毛酸浆内酯的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用技术

本发明专利技术公开了毛酸浆内酯(physapubescin)的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。毛酸浆内酯的作用机制是通过激活caspase家族相关蛋白，使下游靶蛋白DNA修复酶PARP裂解，诱导肿瘤细胞发生凋亡；同时，毛酸浆内酯可抑制HIF2α的表达，同时可以上调CHOP的表达，CHOP作为转录因子上调死亡受体DR5从而促进癌细胞凋亡；TRAIL和毛酸浆内酯能够发生协同作用，与二者分别单独给予肾癌细胞时相比，可更显著地作用于caspase家族相关蛋白及其下游的PARP蛋白，诱导细胞发生凋亡。毛酸浆内酯可配制为消化道及非消化道给药剂型，用于人肾细胞癌等肿瘤的治疗。

Preparation method of maosuanlactone and its application in the preparation of antitumor drugs

The invention discloses a preparation method of physapubescin and its application in the preparation of anti-tumor drugs. The mechanism of action of Mao acid plasma lactone is to make the downstream target protein DNA repair enzyme PARP cleavage and induce apoptosis of tumor cells by activating caspase family related proteins; at the same time, Mao acid plasma lactone can inhibit the expression of hif2 \u03b1, at the same time, it can up regulate the expression of chop, which, as a transcription factor, up regulate the death receptor DR5 and thus promote the apoptosis of cancer cells; trail and Mao acid plasma lactone can cooperate Compared with the treatment of renal cancer cells alone, they can more significantly affect caspase family related protein and its downstream PARP protein, and induce cell apoptosis. It can be used in the treatment of human renal cell carcinoma and other tumors.

