用于调控免疫应答的包含乳酸细菌的口服组合物和与其相关的方法技术

技术编号:22568838 阅读:19 留言:0更新日期:2019-11-16 13:42
本申请涉及例如包含至少一种选自以下的细菌菌株的益生菌组合物:嗜热链球菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳酸杆菌、植物乳酸杆菌、副干酪乳酸杆菌KE99和保加利亚乳酸杆菌,任选地其中所述至少一种细菌菌株是活的或经声波处理的。

Oral composition containing lactic acid bacteria and related methods for regulating immune response

The present application relates to a probiotic composition comprising, for example, at least one bacterial strain selected from: Streptococcus thermophilus, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium brevis, Bifidobacterium infantis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus paracasei ke99 and Lactobacillus bulgaricus, where at least one bacterial strain is either alive or sonic treated.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调控免疫应答的包含乳酸细菌的口服组合物和与其相关的方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年12月15日提交的美国临时申请号62/434,837的权益,所述美国临时申请的整个内容通过这个引用整体并入本文。专利技术背景自然杀伤(NK)细胞是在骨髓中产生,并且占外周血液和次级淋巴器官中的淋巴细胞的约5-10%的免疫细胞。NK细胞效应功能包括直接细胞毒性、抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)和炎症性细胞因子和趋化因子分泌。这些分泌因子间接调控其他免疫细胞的功能。NK细胞通过释放预先形成的蛋白质颗粒穿孔素和粒酶B来介导针对经转化细胞与健康细胞两者的细胞毒性。这些蛋白质可诱导靶细胞的凋亡。NK细胞靶向和杀灭癌症干细胞(CSC)/未分化肿瘤以及健康非转化干细胞,这些细胞表达低水平的I类主要组织相容性复合物(MHC-I)、CD54和B7H1以及高水平的CD44。在对干细胞样肿瘤进行选择(NK细胞介导的裂解)之后,NK细胞通过分泌型和膜结合型IFN-γ和TNF-α来使另外称为未分化或不良分化肿瘤的CSC分化。这导致肿瘤生长阻止和肿瘤微环境重塑。识别在肿瘤或受病毒感染细胞上表达的配体的活化性受体和共受体负责介导NK细胞活化。外周血液中淋巴细胞的中等/高度细胞毒性活性与癌症风险降低相关联,并且肿瘤内高水平的NK细胞浸润与较好预后相关联。在另一方面,低细胞毒性活性与癌症风险增加相关联。在癌症患者中,NK细胞的数目以及它们的细胞毒性和细胞因子分泌功能显著减弱。NK细胞中的分割无反应性(splitanergy)指示在存在大量分泌细胞因子的情况下NK细胞细胞毒性降低(Tseng等(2014)FrontImmunol,5:269;Magister等(2012)EurJCellBiol,91(5):391-401;Tseng等(2015)Oncotarget6(11):8947-59)。诱导NK细胞中的分割无反应性会通过分泌型和膜结合型因子来促进靶细胞的分化,使肿瘤细胞上的关键分化受体增加,诱导肿瘤细胞对NK细胞介导的细胞毒性的抗性,并且由于在肿瘤分化之后细胞因子和趋化因子产生降低或停止而抑制炎症。对NK细胞免疫调节的潜在机理尚不了解。存在极大需要来鉴定用于达成改进NK免疫疗法的治疗性组合物和方法。
技术实现思路
