一种抗肿瘤融合蛋白及其编码多核苷酸和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抗肿瘤融合蛋白，该融合蛋白具有结构为D‑A‑B‑C，其中，A为GnRH蛋白元件；B为PEA蛋白的跨膜转运区；C为DNASE蛋白元件；D为任选的信号肽和/或前导肽序列；“‑”表示连接上述各元件的肽键；本发明专利技术提供的融合蛋白特异性好、细胞毒性低，同时提供了编码该融合蛋白的多核苷酸，同时还提供了该融合蛋白的应用领域。

An antineoplastic fusion protein and its coding polynucleotide and Application

The invention relates to an anti-tumor fusion protein, which has a structure of D \u2011 a \u2011 B \u2011 C, wherein, a is a GnRH protein element; B is a transmembrane transport area of pea protein; C is a DNase protein element; D is an optional signal peptide and / or a leading peptide sequence; \\u2011\ represents a peptide bond connecting the above elements; the fusion protein provided by the invention has good specificity, low cytotoxicity and provides The polynucleotide encoding the fusion protein is provided, and the application field of the fusion protein is also provided.

【技术实现步骤摘要】
一种抗肿瘤融合蛋白及其编码多核苷酸和应用
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种抗肿瘤融合蛋白及其编码多核苷酸和应用。
技术介绍
免疫毒素是一组人工构建的具有特异性细胞杀伤能力的杂合分子，由毒性部分、载体部分和靶向部分三部分组成。毒性部分可以是植物、动物、微生物来源的细胞毒素，靶向部分可以是单克隆抗体或细胞因子。免疫毒素与其他抗肿瘤药物相比，具有毒性强和特异性高的优点，在肿瘤治疗中显示出巨大的应用前景。冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(lyophilizedrecombinanthumanluteinizinghormonereleasinghormone-exotoxinofpseudomonasaerμginosafusionprotein,简称LHRH-PE40)是长春基因工程药物研究生产的一种对肿瘤细胞有特异性杀伤作用的重组毒素。其生产方法为首先采用基因工程的方法将编码绿脓杆菌外毒素A基因的受体结合区(I区)切除，置换成LHRH基因，再将LHRH-PE40重组基因克隆于质粒中，通过工程发酵表达出LHRH-PE40融合蛋白。LHRH-PE40中发挥细胞毒作用的是绿脓杆菌外毒素A(exotoxinAofpseudomonasaerμginosa,PEA)。绿脓杆菌外毒素A是绿脓杆菌中毒力最强的一种毒素，能阻断细胞蛋白质的合成并引起细胞的凋亡。LHRH-PE40中的导向物为人促黄体激素释放激素(humanluteinizinghormonereleasinghormone,LHRH)，通过与其在肿瘤细胞表面的I型受体结合而靶向性地把PEA导入到肿瘤细胞中发挥抗肿瘤作用。LHRH的受体有两型，即I型和II型。LHRH与I型受体的亲和力很高。人体正常情况下，I型受体主要存在于垂体前叶，垂体外组织如性腺、胎盘和脑组织也含有一定量的I型受体，其它重要器官均不表达I型LHRH受体。然而某些肿瘤细胞表面由于受体异化则分布着大量的LHRHI型受体，包括生殖系统恶性肿瘤、黑色素瘤、胃癌、肝癌、胰腺癌、肠癌、肺癌等。由于I型LHRH受体在肿瘤细胞中普遍高表达，而在正常组织中只呈局限性分布，因此LHRH是设计重组靶向毒素所需的理想导向物。LHRH的II型受体广泛存在于人体各组织中。LHRH与II型受体的亲和力很低。但在很高剂量的情况下，LHRH可以和II型受体发生低亲和力结合，从而使LHRH-PE40产生广泛的细胞毒作用。这是LHRH-PE40重组毒素对动物产生毒性作用的理论基础。LHRH-PE40不能透过血脑屏障，因此不会对垂体产生毒性作用。尽管以LHRH-PE40为代表的免疫毒素显示出良好的应用前景,但其仍存在免疫原性和非特异的细胞毒性等问题,阻碍了免疫毒素在临床上的应用。因此，本领域迫切需要开发特异性好、细胞毒性低的新的免疫毒素。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供了一种抗肿瘤融合蛋白，该融合蛋白特异性好、细胞毒性低，同时提供了编码该融合蛋白的多核苷酸，同时还提供了该融合蛋白的应用领域。本专利技术是通过以下技术方案实现：一种抗肿瘤融合蛋白，具有结构：D-A-B-C其中，A为GnRH蛋白元件；B为PEA蛋白的跨膜转运区或无；C为DNASE蛋白元件；D为任选的信号肽和/或前导肽序列；“-”表示连接上述各元件的肽键。