用于制备生物样品的方法以及用于固封显微镜载玻片的组合物技术

本发明专利技术的主题是用于制备生物学、细胞学、组织学和解剖学样品的方法以及用于固封显微镜载玻片的组合物。本发明专利技术的主题还涉及用本文所述组合物固封的样品。

Method for preparing biological sample and composition for fixing microscope slide

The subject matter of the invention is a method for preparing biological, cytological, histological and anatomical samples and a composition for fixing microscope slides. The subject matter of the invention also relates to a sample sealed with the composition described herein.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于制备生物样品的方法以及用于固封显微镜载玻片的组合物专利技术概述本专利技术的主题是用于制备生物学、细胞学、组织学和解剖学(autopsical)样品的方法以及用于固封显微镜载玻片的组合物。本专利技术的主题还涉及用本文所述组合物固封的样品。专利技术背景在组织细胞病理学诊断中，生物样品的显微镜观察用于诊断的制定。生物样品(即，组织和细胞)的制备是多阶段过程，其利用自动技术和/或手动方案使样品本身适合于显微镜观察。如本领域已知的，样品经历几个过程，其在“固封”在显微镜载玻片上之前为显微镜分析提供固定、透明化(diaphanization)和染色。“固封”包括用盖玻片覆盖显微镜载玻片上的样品，所述盖玻片通常具有小于1毫米的厚度。通过使用折射率与显微镜载玻片相似的固封介质，实现了盖玻片与显微镜载玻片的稳定粘附。固封介质是粘性物质，通常可溶于有机溶剂，作为粘合剂，并且一旦干燥能确保样品的良好保存。而且，基本要求是用于固封的所有材料都是超透明的，以便允许来自光源的光定量地到达物镜。最常见的固封介质是加拿大香脂(Canadabalsam)(也称为加拿大松脂)。然后，固封的显微镜载玻片在光学显微镜下进行观察，以制定诊断。显微镜载玻片的固封是一种组织细胞病理学样品的包装，并且显著影响其随时间流逝的抗老化和可读性。因此，固封的目的是允许待分析样品在具有合适折射率的介质内，即，类似于玻璃的折射率，以避免在显微镜观察期间可能的图像变形。固封的另一目的是保护样品，并且允许其长期保存。在固封显微镜载玻片的实践过程中，在进行用水溶性物质染色(例如，典型的苏木紫和曙红染色剂)后，需要进行样品脱水，包括以增加的醇尺度浸泡显微镜载玻片，最后通过二甲苯。由于上述固封介质不能与水或其溶液混合，因此脱水是必要的。在适当脱水后，通过一次性移液管将等份试样的固封介质沉积在显微镜载玻片上，观察任何过量的固封介质。之后，将薄的盖玻片放置在显微镜载玻片上。可以手动或者通过使用自动盖玻器自动进行该过程。标准的自动盖玻器可以将盖玻片依次施加在载有样品切片的显微镜载玻片上，通过直接从用于染色的筐(basket)中取出。在染色结束后，将筐放置在自动盖玻器的托盘中，随后夹具从框中一次取出显微镜载玻片，并将其置于供应固封介质的喷嘴下方的水平位置。在供应固封介质的等分试样后，用吸盘将盖玻片放在显微镜载玻片上，从而完成制备物制备。这些自动盖玻器中的一些不使用盖玻片，而是使用在用二甲苯适当浸泡之后显微镜载玻片表面上所释放的膜，以允许适当的粘附。然而，上文简要描述的正确使用的样品固封过程具有若干缺点。当采用手动固封过程时，需要使用通风橱。事实上，它用于限制因使用有毒物质(如二甲苯)而产生的风险，这些有毒物质(如二甲苯)用于切片处理和作为固封介质的稀释剂。此外，存在盖玻片在显微镜载玻片上正确定位的关键问题(在手动和自动固封的情况下)。可能发生盖玻片从显微镜载玻片的边缘略微伸出，并且在未对准更严重的情况下，盖玻片必须由使用者重新固封。然而，一旦固封介质变干，该操作就变得不可逆。如果使用干燥的固封介质进行操作，固封的显微镜载玻片在某些情况下应在二甲苯中保留长达3-4天，然后才能移除未对准的盖玻片，以便再次固封另一个。此外，显微镜有一个钩在移动托盘上的金属夹，可用于在观察期间保持显微镜载玻片固定。在将显微镜载玻片定位在透镜下方期间，金属夹剧烈地撞击固封的显微镜载玻片，从而导致来自显微镜载玻片边缘的小碎片破碎。盖玻片在显微镜载玻片上的错误定位会使固封在显微镜上的显微镜载玻片的碎裂显著恶化，因为所产生的碎片会积聚在显微镜灯上(放置在显微镜载玻片下方)并且另外留下固封显微镜载玻片的危险碎裂边缘。此外，最常见的问题是在盖玻片和样品之间可能形成气泡。在固封过程期间，由于使用者的操作，容器的简单移动或用移液管收集固封介质(当沉积了过量固封介质时)会形成气泡。所有这些操作都引起盖玻片在显微镜载玻片上滑动，导致固封介质中包含小气泡。由于固封介质的高粘度，这些气泡仍然被困在其中，因此导致难以适当观察显微镜。自动固封系统(盖玻器)也会出现同样的问题。另一个缺点是固封介质的不准确和可能的大量输送。当该情况发生时，将需要去除从已固封的显微镜载玻片泄漏的多余固封介质，因为其具有强粘合力，因此显然使用者难以操作。去除多余的固封介质是精巧的工艺，因为盖玻片上可能的液体污迹会损害显微镜观察。制备物的“脱固封”是另一重要问题。事实上，在那些需要从长时间固封的显微镜载玻片中回收生物样品的情况下(为了进行进一步的测试)，为了能够移除盖玻片，如上所述，已固封的显微镜载玻片必须在二甲苯浴中保持至少3天。随时间流逝，实际上，固封介质变得不易溶于二甲苯(特别是用于溶解和/或稀释最常见固封介质的溶剂)。此外，如果没有适当进行固封介质的再溶解过程，则盖玻片的移除会导致样品与显微镜载玻片分离或部分样品被去除，从而不可避免地破坏样品本身的用于所需进一步测试的使用。因此，显然，固封是非常耗时的，与待固封的显微镜载玻片数量成比例，并且也是由于施加固封介质和盖玻片所要求的高精度。完成已固封的显微镜载玻片干燥所需的时间应加入该时间。因此，为了加速干燥过程，使已固封的显微镜载玻片在60℃烘箱中孵育约30分钟。关于自动过程，存在相对于手动过程的其他缺点。其中，存在仪器的精细校准。因为固封过程需要非常精确，因此设备需要毫米级校准，以避免宏观制备错误。例如，移动夹具的机构校准不准确会导致显微镜载玻片破裂；类似地，盖玻片的偏心(off-cencer)定位迫使使用者脱固封并再次固封制备物。此外，抽吸固封介质的设备的所有部件必须非常稳固，以避免形成气泡。还存在自动盖玻器，其使用薄膜代替盖玻片；该盖玻器需要精确校准，以确保薄膜均匀铺展并且不会在显微镜载玻片上产生伪影。此外，由于其是高精度仪器，因此，必须放置在专用隔震台上，并且也可以放置在抗震地板上。此外，有利的是将仪器置于护罩下完全水平的位置，并且清洁操作通常用二甲苯进行。另外，仪器的清洁过程需要每天进行。在结束使用自动盖玻器时，必须从分配器单元、扣钩(clasp)和传送带以及从递送固封介质的喷嘴去除固封介质的残留物。该清洁过程是用浸有二甲苯的抹布进行的，二甲苯对使用者是有毒的，如果仪器没有放在通风橱下面则尤为如此。还应特别注意避免液体渗透到仪器和电接点内。此外，如果一些溶剂留在仪器内，则可能会出现溶剂蒸气。使用没有通风橱的设备，存在着火和中毒的风险。因为小的显微镜载玻片碎片频繁破损，由于整个系统校准时的小瑕疵，必须从传送带、收集显微镜载玻片的框、装载框、真空杯和仪器的内部隔室去除上述碎片。另外，显然需要对所用仪器进行多个维护过程。最后，用于免疫组织化学分析的显微镜载玻片通常在生物样品定位之前在磨砂端具有条形码标签。识别所需的这种标签可能是自动盖玻器扣钩的故障源，因为来自标签的胶水残留物常常积聚在扣钩上，因此需要二甲苯清洁。鉴于上述情况，显然需要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种固封用于生物学、细胞学、组织学和解剖学样品分析的显微镜载玻片的方法，所述方法包括将所述显微镜载玻片浸渍到至少一种流体组合物中，所述流体组合物包含：/na)选自下组的至少一种液体组分：二甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯和异链烷烃基溶剂；以及/nb)选自聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚丙烯酸甲酯和聚丙烯酸乙酯的一种或多种聚合物或共聚物，其量为15％-80％。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170221 IT 1020170000190881.一种固封用于生物学、细胞学、组织学和解剖学样品分析的显微镜载玻片的方法，所述方法包括将所述显微镜载玻片浸渍到至少一种流体组合物中，所述流体组合物包含：
a)选自下组的至少一种液体组分：二甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯和异链烷烃基溶剂；以及
b)选自聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚丙烯酸甲酯和聚丙烯酸乙酯的一种或多种聚合物或共聚物，其量为15％-80％。


