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晚疫病抗性基因及使用方法技术

技术编号:22569537 阅读:42 留言:0更新日期:2019-11-17 10:01
提供了用于增强植物对由疫霉属物种引起的植物疾病的抗性的组合物和方法。该组合物包含编码抗性(R)基因产物及其变体的核酸分子和包含此类核酸分子的植物、种子和植物细胞。用于增强植物对由疫霉属物种引起的植物疾病的抗性的方法包括将编码R基因产物的核酸分子引入植物细胞。另外提供了在农业中使用所述植物来限制植物疾病的方法。

Resistance gene of late blight and its application

Compositions and methods for enhancing the resistance of plants to plant diseases caused by Phytophthora species are provided. The composition comprises a nucleic acid molecule encoding a resistance (R) gene product and variants thereof and a plant, seed and plant cell including such nucleic acid molecule. Methods for enhancing plant resistance to plant diseases caused by Phytophthora species include the introduction of nucleic acid molecules encoding R gene products into plant cells. A method for limiting plant diseases by using the plant in agriculture is also provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】晚疫病抗性基因及使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年12月16日提交的美国临时专利申请第62/435,451的权益,该临时专利申请通过引用整体并入本文。作为文本文件提交的序列表的引用将序列表的官方副本作为ASCII格式的序列表通过EFS-Web以电子方式提交,其文件名为070294-0127SEQLST.TXT,创建于2017年12月11日,大小为440千字节,并与说明书同时提交。该ASCII格式文件中包含的序列表是说明书的一部分,并且通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及基因分离和植物改良领域,特别地涉及通过使用抗病基因增强植物对植物疾病的抗性。专利技术背景由卵菌纲(oomycete)病原体致病疫霉(Phytophthorainfestans)引起的晚疫病是栽培马铃薯(Solanumtuberosum)和番茄(Solanumlycopersicum)的破坏性疾病,造成每年数十亿美元的损失(Jones(2014)Philos.Trans.R.Soc.Lond.BBiol.Sci.369:20130087-20130087)。据估计,仅在欧洲,马铃薯生产的晚疫病成本超过10亿欧元,包括由病原体引起的控制和损害的成本(Haverkort(2008)PotatoRes.51:47-57)。植物育种者通常一次从野生亲属向栽培马铃薯中引入一种Rpi(即对致病疫霉的抗性)基因。然而,这个过程既费力又缓慢,到目前为止已经导致Rpi基因被新的致病疫霉种族克服,其时间短于培育含有其的新马铃薯品种所花的时间(Jones等,2014)。转基因方法允许同时引入几个基因('基因堆叠'),从而提供更持久的抗性。已经报道了几种赋予晚疫病抗性的主要基因,然而由于致病疫霉的快速进化,仍然需要克隆另外的Rpi基因。克隆的Rpi基因及其功能性等位基因包括例如来自落果薯(Solanumdemissum)的Rpi-blb1/RB(vanderVossen等(2003)PlantJ.36:867-882;Song等(2003)PNAS100:9128-9133)及其分别来自葡枝马铃薯(S.stoloniferum)和S.papita的同源物Rpi-sto1和Rpi-pta1(Vleeshouwers等(2008)PLOSONE3:e2875);来自落果薯的Rpi-blb2(vanderVossenEA等(2005)PlantJ.44:208-222);来自球栗薯(S.bulbocastanum)的Rpi-blb3及其同源物Rpi-abpt和R2-like和来自落果薯的R2(Lokossou等(2009)MPMI22:630-641)和由Champouret((2010)“FunctionalgenomicsofPhytophthorainfestanseffectorsandSolanumresistancegenes,”Ph.D.Thesis,WageningenUniv.,Wageningen)描述的分别来自S.edinense、S.schenckii和S.hjertingii的另外的同源物Rpi-edn1.1、Rpi-edn1.2、Rpi-snk1.1、Rpi-snk1.2和Rpi-hjt1.1-Rpi-hjt1.3;来自落果薯的Rpi-bt1(Oosumi等(2009)Amer.J.PotatoRes.86:456-465);来自落果薯的R1(Ballvora等(2002)PlantJ.30:361-71);来自落果薯的R3a和R3b(分别地Huang等(2005)PlantJ.42:261-271;Li等(2011)MPMI24:1132-114);来自文丘里茄(S.venturii)的Rpi-vnt1.1、Rpi-vnt1.2、Rpi-vnt1.3(Foster等(2009)MPMI22:589-600;Pel等(2009)MPMI22:601-615;WO2009013468);来自S.mochiquense的Rpi-mcq1(WO2009013468);来自恰柯薯(S.chacoense)的Rpi-chc(WO2011/034433)和来自醋栗番茄(S.pimpinellifolium)的Ph-3(Zhang等(2014)Theor.Appl.Genet.127:1353-1364).。龙葵(Solanumnigrum)和密切相关的物种通常被认为是致病疫霉感染的非寄主。它们在实验室条件下不被感染,并且在田间很少观察到感染(Lebecka(2009)Eur.J.PlantPathol.124:345-348)。