无预先免疫步骤的HIV免疫疗法制造技术

本发明专利技术一般涉及用于治疗和预防HIV的免疫疗法。具体地，本公开提供了经优化以在不进行预先免疫步骤的情况下治疗HIV的慢病毒载体和相关方法。

HIV immunotherapy without pre immunization steps

The invention generally relates to immunotherapy for the treatment and prevention of HIV. In particular, the present disclosure provides lentivirus vectors and related methods optimized to treat HIV without prior immune steps.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】无预先免疫步骤的HIV免疫疗法相关申请的交叉引用本申请要求2017年1月9日提交的名为“无预先免疫步骤的HIV免疫疗法(HIVImmunotherapyWithNoPre-ImmunizationStep)”的美国专利申请号62/444,147的优先权，其公开内容通过引用纳入本文。
本专利技术一般涉及用于治疗和预防HIV的免疫疗法领域。具体地，所公开的治疗和预防方法涉及给予病毒载体和系统，用于在无预先免疫步骤的情况下递送基因，和其他治疗、诊断或研究用途。
技术介绍
联合抗逆转录病毒疗法(cART)(也称之为高活性抗逆转录病毒疗法或HAART)限制了HIV-1复制并阻碍疾病进展，但是药物毒性和抗药性病毒的出现对于HIV感染者的长期控制而言是挑战。此外，传统的抗逆转录病毒疗法虽然成功地延迟了AIDS的发作或死亡，但是尚未实现功能性治愈(functionalcure)。需要其他的治疗策略。表明免疫系统在限制HIV复制中具有主要(尽管通常是不足的)作用的数据促成了对HIV感染免疫疗法的浓厚兴趣。对于维持细胞溶解性T细胞(CTL)功能至关重要的病毒特异性T辅助细胞有可能起一定作用。病毒血症还受到中和抗体的影响，但它们在HIV感染中的量级通常较低，并且跟不上体内进化的病毒变体。这些数据一起表明，通过所谓的HIV免疫疗法，增加HIV特异性细胞免疫应答的强度和广度可能具有临床益处。一些研究已经测试了针对HIV的疫苗，但迄今为止，成功是有限的。此外，人们一直有兴趣通过利用基因治疗技术来增强HIV免疫疗法，但与其他免疫治疗方法一样，成功受到限制。由于特定的病毒包膜-宿主细胞受体相互作用和基因表达的病毒机制，病毒载体可用于将基因转导到靶细胞中。因此，病毒载体已被用作将基因转移到许多不同细胞类型中的载剂，所述细胞类型包括全T细胞或其他免疫细胞，以及胚胎、受精卵、分离的组织样品、原位组织靶标和培养的细胞。将外来或改变的基因导入细胞的能力能够用于治疗性干预，诸如基因治疗，诱导型多能干细胞的体细胞重编程和各种类型的免疫疗法。基因疗法是生物医学研究最成熟的领域之一，有潜力产生可能涉及病毒载体使用的新治疗剂。鉴于能够用于治疗的潜在基因种类繁多，递送这些基因的有效方式需要实现基因治疗作为治疗感染性和非感染性疾病的手段的愿景。包括鼠逆转录病毒、腺病毒、细小病毒(腺相关病毒)、牛痘病毒和疱疹病毒的一些病毒系统已被开发作为治疗性基因传递载体。开发病毒载体时必须要考虑许多因素，包括组织趋向性，病毒制剂稳定性、表达稳定性与控制，基因组包装能力和构建体依赖性载体稳定性。另外，病毒载体的体内应用常常受到针对病毒结构蛋白和/或转导的基因产物的宿主免疫应答的限制。因此，对于待用于体内治疗对象的病毒载体，毒性和安全性是必需克服的主要障碍。有大量人类基因治疗应用的历史实例已经遇到与针对基因递送载剂或治疗性基因产物的宿主免疫应答相关的问题。将数个病毒基因和一个或多个治疗性基因共同转导的病毒载体(例如，腺病毒)尤其存在问题。虽然慢病毒载体通常不诱导细胞毒性并且不引起强烈的宿主免疫应答，但携带数种免疫刺激基因产物的一些慢病毒载体如HIV-1有可能导致细胞毒性并诱导强烈的体内免疫应答。然而，对于在转导后不编码多个病毒基因的源自慢病毒的转导载体，这可能并不是一个问题。当然，情况可能并非总是如此，因为有时载体的目的是编码将激发临床有用的免疫应答的蛋白质。与慢病毒载体使用相关的另一重要问题是在暴露于一些细胞毒性病毒蛋白质时可能具有细胞病原性。