本专利技术至少部分地基于发现益生细菌的特定组合诱导活化NK细胞中的显著分割无反应性,从而导致显著诱导IFN-γ和TNF-α。此外,益生细菌的所述组合物诱导NK细胞的显著扩增。本文所述的益生细菌的组合物可用于抑制或预防炎症,和/或在需要NK细胞时(例如在炎症、感染或恶性肿瘤情况下)使它们高度活化。为比较不同的组合,使用NK细胞的一种新型活化指数,该指数评估可在病理性状况下减弱自体免疫性同时使NK细胞的显著活化增强的若干重要细胞因子和趋化因子的比率。以这个方式,菌株被选择来:1)在不需要NK细胞的活化时提供调控的NK细胞活化;2)在由细胞因子和/或如在癌症的情况下在NK细胞的功能性活化期间所发生的受体交联活化时促进NK细胞活化加强;和/或3)促进肠道微生物区系的多样性。在这些各种组合物和方法中,细菌以仅在感染或恶性肿瘤期间需要时使NK活化增加的方式调控肠道粘膜免疫性。当不需要活化NK细胞时,细菌可调控NK功能以抑制炎症。对NK细胞功能的这种协调调控可介导NK活性以减轻非所要的炎症,同时在疾病期间促进免疫性。附图说明图1包括标识为图A和图B的2个图,其显示用益生细菌处理NK细胞诱导IFN-γ和抗炎性细胞因子IL-10的较高分泌。在有或无1:5(NK细胞:细菌)比率下的益生细菌sAJ2下,使纯化NK细胞(1x106/mL)不经处理,用IL-2(1000单位/mL)或抗CD16mAb(3μg/mL)和IL-2(1000单位/mL)处理18小时。收集培养物的上清液,并且用于多路阵列分析。以上是IFN-γ(图1A)和IL-10(图1B)的分泌水平。图2显示益生细菌不影响NK细胞介导的针对人口腔鳞状癌干细胞(OSCSC)的细胞毒性。使纯化NK细胞(1x106/mL)不经处理,用IL-2(1000单位/mL)处理,或用抗CD16mAb(3μg/mL)和IL-2(1000单位/mL)处理,并且在存在或不存在1:3(NK细胞:细菌)比率下的活体AJ2或经声波处理AJ2下培养12-18小时。在过夜孵育之后,将它们添加至经51Cr标记的OSCSC细胞(靶细胞)中。通过进行标准4小时51Cr释放测定来测定NK细胞细胞毒性。γ计数器用于测量释放至上清液中的放射性。使用裂解单位(LU30/106)来确定NK细胞介导的针对经放射性标记的OSCSC的细胞毒性的水平。图3显示表面表达趋势证明在用经IL-2+抗CD16mAb+sAJ2活化NK细胞分化的OSCSC中,分化标志物上调。在有或无1:3(NK细胞:细菌)比率下的经声波处理AJ2(sAJ2)下,使纯化NK细胞不经处理,或用抗CD16mAb(3μg/mL)和IL-2(1000单位/mL)处理18小时。之后,收集来自各NK样品的上清液,并且用于处理/分化OSCSC4天。使OSCSC从组织培养板脱离,并且来自各处理的5x104个细胞用于通过流式细胞术来测量表面标志物的表面表达。针对同种型对照、CD54、MHC-I、B7H1和CD44的PE缀合抗体用于对未处理OSCSC或用NK细胞上清液处理的那些OSCSC进行染色,如图中所详述。同种型对照抗体用作对照。对于各直方图,在右手角的数字是百分比和平均通道荧光强度。图4显示用分割无反应的NK细胞的上清液处理的OSCSC对NK细胞介导的细胞毒性具有显著更大抗性—最高抗性水平在用分割无反应的NK细胞的上清液与sAJ2组合处理的那些OSCSC中。如图3中所述处理纯化NK细胞。之后,收集来自各NK样品的上清液,并且用于处理/分化OSCSC4天。使OSCSC从组织培养板脱离,并且使用标准4小时51Cr释放测定来评估它们对NK细胞介导的裂解的敏感性。使用裂解单位(LU30/106)来确定NK细胞介导的针对经放射性标记OSCSC情况的细胞毒性的水平。图5显示对用IL-2+抗CD16mAb+sAJ2NK细胞上清液处理的OSCSC的分化的诱导由NK细胞分泌的IFN-γ和TNF-α的组合介导。纯化NK细胞(1x106/mL)用在1:3(NK细胞:细菌)比率下的单独sAJ2,或与IL-2(1000单位/mL)和抗CD16mAb(3μg/mL)组合处理18小时。之后,收集来自各NK样品的上清液,并且用于处理/分化OSCSC4天。将抗IFN-γ抗体(1:100)和抗TNF-α抗体(1:100)添加至OSCSC中,随后开始NK上清液处理。使OSCSC从组织培养板脱离,并且来自各处理的5x104个细胞用于通过流式细胞术来测量表面标志物的表面表达。针对同种型对照、CD54、MHC-I和B7H1的PE缀合抗体用于对未处理OSCSC或用NK细胞上清液处理的那些OSCSC(有或没有针对IFN-γ的抗体和/或TNF-α抗体)染色,如图中所详述。同种型对照抗体用作对本文档来自技高网
...

