改进的血清白蛋白结合物制造技术

本发明专利技术涉及可与血清白蛋白结合的氨基酸序列。特别地，本发明专利技术涉及可与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域，且特别是重链免疫球蛋白单可变结构域。本发明专利技术还涉及包含至少一种本文所述的与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域的蛋白质、多肽和其他构建体、化合物、分子或化学实体。

Improved serum albumin conjugates

The invention relates to an amino acid sequence which can be combined with a serum albumin. In particular, the invention relates to a single variable domain of immunoglobulin which can be combined with serum albumin, and in particular to a single variable domain of heavy chain immunoglobulin. The invention also relates to proteins, polypeptides and other constructs, compounds, molecules or chemical entities comprising at least one single variable domain of immunoglobulins that bind to serum albumin as described herein.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改进的血清白蛋白结合物本专利技术涉及可与血清白蛋白结合的氨基酸序列。特别地，本专利技术涉及可与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域，特别是重链免疫球蛋白单可变结构域。如本文所述，本专利技术提供的免疫球蛋白单可变结构域优选使得它们(至少)可以与人血清白蛋白结合(且特别是特异性结合)。更优选地，如本文进一步所述，这些免疫球蛋白单可变结构域进一步优选使得它们在人血清白蛋白和来自至少一种其他哺乳动物物种的血清白蛋白之间交叉反应(如本文所述)。本专利技术还涉及包含至少一种本文所述的与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域的蛋白质、多肽和其他构建体、化合物、分子或化学实体。免疫球蛋白单可变结构域通常也通过缩写“ISV”或“ISVD”(本文中可互换使用)在本文中提及。本文所述的与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域在本文中也称为“本专利技术的氨基酸序列”或“本专利技术的血清白蛋白结合物”。如本文进一步所述，本专利技术的白蛋白结合物特别地可以是纳米抗体(如本文进一步所述)。包含至少一种本专利技术的血清白蛋白结合物的蛋白质、多肽和其他构建体、化合物、分子或化学实体在本文中也称为“本专利技术的化合物”或“本专利技术的多肽”。优选地，本专利技术的化合物是蛋白质或多肽，并且特别地可以是融合蛋白。基于本文的公开内容，本领域技术人员将清楚本专利技术的其他方面、实施方案、特征、用途和优点。在本申请中，免疫球蛋白重链可变结构域中的氨基酸残基/位置将以根据Kabat的编号表示。为方便起见，附图1给出了表格，其列出了本文将具体提及的一些氨基酸位置和根据一些备选编号系统(例如Aho和IMGT。注意：对于本说明书和权利要求，Kabat编号是决定性的，除非另有明确说明；其他编号系统仅供参考)的它们的编号。关于CDR，如本领域众所周知的，存在多种规则以定义和描述VH或VHH片段的CDR，例如Kabat定义(其基于序列可变性并且是最常用的)和Chothia定义(其基于结构环区域的位置)。例如，参考网站http://www.bioinf.org.uk/abs/。为了本说明书和权利要求的目的，即便根据Kabat也可提及CDR，但是CDR最优选基于Abm定义(其基于OxfordMolecular的AbM抗体建模软件)而被定义，因为这被认为是Kabat和Chothia定义之间的最优折衷。再次参考网站http://www.bioinf.org.uk/abs/。因此，在本说明书和权利要求中，所有CDR均根据Abm规则来定义，除非本文另有明确说明。可以与血清白蛋白结合的ISVD(特别是纳米抗体)及其用途是本领域公知的，例如来自WO2004/041865、WO2006/122787、WO2012/175400、WO2015/173325和PCT/EP2016/077973，其描述了血清白蛋白结合ISVD及其用于延长治疗化合物、结构部分和实体的血清半衰期(如这些申请中所定义)的用途。例如，WO2006/122787公开了被称为Alb-8的人源化血清白蛋白结合纳米抗体作为SEQIDNO:62(参见本文SEQIDNO:1)。WO2012/175400公开了被称为Alb-23D的人源化血清白蛋白结合纳米抗体作为SEQIDNO:6(参见本文SEQIDNO:2)。Alb-8和Alb-23D的氨基酸序列及其CDR(其对于Alb-8和Alb-23D是相同的)在下表A中分别以SEQIDNO:1、2和3至8示出。公开针对血清白蛋白的ISVD的一些其他参考文献包括WO2003/035694、WO2004/003019、EP2139918、WO2011/006915和WO2014/111550。附图3A和3B显示了Alb-8(参考文献)、Alb-23D(参考文献)、SEQIDNO：18(本专利技术)和SEQIDNO：19(本专利技术)的比对。本专利技术旨在提供改进的血清白蛋白结合物，特别是与本领域已知的血清白蛋白结合物相比具有改进的性能的血清白蛋白结合物。特别地，本专利技术旨在提供血清白蛋白结合物，其可以与犬血清白蛋白结合和/或具有改善的人血清白蛋白和犬血清白蛋白之间的交叉反应性(即与现有技术的血清白蛋白结合物如Alb-8和/或Alb-23D相比)。表A：Alb-8、Alb-23D及其CDR表B:SEQIDNO:18和19及其CDR通常，本专利技术提供的血清白蛋白结合ISVD是SEQIDNO:18和19的序列的变体，因为：-它们具有与SEQIDNO:18的序列或SEQIDNO:19的序列相同的CDR(或基本上相同的CDR)；和-它们与SEQIDNO:18和/或19的序列具有一定程度的序列同一性(序列同一性程度如本文进一步描述)。特别地，与SEQIDNO:18和/或19的序列相比，本专利技术提供的血清白蛋白结合ISVD通常具有(有限的)数量的“氨基酸差异”(如本文所述)。这些氨基酸差异可存在于CDR中(只要所得的氨基酸序列使它们保留本文所列的本专利技术氨基酸序列的其他的性质即可)和/或存在于构架区中，且可特别地存在于构架区中(根据Kabat和/或根据Abm定义)。例如但不限于，这些氨基酸差异可以是例如人源化取代，改善在所需宿主细胞或宿主生物体中表达的取代，改善稳定性和/或对降解和/或蛋白酶抗性的取代，减少预先存在的抗体的结合的突变，和/或旨在优化本专利技术氨基酸序列的序列的其他突变；或这些氨基酸差异的任何适当组合。参考本文的进一步公开内容。在第一方面，本专利技术涉及可以与人血清白蛋白结合(且特别是特异性结合)的ISVD，其具有：-CDR1(根据Kabat)，其是氨基酸序列SYVMG(SEQIDNO:9)或与SEQIDNO:9的氨基酸序列具有2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和-CDR2(根据Kabat)，其是氨基酸序列AISRSGGYTYYADSVKG(SEQIDNO:10)或与SEQIDNO:10的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和-CDR3(根据Kabat)，其是氨基酸序列GRYSAWYSQSYEYDY(SEQIDNO:14)或与SEQIDNO:14的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列。特别地，根据本专利技术该方面的血清白蛋白结合物可以是(和优选是)如本文进一步描述的。在更具体的方面，本专利技术涉及可以与人血清白蛋白结合(且特别是特异性结合)的ISVD，其具有：-CDR1(根据Kabat)，其是氨基酸序列SYVMG(SEQIDNO:9)；和-CDR2(根据Kabat)，其是氨基酸序列AISRSGGYTYYADSVKG(SEQIDNO:10)；和-CDR3(根据Kabat)，其是氨基酸序列GRYSAWYSQSYEYDY(SEQIDNO:14)。此外，根据本专利技术该方面的血清白蛋白结合物可以是(和优选是)如本文进一步描述的。另一方面，本专利技术涉及可以与人血清白蛋白结合(且特别是特异性结合)的ISVD，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.氨基酸序列，其是能够结合(人)血清白蛋白的免疫球蛋白单可变结构域，其具有：/n-CDR1(根据Abm)，其是氨基酸序列GSNISSYVMG(SEQ ID NO:11)或GSTISSYVMG(SEQ IDNO:12)或与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和/n-CDR2(根据Abm)，其是氨基酸序列AISRSGGYTY(SEQ ID NO:13)或与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和/n-CDR3(根据Abm)，其是氨基酸序列GRYSAWYSQSYEYDY(SEQ ID NO:14)或与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170117 US 62/446,9921.氨基酸序列，其是能够结合(人)血清白蛋白的免疫球蛋白单可变结构域，其具有：
-CDR1(根据Abm)，其是氨基酸序列GSNISSYVMG(SEQIDNO:11)或GSTISSYVMG(SEQIDNO:12)或与SEQIDNO:11或SEQIDNO:12的氨基酸序列具有2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和
-CDR2(根据Abm)，其是氨基酸序列AISRSGGYTY(SEQIDNO:13)或与SEQIDNO:13的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和
-CDR3(根据Abm)，其是氨基酸序列GRYSAWYSQSYEYDY(SEQIDNO:14)或与SEQIDNO:14的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的氨基酸序列，其具有：
-CDR1(根据Abm)，其是氨基酸序列GSNISSYVMG(SEQIDNO:11)或GSTISSYVMG(SEQIDNO:12)；和
-CDR2(根据Abm)，其是氨基酸序列AISRSGGYTY(SEQIDNO:13)；和
-CDR3(根据Abm)，其是氨基酸序列GRYSAWYSQSYEYDY(SEQIDNO:14)。