暴露于某些HIV-1蛋白可能引起T细胞中的细胞死亡或功能性无反应。同样，通过重组生成能够复制的剧毒性病毒的可能性也常常是一个问题。因此，需要改善HIV治疗。专利技术概述在本公开的一个方面，公开了治疗对象HIV感染的方法。该方法包括从所述对象移出白细胞并纯化外周血单核细胞(PBMC)。该方法进一步包括使PBMC与治疗有效量的刺激剂离体接触；使用编码至少一种遗传元件的病毒递送系统离体转导PBMC；和培养转导的PBMC至少1天。可以培养转导的PBMC约1天至约35天。该方法还涉及将转导的PBMC输注到对象中。对象可以是人。刺激剂可以包括肽或肽的混合物。在优选的实施方式中，刺激剂包括gag肽。刺激剂可以包括疫苗。疫苗可以是HIV疫苗，并且在优选的实施方式中，HIV疫苗是MVA/HIV62B疫苗或其变体。在优选的实施方式中，病毒递送系统包括慢病毒颗粒。在一实施方式中，至少一种遗传元件可包括能够抑制趋化因子受体CCR5产生的小RNA或能够靶向HIVRNA序列的至少一种小RNA。在另一实施方式中，至少一种遗传元件可包括能够抑制趋化因子受体CCR5产生的小RNA和能够靶向HIVRNA序列的至少一种小RNA。HIVRNA序列可以包括HIVVif序列、HIVTat序列或其变体。至少一种遗传元件可以包括微小RNA或shRNA。在优选实施方式中，至少一种遗传元件包括微小RNA簇。在另一方面，至少一种遗传元件包括与AGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGACTGTAAACTGAGCTTGCTCTACTGTGAAGCCACAGATGGGTAGAGCAAGCACAGTTTACCGCTGCCTACTGCCTCGGACTTCAAGGGGCTT(SEQIDNO:1)具有至少80％，或至少85％，或至少90％或至少95％百分比相同性的微小RNA。在优选实施方式中，至少一种遗传元件包括AGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGACTGTAAACTGAGCTTGCTCTACTGTGAAGCCACAGATGGGTAGAGCAAGCACAGTTTACCGCTGCCTACTGCCTCGGACTTCAAGGGGCTT(SEQIDNO:1)。在另一方面，至少一种遗传元件包括微小RNA，其与CATCTCCATGGCTGTACCACCTTGTCGGGGGATGTGTACTTCTGAACTTGTGTTGAATCTCATGGAGTTCAGAAGAACACATCCGCACTGACATTTTGGTATCTTTCATCTGACCA(SEQIDNO:2)具有至少至少80％，或至少85％，或至少90％或至少95％百分比相同性；或与GGGCCTGGCTCGAGCAGGGGGCGAGGGATTCCGCTTCTTCCTGCCATAGCGTGGTCCCCTCCCCTATGGCAGGCAGAAGCGGCACCTTCCCTCCCAATGACCGCGTCTTCGTCG(SEQIDNO:3)具有至少至少80％，或至少85％，或至少90％或至少95％百分比相同性。在优选实施方式中，至少一种遗传元件包括CATCTCCATGGCTGTACCACCTTGTCGGGGGATGTGTACTTCTGAACTTGTGTTGAATCTCATGGAGTTCAGAAGAACACATCCGCACTGACATTTTGGTATCTTTCATCTGACCA(SEQIDNO:2)；或GGGCCTGGCTCGAGCA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种处理感染HIV的细胞的方法，所述方法包括：/n(a)将分离自感染HIV的对象的外周血单核细胞(PBMC)与治疗有效量的刺激剂接触，其中所述接触离体进行；/n(b)使用编码至少一种遗传元件的病毒递送系统离体转导所述PBMC；和/n(c)培养该转导的PBMC至少1天。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170109 US 62/444,1471.一种处理感染HIV的细胞的方法，所述方法包括：
(a)将分离自感染HIV的对象的外周血单核细胞(PBMC)与治疗有效量的刺激剂接触，其中所述接触离体进行；
(b)使用编码至少一种遗传元件的病毒递送系统离体转导所述PBMC；和
(c)培养该转导的PBMC至少1天。