然而,有一篇关于龙葵对致病疫霉感染的易感性,以及当敏感品系与抗性品系杂交并且F1自交产生F2后代时抗性的孟德尔分离的报道(Lebecka(2008)Eur.J.PlantPathol.120:233-240;Lebecka(2009)Eur.J.PlantPathol.124:345-348)。在强病原体压力下的这种抗性表明,存在于龙葵中的抗性基因可能具有独特的功效和识别特异性,使得它们值得克隆和表征。龙葵是一种复杂多倍体来源的六倍体植物,使经典的图位克隆(map-basedcloning)既费力又耗时。最近,报道了来自少花龙葵的墨西哥登录号的新Rpi基因Rpi-amr3i的克隆(Witek等(2016)Nat.Biotechnol.34:656)。少花龙葵是一种在世界范围内生长的草本开花植物,据报道它是龙葵的推定的二倍体祖先(Poczai和Hyvonen(2010)Mol.Biol.Rep.38:1171-1185)。由于可以克服现有Rpi基因的致病疫霉小种的快速进化,因此将很快需要额外的新Rpi基因来对抗马铃薯和番茄中的晚疫病。因为从二倍体茄科物种如少花龙葵中克隆新的Rpi基因预计比从具有复杂的多倍体基因组的茄科物种如S.nigrum中克隆Rpi基因所花费的时间更少,所以使用二倍体茄科物种作为Rpi基因来源可以让研究人员更快地克隆新的Rpi基因,为植物育种者提供抗致病疫霉引起的晚疫病的新抗性来源。
技术实现思路
本专利技术提供了抗性(R)基因的核酸分子,所述抗性基因能够赋予植物特别是茄科植物对已知会在植物中引起植物疾病的疫霉属物种(sp.)的至少一种小种的抗性。在一个实施方案中,本专利技术提供了包含R基因的核酸分子,其在本文中称为Rpi-amr1e,以及其变体,包括例如Rpi-amr1e的等位基因、Rpi-amr1e的同源物和其他天然的和非天然存在的Rpi-amr1e变体。在另一个实施方案中,本专利技术提供了包含R基因的核酸分子,所述R基因在本文中称为Rpi-amr6b,以及其变体,包括例如Rpi-amr6b的等位基因、Rpi-amr6b的同源物和其他天然的和非天然存在的Rpi-amr6b的变体。在另一个实施方案中,本专利技术提供了包含R基因的核酸分子,所述R基因在本文中称为Rpi-amr7d,以及其变体,包括例如Rpi-amr7d的等位基因和Rpi-amr7d的同源物,以及其他天然和非天然存在本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种核酸分子,其包含选自由以下组成的组的核苷酸序列:/n(a)SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、31、32、33、34、35、46、51、56或61中所示的核苷酸序列;/n(b)编码SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、24、28、29、30、41、42、43、44、45、47、48、52、53、57、58、62或63中所示的氨基酸序列的核苷酸序列,并且任选地,其中所述核苷酸序列不是天然存在的;/n(c)SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、23、25、26、27、36、37、38、39、40、49、50、54、55、59、60、64或65中所示的核苷酸序列;/n(d)与SEQ ID NOS:1、3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18、19、21、22、23、25、26、27、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、46、49、50、51、54、55、56、59、60、61、64和65中所示的核苷酸序列中的至少一个具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,其中所述核酸分子能够赋予包含所述核酸分子的植物对由至少一个疫霉属的种(Phytophthora sp.)的至少一个小种引起的植物疾病的抗性,并且任选地,其中所述核苷酸序列不是天然存在的;以及/n(e)核酸分子,其包含编码与SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、24、28、29、30、41、42、43、44、45、47、48、52、53、57、58、62和63中所示的氨基酸序列的至少一个具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的核苷酸序列,其中所述核酸分子能够赋予包含所述核酸分子的植物对由至少一个疫霉属的种的至少一个小种引起的植物疾病的抗性,并且任选地,其中所述核苷酸序列不是天然存在的。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161216 US 62/435,4511.一种核酸分子,其包含选自由以下组成的组的核苷酸序列:
(a)SEQIDNO:1、4、7、10、13、16、19、22、31、32、33、34、35、46、51、56或61中所示的核苷酸序列;
(b)编码SEQIDNO:2、5、8、11、14、17、20、24、28、29、30、41、42、43、44、45、47、48、52、53、57、58、62或63中所示的氨基酸序列的核苷酸序列,并且任选地,其中所述核苷酸序列不是天然存在的;
(c)SEQIDNO:3、6、9、12、15、18、21、23、25、26、27、36、37、38、39、40、49、50、54、55、59、60、64或65中所示的核苷酸序列;
(d)与SEQIDNOS:1、3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18、19、21、22、23、25、26、27、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、46、49、50、51、54、55、56、59、60、61、64和65中所示的核苷酸序列中的至少一个具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,其中所述核酸分子能够赋予包含所述核酸分子的植物对由至少一个疫霉属的种(Phytophthorasp.)的至少一个小种引起的植物疾病的抗性,并且任选地,其中所述核苷酸序列不是天然存在的;以及
(e)核酸分子,其包含编码与SEQIDNO:2、5、8、11、14、17、20、24、28、29、30、41、42、43、44、45、47、48、52、53、57、58、62和63中所示的氨基酸序列的至少一个具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的核苷酸序列,其中所述核酸分子能够赋予包含所述核酸分子的植物对由至少一个疫霉属的种的至少一个小种引起的植物疾病的抗性,并且任选地,其中所述核苷酸序列不是天然存在的。