3.根据权利要求1所述的氨基酸序列，其可以以优于100nM，优选优于50nM的亲和力与人血清白蛋白结合，如使用ProteOn所测定。


4.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其为重链免疫球蛋白单可变结构域。


5.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其为VHH、人源化的VHH或骆驼源化的VH(并且特别是骆驼源化的人VH)。


6.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其使得：
-其具有超过6小时，优选超过12小时，更优选超过24小时，甚至更优选超过72小时的人血清半衰期(表示为t1/2β)；
和/或使得：
-当其与治疗结构部分或实体连接时，其赋予本发明所得多肽超过6小时，优选超过12小时，更优选超过24小时，甚至更优选超过72小时的人血清半衰期(表示为t1/2β)。


7.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其具有：
-至少85％，优选至少90％，更优选至少95％的与SEQIDNO:18和/或19的序列的序列同一性程度(其中CDR和可能存在的任何C-端延伸不被考虑用于确定序列同一性程度)；
和/或：
-与SEQIDNO:18和/或19的序列具有不超过7个，优选不超过5个，例如仅3个、2个或1个“氨基酸差异”(如本文所定义，且未考虑CDR和可能存在的任何C-端延伸)。


8.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其具有：
-至少85％，优选至少90％，更优选至少95％的与SEQIDNO:18的序列的序列同一性程度(其中CDR和可能存在的任何C-端...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯特凡妮·斯塔埃朗，索伦·斯特芬森，埃丽卡·莫里齐奥，安·瑟达贝尔，
申请(专利权)人：埃博灵克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE