腔室，第一腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片A(3)若干，所述微流控芯片A(3)为矩形结构，微流控芯片A(3)上设有2个进样孔(31)、1个DNA分离室(32)、1个三角阀(33)、1个废液室(34)、1个混合室(35)、1个S形微流道PCR反应区(36)、1个荧光检测室(37)和连接各室的微流道；第二腔室内沿竖直方向平行放置微流控芯片B(4)若干；所述微流控芯片B(4)为矩形结构，微流控芯片B(4)...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦彤，崔尚金，梁琳，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：新型
国别省市：北京;11