2.权利要求1的核酸分子,其中所述核酸分子是分离的核酸分子。


3.一种表达盒,其包含权利要求1或2的核酸分子和可操作地连接的异源启动子。


4.一种载体,其包含权利要求1或2的核酸分子或权利要求3的表达盒。


5.权利要求4的载体,其还包含另外的R基因。


6.一种宿主细胞,其已用权利要求1或2的核酸分子、权利要求3的表达盒或权利要求4或5的载体进行转化。


7.权利要求6的宿主细胞,其中所述宿主细胞是植物细胞、细菌、真菌细胞或动物细胞。


8.权利要求6或7的宿主细胞,其中所述宿主细胞是茄科植物细胞。


9.一种植物或植物细胞,其包含权利要求1或2的核酸分子、权利要求3的表达盒或权利要求4或5的载体。


10.权利要求9的植物或植物细胞,其中所述植物是茄科植物,并且所述植物细胞是茄科植物细胞。


11.权利要求10的植物,其中所述茄科植物不是少花龙葵(Solanumamericanum)和/或Solanumnigrescens,或其中所述茄科植物选自马铃薯、番茄、茄子、胡椒、烟草和矮牵牛。


12.一种植物,其包含在其基因组中稳定整合的异源多核苷酸,所述异源多核苷酸包含选自由以下组成的组的核苷酸序列:
(a)SEQIDNO:1、4、7、10、13、16、19、22、31、32、33、34、35、46、51、56或61中所示的核苷酸序列;
(b)编码SEQIDNO:2、5、8、11、14、17、20、24、28、29、30、41、42、43、44、45、47、48、52、53、57、58、62或63中所示的氨基酸序列的核苷酸序列;
(c)SEQIDNO:3、6、9、12、15、18、21、23、25、26、27、36、37、38、39、40、49、50、54、55、59、60、64或65中所示的核苷酸序列;
(d)与SEQIDNOS:1、3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18、19、21、22、23、25、26、27、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、46、49、50、51、54、55、56、59、60、61、64和65中所示的至少一个核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,其中所述核酸分子能够赋予包含所述核酸分子的植物对由至少一个疫霉属的种的至少一个小种引起的植物疾病的抗性;以及
(e)核酸分子,其包含编码与SEQIDNO:2、5、8、11、14、17、20、24、28、29、30、41、42、43、44、45、47、48、52、53、57、58、62和63中所示的至少一个氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的核苷酸序列,其中所述核酸分子能够赋予包含所述核酸分子的植物对由至少一个疫霉属的种的至少一个小种引起的植物疾病的抗性。


