一种大豆基因组DNA提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术提供了一种大豆基因组DNA提取试剂盒，所述试剂盒包括用于裂解细胞的裂解液，所述裂解液包括高盐高PH提取液和2％的β‑巯基乙醇；其中所述高盐高PH提取液包括总溶液以及质量与所述总溶液体积比为10％的十二烷基硫酸钠；所述总溶液包括终浓度为35mM的六水合氯化镁，终浓度为400mM的氯化钾，终浓度为200mM的蔗糖，终浓度为200mM的Tris‑base，终浓度为25mM的EDTA·2Na；本发明专利技术还提供了一种大豆基因组DNA提取方法；本发明专利技术提供的一种大豆基因组DNA提取试剂盒及提取方法，提取的DNA含量高，纯度高，能够满足后续分子生物学研究的需要。

A DNA extraction kit and method for soybean genome

The invention provides a soybean genomic DNA extraction kit, the kit comprises a cracking solution for cracking cells, the cracking solution comprises a high salt and high pH extraction solution and 2% \u03b2 - mercaptoethanol, wherein the high salt and high pH extraction solution comprises a total solution and a sodium dodecyl sulfate with a mass ratio of 10% to the total solution volume, and the total solution comprises six with a final concentration of 35mm Magnesium chloride hydrate, potassium chloride with final concentration of 400mm, sucrose with final concentration of 200mm, tris \u2011 base with final concentration of 200mm, EDTA \u00b7 2Na with final concentration of 25mm; the invention also provides a method for extracting soybean genomic DNA; the invention provides a test kit and extraction method for extracting soybean genomic DNA, with high DNA content and purity, which can meet the requirements of subsequent molecular biology Research needs.

【技术实现步骤摘要】
一种大豆基因组DNA提取试剂盒及提取方法
本专利技术涉及DNA提取
，尤其涉及一种大豆基因组DNA提取试剂盒及提取方法。
技术介绍
DNA在生物学实验中是最普遍利用的生物分子。分子生物学分析中，基因组DNA的提取是其成功的关键。不同植物甚至是同一类植物，其组织材料的的来源、部位、形态等内在的特点的差异，尤其是植物体内中次生代谢产物多酚类化合物可介导DNA降解，多糖能抑制限制酶、连接酶及DNA聚合酶的生物活性，因此在提取基因组DNA时需要选择不同的方法或做一些特殊的处理。本专利技术人在研究中采用CATB法提取大豆基因组DNA，得到的样品中仍含有RNA、以及未被去除的多糖及其他一些次生代谢物质，DNA含量低、纯度低。因此开发一种DNA含量高，纯度高的大豆基因组DNA提取试剂盒及提取方法，成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种大豆基因组DNA提取试剂盒及提取方法，提取的DNA含量高，纯度高，能够满足后续分子生物学研究的需要。本专利技术是这样实现的：本专利技术的目的之一在于提供了一种大豆基因组DNA提取试剂盒，所述试剂盒包括用于裂解细胞的裂解液，所述裂解液包括高盐高PH提取液和2％的β-巯基乙醇；其中所述高盐高PH提取液包括总溶液以及质量与所述总溶液体积比为10％的十二烷基硫酸钠；所述总溶液包括终浓度为35mM的六水合氯化镁，终浓度为400mM的氯化钾，终浓度为200mM的蔗糖，终浓度为200mM的Tris-base，终浓度为25mM的EDTA·2Na。本专利技术的目的之二在于提供一种大豆基因组DNA提取方法，所述方法包括如下步骤：步骤1、原材料的处理：将大豆幼嫩叶片或大豆种子经处理得到大豆粉；步骤2、溶液的配制：分别配制好所述裂解液，清洗液以及洗脱液；所述裂解液包括高盐高PH提取液和2％的β-巯基乙醇；所述高盐高PH提取液包括总溶液以及质量与所述总溶液体积比为10％的十二烷基硫酸钠；所述总溶液包括终浓度为35mM的六水合氯化镁，终浓度为400mM的氯化钾，终浓度为200mM的蔗糖，终浓度为200mM的Tris-base，终浓度为25mM的EDTA·2Na；步骤3、DNA的提取：在大豆粉中加入所述高盐高PH提取液，颠倒混匀后加入所述2％的β-巯基乙醇，液氮冷冻后37℃水浴，待其溶解为冰水混合物后震荡，再反复冻融2～6次；步骤4、杂质的去除：加入清洗液去除杂质；步骤5、大豆基因组DNA的溶解：杂质去除后风干，加入洗脱液溶解即可。本专利技术具有的有益效果是：本专利技术提供的一种大豆基因组DNA提取试剂盒及提取方法，与对比例1的方法(CATB法)提取大豆基因组DNA相比，分别用核酸蛋白检测仪检测法、琼脂糖凝胶电泳法和PCR扩增法对两种方法提取的DNA样品分别进行检测，结果表明本专利技术提供的方法提取的DNA含量高，纯度高，且提取效果稳定，能够满足后续分子生物学研究的需要；具体地：(1)核酸蛋白仪检测表明：本专利技术提供的高盐高PH法得到的DNAOD260/OD280均为1.8～2.0，说明蛋白质、多糖、RNA完全去除；对比例1的方法(CATB法)得到的DNAOD260/OD280均大于2.0，说明蛋白质去除彻底，但RNA未除干净。(2)琼脂糖凝胶电泳表明：本专利技术提供的高盐高PH法得到的DNA只有一条清晰整齐的主带表明有效的去除了大豆嫩叶或者大豆种子中的多糖及其他次生代谢物质，RNA也降解完全；对比例1的方法(CATB法)得到的DNA有两条带，说明样品中仍含有未被去除的多糖及其他一些次生代谢物质。(3)PCR扩增法表明：两种方法提取的DNA样品均可进行PCR扩增，也可用作SRAP研究，本专利技术提供的高盐高PH法提取的样品扩增出的条带比较清晰。附图说明图1为本专利技术实施例1与对比例1两种方法提取大豆基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测结果；其中泳道1-3：对比例1提取中豆41的叶片DNA；泳道4-6：实施例1提取中豆41叶片DNA；泳道7-9：对比例1提取天隆1号大豆叶片DNA；泳道10-12：实施例1提取天隆1号叶片DNA；泳道13-15：对比例1提取中豆41的种子DNA；泳道16-18：实施例1提取中豆41种子DNA；泳道19-21：对比例1提取天隆1号大豆种子DNA；泳道22-24：实施例1提取天隆1号种子DNA；图2为SSR引物对本专利技术实施例1与对比例1两种方法提取的大豆叶片和种子DNA的扩增情况；泳道1-3：对比例1的CTAB法提取中豆41叶片DNA；泳道4-6：实施例1的高盐高PH法提取中豆41叶片DNA；泳道7-9：对比例1的CTAB法提取天隆1号叶片DNA；泳道10-12：实施例1的高盐高PH法提取天隆1号叶片DNA；泳道13-15：对比例1的CTAB法提取中豆41种子DNA；泳道16-18：实施例1的高盐高PH法提取中豆41种子DNA；泳道19-21：对比例1的CTAB法提取天隆1号种子DNA；泳道22-24：实施例1的高盐高PH法提取天隆1号种子DNA。具体实施方式实施例1一、试剂配制1、母液配制：表1试剂名称分子量(g/mol)称量(g)终体积终浓度六水合氯化镁(MgCl2·6H2O)203.310.1550mL1M氯化钾(KCl)74.5514.9250mL4M无水醋酸钠(NaAc)82.0112.350mL3M(pH5.2)无水醋酸纳(NaAc)82.0112.350mL3M(pH5.6)蔗糖(C12H22O11)82.0117.1250mL1MTris-base(C4H11NO3)121.16.05550mL1MEDTA·2Na(C10H14N2Na2O8·2H2O)372.242.3350mL125mM注：EDTA·2Na只能溶解于碱性环境，可于Tris-base混合配制。2、高盐高pH核酸提取液(ExtractionBuffer，pH9.0，KOH)表2注意：配制时，先加入1-5，用1MKOH和1MHCl调节pH到9.0，然后加入SDS，充分溶解后，定容到100mL。2、2％的β-巯基乙醇；2、PCI：酚：氯仿：异戊醇(25：24：1，v/v/v)；3、CI：氯仿：异戊醇(24：1，v/v)；4、醋酸钠：配制3M，pH5.2的醋酸钠和3M，pH5.6的醋酸钠；5、无水乙醇，预冷乙醇时需将无水乙醇提前放本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大豆基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于裂解细胞的裂解液，所述裂解液包括高盐高PH提取液和2％的β-巯基乙醇；其中所述高盐高PH提取液包括总溶液以及质量与所述总溶液体积比为10％的十二烷基硫酸钠；所述总溶液包括终浓度为35mM的六水合氯化镁，终浓度为400mM的氯化钾，终浓度为200mM的蔗糖，终浓度为200mM的Tris-base，终浓度为25mM的EDTA·2Na。/n

【技术特征摘要】
1.一种大豆基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于裂解细胞的裂解液，所述裂解液包括高盐高PH提取液和2％的β-巯基乙醇；其中所述高盐高PH提取液包括总溶液以及质量与所述总溶液体积比为10％的十二烷基硫酸钠；所述总溶液包括终浓度为35mM的六水合氯化镁，终浓度为400mM的氯化钾，终浓度为200mM的蔗糖，终浓度为200mM的Tris-base，终浓度为25mM的EDTA·2Na。


2.如权利要求1所述的大豆基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于去除杂质的清洗液；以及用于洗脱DNA的洗脱液。


3.如权利要求2所述的大豆基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述清洗液包括酚氯仿异戊醇，氯仿异戊醇，醋酸钠，无水乙醇，75％乙醇；所述酚氯仿异戊醇中苯酚、氯仿、异戊醇的体积比为25：24：1；所述氯仿异戊醇中氯仿、异戊醇的体积比为24：1。


4.如权利要求2所述的大豆基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括10mM，pH＝8.0的Tris或者pH＝8.0的超纯水中的任意一种。


5.一种大豆基因组DNA提取方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤1、溶液的配制：分别配制好所述裂解液，清洗液以及洗脱液；所述裂解液包括高盐高PH提取液和2％的β-巯基乙醇；所述高盐高PH提取液包括总溶液以及质量与所述总溶液体积比为10％的十二烷基硫酸钠；所述总溶液包括终浓度为35mM的六水合氯化镁，终浓度为400mM的氯化钾，终浓度为200mM的蔗糖，终浓度为200mM的Tris-base，终浓度为25mM的EDTA·2Na；
步骤2、原材料的处理：将大豆幼嫩叶片或大豆种子经处理得到大豆粉；
步骤3、DNA的提取：在大豆粉中加入所述高盐高PH提取液，颠倒混匀后加入所述2％的β-巯基乙醇，液氮冷冻后37℃水浴，待其溶解为冰水混合物后震荡，再反复...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊，杨学珍，徐瑞新，周彦辰，陈玲玲，胡伟，祁平，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42