蛋白质缀合物制造技术

提供了精氨酸脱亚胺酶(ADI)和肿瘤坏死因子(TNF)超家族配体的缀合物，以及相关的组合物和其使用方法。还提供了六聚体多肽和三聚体多肽的缀合物、第一和第二三聚体多肽的缀合物以及相关的组合物和其使用方法。

Protein conjugate

Conjugates of arginine deiminase (ADI) and tumor necrosis factor (TNF) superfamily ligands, related compositions and use methods thereof are provided. A conjugate of a hexamer polypeptide and a trimer polypeptide, a conjugate of a first and a second trimer polypeptide, a related composition and a method of use thereof are also provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白质缀合物相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2017年3月29日提交的美国临时申请第62/478,398号的优先权，所述申请通过引用以其全文并入。关于序列表的声明与本申请相关的序列表以文本格式提供以代替纸质副本，并且在此通过引用并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称为TDWG_007_01WO_ST25.txt。所述文本文件为约251KB，于2018年3月28日创建，并通过EFS-Web以电子方式提交。
本公开部分涉及精氨酸脱亚胺酶(ADI)和肿瘤坏死因子(TNF)超家族配体的缀合物，以及相关的组合物和其使用方法。本公开还涉及六聚体多肽和三聚体多肽的缀合物、第一和第二三聚体多肽的缀合物以及相关的组合物和其使用方法。
技术介绍
精氨酸耗竭疗法可以有效治疗某些形式的癌症和其它疾病。例如，精氨酸脱亚胺酶可以用于通过将精氨酸转化为瓜氨酸和氨来耗尽精氨酸的血流供应。ADI-PEG20是示例性ADI-PEG，目前临床上正在研究所述ADI-PEG以用于缺乏在将瓜氨酸转化为精氨酸中所涉及的关键酶精氨基琥珀酸合成酶-1(ASS1)的肿瘤。ADI-PEG20具有良好的耐受性并且在临床研究中显示出前景(参见例如，Qiu等人，《癌症快报(CancerLett.)》，2015年8月1日；364(1):1-7；Phillips等人，《癌症研究和治疗(CancerResTreat.)》，2013年12月；45(4):251-62；Feun等人，《当前药物设计(CurrPharmDes.)》，2008；14(11):1049-57；Feun和Savaraj，《调研药物专家评论(ExpertOpinInvestigDrugs.)》，2006年7月；15(7):815-22；Feun等人，《临床营养和代谢护理的最新观点(CurrOpinClinNutrMetabCare.)》，2015年1月；18(1):78-82)。通过合适的配体激活肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的细胞表面死亡受体代表一种有吸引力的通过癌细胞中的细胞凋亡诱导细胞死亡的治疗策略(参见例如，Palacios等人，《当前药物设计》，2014；20(17):2819-33)。作为一个实例，TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL，也称为Apo2L)具有在癌细胞中选择性诱导凋亡的能力，并且已在许多临床前研究中证明了强大的抗癌活性。然而，仍然需要优化这些药剂和其它药剂的药代动力学和/或生物活性。本公开提供了这些益处和其它益处。
技术实现思路
本公开的实施例包含缀合物，其包括共价连接到肿瘤坏死因子(TNF)超家族配体的精氨酸脱亚胺酶(ADI)。在一些实施例中，所述ADI包括与选自表A1的序列至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，由所述氨基酸序列组成或基本上由所述氨基酸序列组成。在一些实施例中，所述ADI是六聚体ADI多肽，例如，同源六聚体多肽。一些实施例中，所述六聚体或同源六聚体ADI包括与SEQIDNO:9、37、38、50或57-68至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，由所述氨基酸序列组成或基本上由所述氨基酸序列组成。在一些实施例中，所述TNF超家族配体选自表T1。在一些实施例中，所述超家族配体选自TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、TNF-α和FasL。在一些实施例中，所述TNF超家族配体包括与选自表T2的序列至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，由所述氨基酸序列组成或基本上由所述氨基酸序列组成。在一些实施例中，所述TNF超家族配体是三聚体或同源三聚体多肽。在一些实施例中，所述ADI和所述TNF超家族配体通过连接子，任选地生理稳定的连接子分开。在一些实施例中，所述连接子为肽连接子，任选地为柔性肽连接子或刚性肽连接子。在一些实施例中，所述肽连接子的长度为约1-100个氨基酸、约1-90个氨基酸、约1-80个氨基酸、约1-70个氨基酸、约1-80个氨基酸、约1-50个氨基酸、约1-40个氨基酸、约1-30个氨基酸、约1-20个氨基酸、约1-10个氨基酸或约1-5个氨基酸，或长度为约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、60、70、80、90或100个氨基酸。在一些实施例中，所述肽连接子选自表L1。在一些实施例中，所述缀合物是融合多肽。在一些实施例中，所述ADI融合到TNF超家族配体的N端，任选地通过连接子分开。在一些实施例中，所述ADI融合到TNF超家族配体的C端，并任选地通过连接子分开。在一些实施例中，所述连接子是非肽连接子。在一些实施例中，所述缀合物相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体具有改善的药代动力学、物理和/或生物学性质，任选地选自增加的稳定性、增加的血清半衰期、提高的生物利用度、增加的生物活性、增加的暴露度和降低的清除率中的一种或多种。在一些实施例中，述缀合物相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体具有增加的稳定性和/或血清半衰期，任选地其中与所述缀合物相关的所述稳定性和/或血清半衰期相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体增加了约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％或更多。在一些实施例中，所述缀合物相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体具有增加的生物活性，任选地其中所述缀合物的生物活性相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体增加了约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％或更多，或任选地其中所述生物活性相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体协同增加。在一些实施例中，所述生物活性是在癌细胞中诱导细胞死亡或凋亡，所述诱导相对于单独的ADI和/或单独的TNF超家族配体任选地协同增加。在一些实施例中，所述癌细胞是ADI敏感的细胞，其任选地选自乳腺癌细胞、肝细胞癌细胞、伯基特淋巴瘤细胞、结肠癌细胞、胶质母细胞瘤癌细胞、白血病细胞、黑色素瘤癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、卵巢癌细胞、胰腺癌细胞、前列腺癌细胞和肾癌细胞中的一种或多种。在一些实施例中，所述癌细胞是ADI不敏感的细胞，其任选地选自乳腺癌细胞、结肠癌细胞和NSCLC细胞中的一种或多种。在一些实施例中，相对于单独的所述TNF超家族配体，所述ADI任选地使所述TNF超家族配本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种缀合物，其包括共价连接到肿瘤坏死因子(TNF)超家族配体的精氨酸脱亚胺酶(ADI)。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170329 US 62/478,3981.一种缀合物，其包括共价连接到肿瘤坏死因子(TNF)超家族配体的精氨酸脱亚胺酶(ADI)。