2.如权利要求1所述的方法，其中，所述转导的PBMC培养约1至约35天。


3.如权利要求1所述的方法，其还包括将所述转导的PBMC输注到对象中。


4.如权利要求3所述的方法，其中，所述对象是人。


5.如权利要求1所述的方法，其中，所述刺激剂包括肽。


6.如权利要求5所述的方法，其中，所述肽包括gag肽。


7.如权利要求1所述的方法，其中，所述刺激剂包括疫苗。


8.如权利要求7所述的方法，其中，所述疫苗包括HIV疫苗。


9.如权利要求8所述的方法，其中，所述HIV疫苗包括MVA/HIV62B疫苗或其变体。


10.如权利要求1所述的方法，其中，所述病毒递送系统包括慢病毒颗粒。


11.如权利要求1所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括能够抑制趋化因子受体CCR5产生的小RNA或能够靶向HIVRNA序列的至少一种小RNA。


12.如权利要求1所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括能够抑制趋化因子受体CCR5产生的小RNA和能够靶向HIVRNA序列的至少一种小RNA。


13.如权利要求11或12所述的方法，其中，所述HIVRNA序列包括HIVVif序列、HIVTat序列或其变体。


14.如权利要求11或12所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括微小RNA或shRNA。


15.如权利要求14所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括微小RNA簇。


16.如权利要求14所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括与AGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGACTGTAAACTGAGCTTGCTCTACTGTGAAGCCACAGATGGGTAGAGCAAGCACAGTTTACCGCTGCCTACTGCCTCGGACTTCAAGGGGCTT(SEQIDNO:1)具有至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％百分比相同性的微小RNA。


17.如权利要求14所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括AGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGACTGTAAACTGAGCTTGCTCTACTGTGAAGCCACAGATGGGTAGAGCAAGCACAGTTTACCGCTGCCTACTGCCTCGGACTTCAAGGGGCTT(SEQIDNO:1)。


18.如权利要求14所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括微小RNA，所述微小RNA：
a.与CATCTCCATGGCTGTACCACCTTGTCGGGGGATGTGTACTTCTGAACTTGTGTTGAATCTCATGGAGTTCAGAAGAACACATCCGCACTGACATTTTGGTATCTTTCATCTGACCA(SEQIDNO:2)具有至少80％、或至少85％、或至少90％或至少95％百分比相同性；或
b.与GGGCCTGGCTCGAGCAGGGGGCGAGGGATTCCGCTTCTTCCTGCCATAGCGTGGTCCCCTCCCCTATGGCAGGCAGAAGCGGCACCTTCCCTCCCAATGACCGCGTCTTCGTCG(SEQIDNO:3)具有至少80％、或至少85％、或至少90％或至少95％百分比相同性。


19.如权利要求14所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括：
a.CATCTCCATGGCTGTACCACCTTGTCGGGGGATGTGTACTTCTGAACTTGTGTTGAATCTCATGGAGTTCAGAAGAACACATCCGCACTGACATTTTGGTATCTTTCATCTGACCA(SEQIDNO:2)；或
b.GGGCCTGGCTCGAGCAGGGGGCGAGGGATTCCGCTTCTTCCTGCCATAGCGTGGTCCCCTCCCCTATGGCAGGCAGAAGCGGCACCTTCCCTCCCAATGACCGCGTCTTCGTCG(SEQIDNO:3)。


20.如权利要求15所述的方法，其中，所述微小RNA簇包括与AGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGACTGTAAACTGAGCTTGCTCTACTGTGAAGCCACAGATGGGTAGAGCAAGCACAGTTTACCGCTGCCTACTGCCTCGGACTTCAAGGGGCTTCCCGGGCATCTCCATGGCTGTACCACCTTGTCGGGGGATGTGTACTTCTGAACTTGTGTTGAATCTCATGGAGTTCAGAAGAACACATCCGCACTGACATTTTGGTATCTTTCATCTGACCAGCTAGCGGGCCTGGCTCGAGCAGGGGGCGAGGGATTCCGCTTCTTCCTGCCATAGCGTGGTCCCCTCCCCTATGGCAGGCAGAAGCGGCACCTTCCCTCCCAATGACCGCGTCTTCGTC(SEQIDNO:31)具有至少80％、或至少85％、或至少90％或至少95％百分比相同性的序列。


