本发明专利技术涉及一种拟除虫菊酯类农药代谢物的广谱特异性识别单链抗体及其应用，该单链抗体基因是以一株抗3‑苯氧基苯甲酸杂交瘤细胞株为模板，分别扩增其重链和轻链可变区基因进行构建，并在大肠杆菌中进行了可溶性表达，该单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；该单链抗体对多种拟除虫菊酯农药的代谢/降解产物，即3‑苯氧基苯甲酸、3‑苯氧基苯甲醛和3‑苯氧基苯甲醇具有广谱识别能力，在拟除虫菊酯类农药代谢物广谱筛查检测中具有良好的应用前景，亦可以用于单种代谢物的快速筛查检测。
Broad spectrum recognition of single chain antibody of pyrethroid pesticide metabolites and its application
The invention relates to a broad-spectrum specific recognition single chain antibody of pyrethroid pesticide metabolites and its application. The single chain antibody gene is constructed by amplifying the heavy chain and light chain variable region genes of an anti-3-phenoxybenzoic acid hybridoma cell line as a template, and expressed in E The nucleotide sequence is shown in SEQ ID No.4. The scFv has broad-spectrum recognition ability for the metabolites / degradation products of a variety of pyrethroid pesticides, i.e. 3 \u2011 phenoxybenzoic acid, 3 \u2011 phenoxybenzaldehyde and 3 \u2011 phenoxybenzyl alcohol. It has a good application prospect in the broad-spectrum screening and detection of pyrethroid pesticide metabolites, and can also be used for the rapid screening of single metabolites Check up.
【技术实现步骤摘要】
拟除虫菊酯类农药代谢物的广谱识别单链抗体及其应用
本专利技术涉及基因工程抗体，特别是一种对拟除虫菊酯类农药代谢物具有广谱识别能力的单链抗体及其应用。
技术介绍
拟除虫菊酯类农药具有哺乳动物低毒、杀虫活性好等优点，在世界范围内被泛应用于农业和卫生害虫控制(Tang,Wetl,Pyrethroidpesticideresiduesintheglobalenvironment:Anoverview.Chemosphere2018,191,990-1007.)。当拟除虫菊酯类农药进入环境或通过食物链进入有机体后，拟除虫菊酯农药通过各种生物或非生物的方式发生降解或代谢。其中3-苯氧基本甲酸(3-phenoxybenzoicacid,3-PBA)、3-苯氧基苯甲醛(3-phenoxybenzaldehyde,PBAld)和3-苯氧基苯甲醇(3-phenoxybenzylalcohol,PBAlc)是拟除虫菊酯农药主要的降解/代谢产物，可作为菊酯农药生物标志物检测(Yusa,V.；Millet,M.；Coscolla,C.；Pardo,O.；Roca,M.,Occurrenceofbiomarkersofpesticideexposureinnon-invasivehumanspecimens.Chemosphere2015,139,91-108.)。另外这三种化合物本身也具有激素/抗激素活性及水生生物毒性，对人类、生物及环境健康造成威胁(Tyler,C.R.；Beresford,N.；vanderWoning,M.；Sumpter,J.P.；Thorpe,K.,Metabolismandenvironmentaldegradationofpyrethroidinsecticidesproducecompoundswithendocrineactivities.EnvironmentalToxicologyandChemistry2000,19(4),801-809.)。目前拟除虫菊酯类农药代谢物(3-苯氧基苯甲酸、3-苯氧基苯甲醛和3-苯氧基苯甲醇)的检测方法主要包括液相色谱法和气相色谱法，其检测灵敏度可以达到ppb级(Abu-Qare,A.W.；Abou-Donia,M.B.,Simultaneousdeterminationofchlorpyrifos,permethrin,andtheirmetabolitesinratplasmaandurinebyhigh-performanceliquidchromatography.JournalofAnalyticalToxicology2001,25(4),275-279；Lin,C.H.；Yan,C.T.；Kumar,P.V.；Li,H.P.；Jen,J.F.,Determinationofpyrethroidmetabolitesinhumanurineusingliquidphasemicroextractioncoupledin-syringederivatizationfollowedbygaschromatography/electroncapturedetection.AnalyticalandBioanalyticalChemistry2011,401(3),927-937；Mortimer,R.D.；Shields,J.B.,Determinationoftotalfreeandglucose-conjugated3-phenoxybenzylalcoholresiduesinfoodsbygaschromatographywithelectroncapturedetection.JournalofAoacInternational1996,79(4),967-971；Bernal,J.L.；Jimenez,J.J.；delNozal,M.J.；Higes,M.；Llorente,J.,Gaschromatographicdeterminationofacrinathrineand3-phenoxybenzaldehyderesiduesinhoney.JChromatogrA2000,882(1-2),239-43.)。虽然这些方法较为准确，但是对大型仪器的依赖程度较高，前处理方法较为复杂，步骤繁琐，且检测成本较高。免疫分析法具有检测成本低，检测通量大等优点是色谱法有效的替代技术，特别适用于大量样本的快速筛查检测。目前国际上已有关于3-苯氧基苯甲酸免疫分析方法的报道，其分别采用了多克隆抗体(Shan,G.；Huang,H.；Stoutamire,D.W.；Gee,S.J.；Leng,G.；Hammock,B.D.,Asensitiveclassspecificimmunoassayforthedetectionofpyrethroidmetabolitesinhumanurine.ChemResToxicol2004,17(2),218-25.)，重链单域抗体(Kim,H.J.；McCoy,M.R.；Majkova,Z.；Dechant,J.E.；Gee,S.J.；Tabares-daRosa,S.；Gonzalez-Sapienza,G.G.；Hammock,B.D.,Isolationofalpacaanti-haptenheavychainsingledomainantibodiesfordevelopmentofsensitiveimmunoassay.AnalChem2012,84(2),1165-71.)和抗3-苯氧基苯甲酸和多抗免疫复合物的短肽作为生物识别分子(Gonzalez-Techera,A.；Kim,H.J.；Gee,S.J.；Last,J.A.；Hammock,B.D.；Gonzalez-Sapienza,G.,Polyclonalantibody-basednoncompetitiveimmunoassayforsmallanalytesdevelopedwithshortpeptideloopsisolatedfromphagelibraries.AnalChem2007,79(23),9191-6.)。这些抗体虽然具有较高的灵敏度，但是其特异性较强，对菊酯农药的另外两种代谢产物3-苯氧基苯甲醛和3-苯氧基苯甲醇不具有广谱识别作用，故这些抗体不能用于这两种菊酯农药代谢物的广谱检测。此外虽然有学者报道过识别3-苯氧基苯甲醇和甘氨酸复合物的抗体制备，然而作者没有给出该抗体对游离态的3-苯氧基苯甲醇的识别数据(]Kim,H.J.；Ahn,K.C.；Ma,S.J.；Gee,S.J.；Hammock,B.D.,Developmentofsensitiveimmunoassaysforthedetectionoftheglucuronideconjugateof3-phenoxybenzylalcohol,aputativehumanurinarybiomarkerforpyrethroidexposure.JAgricFoodChem2007,55(10)本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种拟除虫菊酯类农药代谢物的广谱识别单链抗体，其特征在于，所述单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种拟除虫菊酯类农药代谢物的广谱识别单链抗体，其特征在于，所述单链抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。
2.如权利要求1所述的单链抗体，其特征在于，所述单链抗体包括氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的重链可变区和氨基酸序列...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘媛，张霄，徐重新，胡晓丹，林曼曼，谢雅晶，张存政，刘贤金，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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