抗菌肽NZX的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供抗菌肽NZX的制备方法及应用。本发明专利技术通过优化抗菌肽NZX基因序列，首次实现了抗菌肽NZX在毕赤酵母中的高效表达，产量突破克级水平，克服了大规模生产中产量过低或化学合成成本过高的问题，并建立完善的纯化体系，可实现规模化生产。此外，抗菌实验结果表明，本发明专利技术的抗菌肽NZX对革兰氏阳性菌，具有显著抑菌活性，同时具有低细胞毒性、低溶血性的特点，可应用于抗菌药物开发，饲料添加剂开发等领域，具有广阔的应用价值和市场前景。

Preparation and application of antibacterial peptide NZX

The invention provides a preparation method and application of an antibacterial peptide NZX. By optimizing the NZX gene sequence of the antibacterial peptide, the invention realizes the high-efficiency expression of the antibacterial peptide NZX in Pichia pastoris for the first time, the yield breaks through the gram level, overcomes the problem of low yield or high chemical synthesis cost in large-scale production, and establishes a perfect purification system, which can realize large-scale production. In addition, the antibacterial experiment results show that the antibacterial peptide NZX of the invention has significant antibacterial activity against Gram-positive bacteria, and has the characteristics of low cytotoxicity and hemolysis. It can be applied to the development of antibacterial drugs, feed additives and other fields, and has broad application value and market prospect.

【技术实现步骤摘要】
抗菌肽NZX的制备方法及应用
本专利技术涉及生物
，具体地说，涉及抗菌肽NZX的制备方法及应用。
技术介绍
抗菌肽(AMPs)是多细胞生物为保护宿主免受病原微生物侵害而产生的内源性多肽，由于它们在构成先天性免疫系统中起着至关重要的作用，因此抗菌肽(AMPs)也被定义为宿主防御肽。目前研究最多的抗菌肽(AMPs)一般带正电荷，具有阳离子特性，可以与带负电的细菌膜相结合，导致脂质双侧结构的解体(Min-DukSeo等，2012)。大多数抗菌肽(AMPs)同时具有亲水性和疏水性两种结构域，这种结构可以使抗菌肽(AMPs)能够与脂质组分(疏水区)和磷脂组分(亲水区)相结合(Jenssen等，2006)。抗菌肽(AMPs)对多种微生物具有广谱抗菌活性，包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌和病毒(Zasloff等，2002)。由于抗菌肽具有抗菌活性好，抗菌谱广(包括耐药性细菌)，多种抗菌机制，耐药性出现的可能性较低，因此成为新型抗生素替代品的有力候选(AliAdemBahar等，2013)。Plectasin是2005年Mygid等人从来源于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗菌肽NZX在制备抗菌药物或组合物中的应用，其特征在于，所述菌包括金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和猪葡萄球菌(Staphylococcus hyicus)；/n其中，所述抗菌肽NZX的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.抗菌肽NZX在制备抗菌药物或组合物中的应用，其特征在于，所述菌包括金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和猪葡萄球菌(Staphylococcushyicus)；
其中，所述抗菌肽NZX的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。


2.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体携带如下基因表达框：
诱导型启动子-编码α因子信号肽的DNA序列-Kex2切割位点-SEQIDNO:2所示的编码抗菌肽NZX的DNA序列-终止密码子。


3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述编码α因子信号肽的DNA序列的5’端连接有XhoI酶切位点；所述编码抗菌肽NZX的DNA序列的3’端连接有XbaI酶切位点。


4.含有权利要求2或3所述重组表达载体的宿主细胞。


5.根据权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，其为毕赤酵母。


6.重组毕赤酵母，其特征在于，其为含有权利要求2或3所述重组表达载体的毕赤酵母X-33。


7.抗菌肽NZX的制备方法，其特征在于，所述方法包括在发酵培养基中对权利要求6所述的重组毕赤酵母进行培养，并从发酵产物中分离抗菌肽NZX；
其中，所述抗菌肽NZX的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。


8.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建华，刘鹤，毛若雨，杨娜，滕达，王秀敏，郝娅，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11