21.如权利要求15所述的方法，其中，所述微小RNA簇包括AGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGACTGTAAACTGAGCTTGCTCTACTGTGAAGCCACAGATGGGTAGAGCAAGCACAGTTTACCGCTGCCTACTGCCTCGGACTTCAAGGGGCTTCCCGGGCATCTCCATGGCTGTACCACCTTGTCGGGGGATGTGTACTTCTGAACTTGTGTTGAATCTCATGGAGTTCAGAAGAACACATCCGCACTGACATTTTGGTATCTTTCATCTGACCAGCTAGCGGGCCTGGCTCGAGCAGGGGGCGAGGGATTCCGCTTCTTCCTGCCATAGCGTGGTCCCCTCCCCTATGGCAGGCAGAAGCGGCACCTTCCCTCCCAATGACCGCGTCTTCGTC(SEQIDNO:31)。


22.一种治疗对象中HIV感染的方法，所述方法包括：
(a)移出所述对象的白细胞并纯化外周血单核细胞(PBMC)；
(b)将所述PBMC与治疗有效量的刺激剂离体接触；
(c)使用编码至少一种遗传元件的病毒递送系统离体转导所述PBMC；
(d)培养该转导的PBMC至少1天。


23.如权利要求22所述的方法，其中，所述转导的PBMC培养约1至约35天。


24.如权利要求22所述的方法，其还包括将所述转导的PBMC输注到所述对象中。


25.如权利要求22-24中任一项所述的方法，其中，所述对象是人。


26.如权利要求22所述的方法，其中，所述刺激剂包括肽。


27.如权利要求26所述的方法，其中，所述刺激剂包括gag肽。


28.如权利要求22所述的方法，其中，所述刺激剂包括疫苗。。


29.如权利要求28所述的方法，其中，所述疫苗包括HIV疫苗。


30.如权利要求29所述的方法，其中，所述HIV疫苗包括MVA/HIV62B疫苗或其变体。


31.如权利要求22所述的方法，其中，所述病毒递送系统包括慢病毒颗粒。


32.如权利要求22所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括能够抑制趋化因子受体CCR5产生的小RNA或能够靶向HIVRNA序列的至少一种小RNA。


33.如权利要求22所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括能够抑制趋化因子受体CCR5产生的小RNA和能够靶向HIVRNA序列的至少一种小RNA。


34.如权利要求32或33所述的方法，其中，所述HIVRNA序列包括HIVVif序列、HIVTat序列或其变体。


35.如权利要求32或33所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括微小RNA或shRNA。


36.如权利要求35所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括微小RNA簇。


37.如权利要求35所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括微小RNA，所述微小RNA：
a.与AGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGACTGTAAACTGAGCTTGCTCTACTGTGAAGCCACAGATGGGTAGAGCAAGCACAGTTTACCGCTGCCTACTGCCTCGGACTTCAAGGGGCTT(SEQIDNO:1)具有至少80％、或至少85％、或至少90％或至少95％百分比相同性。


38.如权利要求35所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括AGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGACTGTAAACTGAGCTTGCTCTACTGTGAAGCCACAGATGGGTAGAGCAAGCACAGTTTACCGCTGCCTACTGCCTCGGACTTCAAGGGGCTT(SEQIDNO:1)。


39.如权利要求35所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括微小RNA，所述微小RNA：
a.与CATCTCCATGGCTGTACCACCTTGTCGGGGGATGTGTACTTCTGAACTTGTGTTGAATCTCATGGAGTTCAGAAGAACACATCCGCACTGACATTTTGGTATCTTTCATCTGACCA(SEQIDNO:2)具有至少80％、或至少85％、或至少90％或至少95％百分比相同性；或
b.与GGGCCTGGCTCGAGCAGGGGGCGAGGGATTCCGCTTCTTCCTGCCATAGCGTGGTCCCCTCCCCTATGGCAGGCAGAAGCGGCACCTTCCCTCCCAATGACCGCGTCTTCGTCG(SEQIDNO:3)具有至少80％、或至少85％、或至少90％或至少95％百分比相同性。


40.如权利要求35所述的方法，其中，所述至少一种遗传元件包括：
a.CATCTCCATGGCTGTACCACCTTGTCGGGGGATGTGTACTTCTGAACTTGTGTTGAATCTCATGGAGTTCAGAAGAACACATCCGCACTGACATTTTGGTATCTTTCATCTGACCA(SEQIDNO:2)；或
b.GGGCCTGGCTCGAGCAGGGGGCGAGGGATTCCGCTTCTTCCTGCCATAGCGTGGTCCCCTCCCCTATGGCAGGCAGAAGCGGCACCTTCCCTCCCAATGACCGCGTCTTCGTCG(SEQIDNO:3)。


41.如权利要求36所述的方法，其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海山，T·拉胡森，肖玲芝，C·D·保扎，
申请(专利权)人：美国基因技术国际有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US