13.权利要求12的植物,其中所述异源多核苷酸包含(b)-(e)中任一个的核苷酸序列,并且还包含可操作地连接用于在植物中表达所述核苷酸序列的启动子。


14.权利要求13的植物,其中所述启动子选自病原体诱导型启动子、组成型启动子、组织优选启动子、伤口诱导型启动子和化学调节型启动子。


15.权利要求12-14中任一项的权利要求的植物,其中所述植物是茄科植物。


16.权利要求12-15中任一项的权利要求的植物,其中所述茄科植物选自马铃薯、番茄、茄子、胡椒、烟草和矮牵牛。


17.权利要求12-16中任一项的植物,其中所述植物包含相对于对照植物而言增强的对由至少一个疫霉属的种的至少一个小种引起的植物疾病的抗性。


18.权利要求17的植物,其中所述植物包含相对于对照植物而言增强的对由致病疫霉(Phytophthorainfestans)的至少一个小种引起的晚疫病的抗性。


19.权利要求12-18中任一项的植物,其中所述植物是马铃薯或番茄植物。


20.一种增强植物对由至少一个疫霉属的种的至少一个小种引起的植物疾病的抗性的方法,所述方法包括修饰至少一种植物细胞以包含异源多核苷酸,所述异源多核苷酸包含选自由以下组成的组的核苷酸序列:
(a)SEQIDNO:1、4、7、10、13、16、19、22、31、32、33、34、35、46、51、56或61中所示的核苷酸序列;
(b)编码SEQIDNO:2、5、8、11、14、17、20、24、28、29、30、41、42、43、44、45、47、48、52、53、57、58、62或63中所示的氨基酸序列的核苷酸序列;
(c)SEQIDNO:3、6、9、12、15、18、21、23、25、26、27、36、37、38、39、40、49、50、54、55、59、60、64或65中所示的核苷酸序列;
(d)与SEQIDNOS:1、3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18、19、21、22、23、25、26、27、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、46、49、50、51、54、55、56、59、60、61、64和65中所示的至少一个核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,其中所述核酸分子能够赋予包含所述核酸分子的植物对由至少一个疫霉属的种的至少一个小种引起的植物疾病的抗性;以及
(e)核酸分子,其包含编码与SEQIDNO:2、5、8、11、14、17、20、24、28、29、30、41、42、43、44、45、47、48、52、53、57、58、62和63中所示的至少一个氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的核苷酸序列,其中所述核酸分子能够赋予包含所述核酸分子的植物对由至少一个疫霉属的种的至少一个小种引起的植物疾病的抗性。


21.权利要求20的方法,其中所述异源多核苷酸稳定整合到植物细胞的基因组中。


22.权利要求20或21的方法,其中将所述植物细胞再生成在其基因组中包含所述异源多核苷酸的植物。


23.权利要求20-22中任一项的方法,其中修饰至少一种植物细胞以包含异源多核苷酸包括将所述异源多核苷酸引入至少一种植物细胞中。


24.权利要求20-23中任一项的方法,其中所述异源多核苷酸包含(b)-(e)中任一个的核苷酸序列,并且还包含可操作地连接用于在植物中表达所述核苷酸序列的启动子。


25.权利要求24的方法,其中所述启动子选自病原体诱导型启动子、组成型启动子、组织优选型启动子、伤口诱导型启动子和化学调节型启动子。


26.权利要求20-22中任一项的方法,其中修饰至少一种植物细胞以包含异源多核苷酸包括使用基因组编辑来修饰所述植物细胞基因组中的天然或非天然基因的核苷酸序列,以包含(a)-(e)中任一个的核苷酸序列。
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【专利技术属性】
技术研发人员:K·威泰克H·S·卡尔基F·G·居佩J·D·G·琼斯
申请(专利权)人:双刃基金会
类型:发明
国别省市:美国;US

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