2.如权利要求1所述的固封用于生物学、细胞学、组织学和解剖学样品分析的显微镜载玻片的方法，所述方法包括：
(i)将所述显微镜载玻片浸渍在包含如下物质的至少一种流体组合物中：
a)选自下组的至少一种液体组分：二甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯和异链烷烃基溶剂；以及
b)选自聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚丙烯酸甲酯和聚丙烯酸乙酯的一种或多种聚合物或共聚物，其量为15％-80％；
(ii)从所述组合物中取出所述显微镜载玻片；
(iii)使其滴液；
(iv)任选地重复(i)至(iii)的步骤；以及
(v)使其空气干燥或用合适的方法对其进行干燥。


3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述一种或多种聚合物(b)的量为10-50％。


4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述一种或多种聚合物(b)中的至少一种是甲基丙烯酸甲酯/甲基丙烯酸丁酯共聚物。


5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述至少一种液体组分(a)选自下组：乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯和它们的混合物。


6.一种固封用于生物学、细胞学、组织学和解剖学样品分析的显微镜载玻片的组合物，所述组合物包含：
a')选自下组的液体组分：乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯和它们的混合物；以及
b')选自聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·路珀，F·美仑，A·巴蒂斯特尔，F·博伽弥米，V·博伽弥米，
申请(专利权)人：戴尔帕斯有限公司，
类型：发明
国别省市：意大利;IT