进一步地，抗肿瘤融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。进一步地，GnRH蛋白的序列如SEQIDNO.:2中第1-10位所示。进一步地，DNASE蛋白的序列如SEQIDNO.:2中第128-520位所示。进一步地，PEA蛋白的跨膜转运区的长度为100-120氨基酸，优选地，PEA蛋白的跨膜转运区的长度为PEA蛋白的跨膜转运区的长度为100-115个氨基酸。进一步地，PEA蛋白的跨膜转运区的序列如SEQIDNO.:2中第13-127位所示。进一步地，抗肿瘤融合蛋白选自下组中的一种或多种：(a)具有SEQIDNO.:2所示氨基酸序列的多肽；(b)具有与SEQIDNO.:2所示氨基酸序列≥80%同源性，且多肽具有抑制肿瘤细胞生长的活性，优选地，≤99%的同源性；(c)将SEQIDNO:2所示氨基酸序列经过1-10个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且保留抑制肿瘤细胞生长活性的衍生多肽。在另一种技术方案中，提供了编码上述融合蛋白的的多核苷酸，其的序列如SEQIDNO.:1所示。在另一种技术方案中，提供了抗肿瘤融合蛋白的用途，其用途为制备用于治疗或预防表达GnRH的肿瘤的药物。与现有的技术相比，本专利技术有以下有益之处：提供的融合蛋白能高效地将DNASE蛋白输送到细胞核并高效引发细胞凋亡，该融合蛋白不仅可以高效地表达，不易降解，而且高效地形成多聚体(尤其是四聚体)；此外，本专利技术的融合蛋白(单体或多聚体)可以极其高效地穿过细胞膜进入到胞内，并高效快速地进入细胞核，从而极其高效地诱导非正常细胞(如肿瘤细胞)的凋亡；所提供的多核苷酸能高效地编码出本专利技术的融合蛋白；还对该融合蛋白的应用进行了探索。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1：一种抗肿瘤融合蛋白，具有结构：D-A-B-C其中，A为GnRH蛋白元件；B为PEA蛋白的跨膜转运区；C为DNASE蛋白元件；D为任选的信号肽和/或前导肽序列；“-”表示连接上述各元件的肽键。优选地，GnRH蛋白的序列如SEQIDNO.:2中第1-10位所示。优选地，DNASE蛋白的序列如SEQIDNO.:2中第128-520位所示。优选地，PEA蛋白的跨膜转运区的长度为100-120氨基酸。优选地，PEA蛋白的跨膜转运区的序列如SEQIDNO.:2中第13-127位所示。优选地，抗肿瘤融合蛋白选自下组中的一种或多种：(a)具有SEQIDNO.:2所示氨基酸序列的多肽；(b)具有与SEQIDNO.:2所示氨基酸序列80%同源性，且多肽具有抑制肿瘤细胞生长的活性；(c)将SEQIDNO:2所示氨基酸序列经过1个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且保留抑制肿瘤细胞生长活性的衍生多肽。实施例2：除以下内容外，其余与实施例1相同，具体不同为：优选地，B为无。优选地，PEA蛋白的跨膜转运区的长度为PEA蛋白的跨膜转运区的长度为100-115个氨基酸。优选地，抗肿瘤融合蛋白选自下组中的一种或多种：(a)具有SEQIDN.:2所示氨基酸序列的多肽；(b)具有与SEQIDNO.:2所示氨基酸序列90%同源本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗肿瘤融合蛋白，其特征在于，具有结构：/nD-A-B-C/n其中，/nA为GnRH蛋白元件；/nB为PEA蛋白的跨膜转运区；/nC为DNASE蛋白元件；/nD为任选的信号肽和/或前导肽序列；/n“-”表示连接上述各元件的肽键。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤融合蛋白，其特征在于，具有结构：
D-A-B-C
其中，
A为GnRH蛋白元件；
B为PEA蛋白的跨膜转运区；
C为DNASE蛋白元件；
D为任选的信号肽和/或前导肽序列；
“-”表示连接上述各元件的肽键。


2.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤融合蛋白，其特征在于，B为无。


3.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤融合蛋白，其特征在于，GnRH蛋白的序列如SEQIDNO.:2中第1-10位所示。


4.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤融合蛋白，其特征在于，DNASE蛋白的序列如SEQIDNO.:2中第128-520位所示。


5.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤融合蛋白，其特征在于，PEA蛋白的跨膜转运区的长度为100-120氨基酸。


6.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤融合蛋白，其特征在于，PEA蛋白的跨膜转运区的序...

【专利技术属性】
技术研发人员：候晓允，潘竹兰，
申请(专利权)人：上海斯霖格生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31