【技术保护点】
1.一种组合物,其包含至少一种选自以下的细菌菌株:嗜热链球菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳酸杆菌、植物乳酸杆菌、副干酪乳酸杆菌KE99和保加利亚乳酸杆菌,任选地其中所述至少一种细菌菌株是活的或经声波处理的。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161215 US 62/434,8371.一种组合物,其包含至少一种选自以下的细菌菌株:嗜热链球菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳酸杆菌、植物乳酸杆菌、副干酪乳酸杆菌KE99和保加利亚乳酸杆菌,任选地其中所述至少一种细菌菌株是活的或经声波处理的。


2.如权利要求1所述的组合物,其中所述组合物包含嗜热链球菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳酸杆菌、植物乳酸杆菌、副干酪乳酸杆菌KE99和保加利亚乳酸杆菌。


3.如任何前述权利要求所述的组合物,其进一步包含破骨细胞。


4.如任何前述权利要求所述的组合物,其进一步包含能够使NK细胞活化和/或扩增的另一剂。


5.如任何前述权利要求所述的组合物,其进一步包含NK细胞。


6.如任何前述权利要求所述的组合物,其用于使NK细胞活化和/或扩增。


7.如任何前述权利要求所述的组合物,其用于增加或促进由NK细胞产生和/或分泌至少一种细胞因子、和/或由NK细胞产生的所述至少一种细胞因子的功能。


8.如任何前述权利要求所述的组合物,其用于增加或促进受试者中至少一种细胞因子或趋化因子的产生、分泌和/或功能,任选地其中至少一种细胞因子或趋化因子的所述功能由可通过基于细胞或非基于细胞的体外测定进行测试的细胞毒性功能来度量。


9.如任何前述权利要求所述的组合物,其用于增加或促进受试者中至少一种细胞因子或趋化因子的产生和/或分泌,任选地其中
i)所述至少一种细胞因子或趋化因子的所述细胞毒性功能不由所述组合物增加;或
ii)所述至少一种细胞因子或趋化因子的所述细胞毒性功能可通过基于细胞或非基于细胞的体外测定进行测试。


10.如权利要求7-9中任一项所述的组合物,其中所述至少一种细胞因子是表1中所列的细胞因子中的一种,任选地其中所述至少一种细胞因子选自:IL-10、IL-12、IFN-γ、TGF-α、GM-CSF、IL-13、IL-17A、IL-1β、IL-2、IL-21、IL-4、IL-23、IL-5和IL-7。


11.如权利要求10所述的组合物,其中所述至少一种细胞因子包括IL-10、IL-12、IFN-γ或TGF-α。


12.如权利要求7-11中任一项所述的组合物,其中所述至少一种趋化因子包括表1中所列的趋化因子中的一种,任选地其中所述至少一种趋化因子选自:膜结合型趋化因子、MIP-3α、MIP-1α和MIP-1β。


13.如任何前述权利要求所述的组合物,其用于在体外、离体和/或在体内降低或抑制癌生长,和/或增加或促进癌细胞分化。


14.一种试剂盒,其包含如任何前述权利要求所述的组合物。


15.一种在体外、离体和/或在体内使NK细胞活化的方法,其包括在培养基中连同如权利要求1-13中任一项所述的组合物一起培养所述NK细胞。


16.如权利要求15所述的方法,其中所述NK细胞的活化增加至少一种细胞因子和/或趋化因子从所述NK细胞的产生和/或分泌。


17.如权利要求15或16所述的方法,其中所述NK细胞是分割无反应的。


18.如权利要求15-17中任一项所述的方法,其中所述NK细胞的活化不增加所述至少一种细胞因子和/或趋化因子的所述功能,任选地其中所述功能是细胞毒性。


19.如权利要求15-18中任一项所述的方法,其中所述培养基进一步包含至少一种能够使所述NK细胞活化的非NK细胞。


20.如权利要求19所述的方法,其中所述至少一种非NK细胞是破骨细胞。


21.如权利要求19或20所述的方法,其中相对于在不具有所述至少一种非NK细胞的相同条件下培养,与所述至少一种非NK细胞一起培养所述NK细胞促进所述NK细胞的扩增。


22.如权利要求19-21中任一项所述的方法,其中相较于在没有所述至少一种非NK细胞的情况下的培养,与所述至少一种非NK细胞一起培养所述NK细胞会持续更久时间增加所述NK细胞的扩增速率和/或所述细胞毒性功能。


23.如权利要求19-22中任一项所述的方法,借此,相较于在相同条件下但没有所述至少一种非NK细胞培养的NK细胞,所述NK细胞产生至少2、5、10、20、30、40、50、100倍或更多倍的至少一种细胞因子或趋化因子。


24.如权利要求19-...

【专利技术属性】
技术研发人员:A·朱厄特
申请(专利权)人:加利福尼亚大学董事会
类型:发明
国别省市:美国;US

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1
相关领域技术
  • 暂无相关专利