【技术实现步骤摘要】
毛酸浆内酯的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用
本专利技术涉及医药
，特别涉及毛酸浆内酯的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
恶性肿瘤(通称癌症)是当前危害人类生命健康的重要疾病之一。近20年来，在世界范围内或中国范围内，肿瘤的发病率与死亡率均呈上升的趋势。据WHO统计，2012年世界癌症报告显示，每年癌症新发病例约1400万，死亡约800万。我国每年新发癌症病例约337万，死亡约211万。癌症已成为我国死亡第一大原因，死亡人数占全球癌症死亡人数四分之一。肾细胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)简称肾癌，是源于肾实质的泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，占成人肾脏恶性肿瘤的80％，居泌尿系统肿瘤的第二位(CACancerJClin,2007,57(l),43-66)，仅次于膀胱癌，每年全世界约9.5万人死于肾癌(ExpertRevAnticancerTher,2008,8(1),63-73)。近年来，随着生活方式的改变及人口老龄化问题的出现，我国RCC的发病率有逐年上升的趋势(中华泌尿外科杂志,2013,30(8),511-514)。肾癌起源于肾脏的肾小管或集合管的上皮细胞，具有不同的病理类型，大多数肾癌是透明细胞肾细胞癌(占70％-80％)。肾癌发生、发展过程是一个复杂的分子生物学过程，其中抑癌基因的失活起到重要的作用。人类的VHL基因为抑癌基因，有抑制肿瘤生长及浸润的作用，该基因的缺失会导致正常的VHL蛋白合成障碍，是家族性肾癌的重要诱发因素，而且80％的散发性肾透明细胞癌存在VHL基因的缺失或突变(JClinOncol,2005,23,63-71)。VHL基因可以调节低氧诱导因子1(hypoxia-induciblefactorl,HIF-1)和低氧诱导因子2(hypoxia-induciblefactor2，HIF-2)的表达，调节机体对缺氧的适应反应。VHL基因表达的蛋白pVHL缺失会所致肾癌细胞HIF-α高表达，进而发挥促癌的作用，其与肾癌的生物学进程密切相关。突变及缺失导致的VHL抑癌基因失活会导致缺氧引起HIF-α及HIF-β的上调(Oncogene,2000,19(48),5435-5443)，并进一步引起VEGF(Cancer,2002,95(l),47-53)和PDGF(AmJClinPathol,2003,120(1),107-112)的过表达，下游区的受体酪氨酸激酶通过结合特异性受体被激活，导致细胞增殖、生长和血管生成。进一步通过Ras/Raf/MEK/Rrk信号传导通路及PI3K/Akt/mTOR信号传导通路促进了肿瘤血管形成及相关信号传导，促进肿瘤血管形成，进而促进肾癌的发生及发展(MolCellBiol,2002,22(20),7004-7014；CancerBiolTher2003,2(4Suppll),S169-177)。以上研究表明，缺氧诱导因子HIF的过度表达在恶性肿瘤的发生发展过程中可能扮演着重要的角色。因此，以其为靶点进行治疗有可能会成为恶性肿瘤治疗的又一重要手段。近来研究发现了一个重要的凋亡调节蛋白——肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor，TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-relatedapoptosisinducingligand，TRAIL)。目前已知的TRAIL受体共有5种，其中包括2个死亡受体(deathreceptor，DR)，即TRAIL2-R1(DR4)和TRAIL2-R2(DR5)，均含有胞内死亡结构域和依赖胱天蛋白酶(caspase)途径的凋亡信号的识别结构，与TRAIL结合后能将TRAIL的死亡信息传递至胞质，激活胱天蛋白酶系统，最终引起细胞凋亡(OncolRes,2014,21(3),155-164；BiochemBiophysResCommun,2013,441(4),743-750；MolCancerTher,2013,12(12),2735-2747)。其中，DR5在正常细胞很少或几乎不表达，因此其对正常细胞没有作用。其优势在于它与相应的配体结合后，能迅速诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常的细胞没有毒性。这一特性使其优于TNF配体家族的其它成员，成为一个肿瘤治疗的新靶点，为研究出更有效的抗肿瘤药物提供帮助。毛酸浆PhysalispubescensL.为茄科Solanaceae酸浆属Physalis一年生草本植物。毛酸浆主要分布于黑龙江、吉林、辽宁等地区。徐国均主编的《中国药材学》中记载了毛酸浆带宿萼的果实作为灯笼草药用，具有清热解毒，利尿止血的功效(中国药材学.下册.中国医药科技出版社.1996,1161-1162)。毛酸浆成熟的果实还是一种美味的水果。睡茄交酯(withanolide)类化合物是毛酸浆植物中含有的主要化学成分类型，其中毛酸浆内酯在毛酸浆中含量较大，为白色晶体，分子量530。目前对毛酸浆及其主要成分的药理作用研究及药理作用机制的研究极少，仅有一篇文献报道其对肿瘤细胞中醌还原酶的诱导作用(Steroids,2013,78,860-865)，并且有一篇文章报道了一个化合物physapubescinB抗前列腺肿瘤的作用(JournalofAgriculturalandFoodChemistry,2015,63,9504-9512)。对其他毛酸浆内酯在肿瘤中的应用及深入的作用机制均未见报道，且对毛酸浆内酯这一毛酸浆中的主要药效成分的制备方法亦未见文献报道。
技术实现思路
本专利技术首次发现了毛酸浆内酯对多种肿瘤细胞有生长抑制作用，裸鼠体内实验表明其具有明显的抑制肿瘤生长的作用。本专利技术还首次涉及了毛酸浆内酯在人肾透明细胞癌786-0细胞中的作用机制，可制备用于治疗肿瘤的药物。本专利技术的首要目的在于提供一种毛酸浆内酯(physapubescin)的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供毛酸浆内酯在制备抗肿瘤药物方面的用途。本专利技术所使用的毛酸浆内酯由本课题组从毛酸浆(PhysalispubescensL.)中提取分离得到，为白色晶体(MeOH)，核磁数据与文献(J.Chem.Res.(S),1980,125；(M),2134-2156)对照一致，确定其结构为毛酸浆内酯，纯度>96％。本专利技术通篇所述的毛酸浆内酯具有如下的结构式：本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术提供一种毛酸浆内酯的制备方法，其包括以下操作步骤：1)将毛酸浆全草用提取溶剂回流提取，得到提取液；所述的毛酸浆全草包括毛酸浆的根、茎、叶、花及果实；所述的提取溶剂为醇或者体积百分数40～100％，优选为50～99％的醇的水溶液；所述的醇为甲醇或乙醇；所述的提取液每次加入量相对于毛酸浆全草重量的5～10倍，在40～100℃回流提取1～5次，每次1～5小时；2)将步骤1)中得到的提取液浓缩，用水分散后用小极性有机溶剂，例如极性在0-0.2之间的有机溶剂萃取一次或多次，除去小极性杂质；所述的小极性有机溶剂包括石油醚、正己烷、环己烷；3)将步骤2)中剩余本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.毛酸浆内酯的制备方法，所述毛酸浆内酯具有如下的结构式：/n

【技术特征摘要】
1.毛酸浆内酯的制备方法，所述毛酸浆内酯具有如下的结构式：



其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)采用植物毛酸浆的全草为原料，通过体积分数为40～100％的甲醇或乙醇进行回流提取，液料重量比为5:1～10:1，40～100℃回流提取1～5小时，提取次数为1～5次；得到提取物；
(2)将步骤(1)得到的提取物用极性在0-0.2之间的小极性有机溶剂萃取一次或多次；
(3)将步骤(2)中萃取后的剩余水层部分用极性在3-5.6之间的中等极性有机溶剂萃取一次或多次得到萃取液，浓缩后，采用柱色谱分离，以二氯甲烷和甲醇组成的洗脱体系进行洗脱得到含有毛酸浆内酯的第一混合组分，所述柱色谱用的填料为100-300目的柱色谱硅胶；
或
将步骤(2)中萃取后的剩余水层部分通过大孔吸附树脂吸附，并以乙醇和水组成的洗脱体系洗脱得含毛酸浆内酯的第二混合组分；再将含毛酸浆内酯的第二混合组分采用柱色谱分离，该柱色谱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，并以甲醇和水组成的洗脱体系进行洗脱得到含有毛酸浆内酯的单一组分；
(4)将步骤(3)中所获得的含有毛酸浆内酯的第一混合组分或含有毛酸浆内酯的单一组分，采用制备高效液相色谱法，以甲醇和水组成的洗脱体系洗脱并浓缩，得到毛酸浆内酯；所述制备高...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱峰，陈丽霞，资晓林，夏桂阳，康宁，丁丽琴，王丽晴，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津;12