2.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述ADI包括与选自表A1的序列至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，由所述氨基酸序列组成或基本上由所述氨基酸序列组成。


3.根据权利要求1或2所述的缀合物，其中所述ADI是六聚体ADI多肽。


4.根据权利要求3所述的缀合物，其中所述六聚体ADI包括与SEQIDNO:9、37、38、50或57-68至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，由所述氨基酸序列组成或基本上由所述氨基酸序列组成。


5.根据前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述TNF超家族配体选自表T1。


6.根据权利要求5所述的缀合物，其中所述超家族配体选自TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、TNF-α和FasL。


7.根据权利要求6所述的缀合物，其中所述TNF超家族配体包括与选自表T2的序列至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，由所述氨基酸序列组成或基本上由所述氨基酸序列组成。


8.根据前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述TNF超家族配体是三聚体或同源三聚体多肽。


9.根据前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述ADI和所述TNF超家族配体通过连接子，任选地生理稳定的连接子分开。


10.根据权利要求9所述的缀合物，其中所述连接子为肽连接子，任选地为柔性肽连接子或刚性肽连接子。


11.根据权利要求10所述的缀合物，其中所述肽连接子的长度为约1-100个氨基酸、约1-90个氨基酸、约1-80个氨基酸、约1-70个氨基酸、约1-80个氨基酸、约1-50个氨基酸、约1-40个氨基酸、约1-30个氨基酸、约1-20个氨基酸、约1-10个氨基酸或约1-5个氨基酸，或长度为约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、60、70、80、90或100个氨基酸。


12.根据权利要求9或10所述的缀合物，其中所述肽连接子选自表L1。


13.根据前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物是融合多肽。


14.根据权利要求13所述的缀合物，其中所述ADI融合到所述TNF超家族配体的N端，任选地通过连接子分开。


15.根据权利要求13所述的缀合物，其中所述ADI融合到所述TNF超家族配体的C端，任选地通过连接子分开。


16.根据权利要求9所述的缀合物，其中所述连接子为非肽连接子。


17.根据前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体具有改善的药代动力学、物理和/或生物学性质，任选地选自增加的稳定性、增加的血清半衰期、提高的生物利用度、增加的生物活性、增加的暴露度和降低的清除率中的一种或多种。


18.根据权利要求17所述的缀合物，其中所述缀合物相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体具有增加的稳定性和/或血清半衰期，任选地其中与所述缀合物相关的所述稳定性和/或血清半衰期相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体增加了约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％或更多。


19.根据权利要求17所述的缀合物，其中所述缀合物相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体具有增加的生物活性，任选地其中所述缀合物的生物活性相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体增加了约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％或更多，或任选地其中所述生物活性相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体协同增加。


20.根据权利要求19所述的缀合物，其中所述生物活性是在癌细胞中诱导细胞死亡或凋亡，所述诱导相对于单独的所述ADI和/或单独的所述TNF超家族配体任选地协同增加。


21.根据权利要求20所述的缀合物，其中所述癌细胞是ADI敏感的细胞，其任选地选自乳腺癌细胞、肝细胞癌细胞、伯基特淋巴瘤细胞、结肠癌细胞、胶质母细胞瘤癌细胞、白血病细胞、黑色素瘤癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、卵巢癌细胞、胰腺癌细胞、前列腺癌细胞和肾癌细胞中的一种或多种。


22.根据权利要求20所述的缀合物，其中所述癌细胞是ADI不敏感的细胞，其任选地选自乳腺癌细胞、结肠癌细胞和NSCLC细胞中的一种或多种。


23.根据权利要求19-22中任一项所述的缀合物，其中相对于单独的所述TNF超家族...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·阿尔马西，E·布林，R·肖沃尔特，J·A·汤姆森，
申请(专利权)人：瑞华药业集团，
类型：发明
国别省市：中国台湾;TW