一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽及其制备方法与应用。该方法包括：提取鸢乌贼蛋白，然后对鸢乌贼蛋白预处理及控制酶解，鸢乌贼蛋白肽的分离富集，鸢乌贼蛋白肽的限制性酶法交联，得到所述具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽。本发明专利技术提供的制备方法，采用生物酶法等技术，以鸢乌贼为原料，制备出兼具乳化活性与抗氧化活性的蛋白肽。本发明专利技术提供的具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽的制备方法，具有工艺简便、产品安全及可应用于实际生产等优点。

A protein peptide of iris squid with emulsifying and antioxidant activities and its preparation and Application

The invention discloses a protein peptide of iris squid with emulsifying activity and antioxidant activity, a preparation method and application thereof. The method comprises the following steps: extracting the protein of iris squid, pretreating and controlling the enzymolysis of iris squid protein, separating and enriching the protein peptide of iris squid, and crosslinking the protein peptide of iris squid by restriction enzyme method to obtain the protein peptide of iris squid with emulsifying activity and antioxidant activity. The preparation method of the invention adopts biological enzyme method and other technologies to prepare protein peptide with emulsifying activity and antioxidant activity with iris squid as raw material. The preparation method of iris squid protein peptide with emulsifying activity and antioxidant activity provided by the invention has the advantages of simple process, product safety and practical production.

【技术实现步骤摘要】
一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽及其制备方法与应用
本专利技术属于水产功能性肽
，具体涉及一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽及其制备方法与应用。
技术介绍
随着人们生活水平的提高，对具有维持机体健康，预防疾病发生的抗氧化产品的需求越来越大。以食物蛋白源为原料，采用生物酶解法制备的抗氧化肽由于具有天然、安全、无毒副作用的特点，越来越受到人们的青睐。鸢乌贼是一种高蛋白低脂肪海洋生物，具有较高的营养价值。我国南海鸢乌贼的生物量巨大，年捕捞量可达到两百万吨，资源极为丰富，但由于其肉质较硬，不符合大众消费口味，从而导致该蛋白资源目前未得到充分开发与利用，其精深加工水平与高值化利用程度较低。前期研究发现，鸢乌贼蛋白酶解产物具有较好的抗氧化性，但由于高活性抗氧化肽通常具有分子量小、肽链短、线性结构等特点，难以在油/水界面形成稳定的吸附膜，因此其乳化等功能特性较差，难以应用到乳液、奶油等产品中。因此，采用生物酶法等技术，以海洋中资源极为丰富的鸢乌贼为原料，制备兼具乳化活性与抗氧化活性的蛋白肽将具有广泛的应用前景。
技术实现思路
为了克服现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的是提供一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽及其制备方法与应用。本专利技术的目的至少通过如下技术方案之一实现。本专利技术提供的一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术提供的一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽的编码基因，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术公开了以鸢乌贼为原料，制备一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽的方法，包括以下步骤:(1)鸢乌贼蛋白提取；(2)鸢乌贼蛋白预处理及控制酶解；(3)鸢乌贼蛋白肽的分离富集；(4)鸢乌贼蛋白肽的限制性酶法交联；采用本专利技术方法制备的鸢乌贼蛋白肽兼具较好的乳化活性与抗氧化活性，此外，本专利技术中公开的上述鸢乌贼蛋白肽的制备方法，工艺较为简单，产品安全，可应用于实际生产中。本专利技术提供的一种制备上述的具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽的方法，包括如下步骤：(1)鸢乌贼蛋白提取将鸢乌贼去除头、内脏后洗净、沥干，用绞肉机绞成肉糜，将肉糜加入水中，混合均匀，得到肉糜液，调节肉糜液的pH为碱性(优选用0.1-1mol/LNaOH溶液调节)，搅拌处理(常温)，离心取上清液，将上清液的pH调节为酸性(可以用0.1-1mol/LHCl溶液调节)，离心取沉淀，加水，混合均匀得到混合液，调节混合液的pH值为中性(可以用0.1-1mol/LNaOH溶液调节)，去离子水进行透析至透析液中检测不出盐离子，浓缩，干燥得到鸢乌贼蛋白；(2)鸢乌贼蛋白预处理及控制酶解将步骤(1)所述鸢乌贼蛋白加入水中，高压均质处理，混合均匀得到鸢乌贼蛋白的水溶液，调节鸢乌贼蛋白的水溶液pH值为6.5-8.0，升温，加入蛋白酶进行酶解反应，然后进行灭酶处理，离心取上清液，得到酶解液；(3)鸢乌贼蛋白肽的分离富集将步骤(2)所述酶解液通过超滤膜，取滤过液；将所述滤过液通过葡聚糖凝胶层析柱，用洗脱液洗脱，收集分子量为300Da-900Da的组分，浓缩，干燥，得到纯化后的蛋白肽；(4)鸢乌贼蛋白肽的限制性酶法交联将步骤(3)所述纯化后的蛋白肽加入水中，混合均匀，得到蛋白溶液，调节所述蛋白溶液的pH值为7.0-8.0，然后加入谷氨酰胺转胺酶(TGase)，水浴加热，然后进行灭酶处理，离心取上清液，浓缩，干燥得到所述具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽。进一步地，步骤(1)所述肉糜与水的质量比为1:5-1:20；所述调节肉糜液的pH为碱性，是使调节后的肉糜液pH值为8.0-11.0；所述搅拌处理的搅拌速率为60-1200r/min，搅拌处理的时间为0.5-3h；所述将上清液的pH调节为酸性，使调节后的上清液的pH值为4.0-6.0。进一步地，步骤(1)所述沉淀与水的质量比为1:1-1:5；所述透析处理的时间为24h，所述透析处理的透析膜孔径为200-1000Da。进一步地，步骤(2)所述鸢乌贼蛋白的水溶液的质量百分比浓度为1-10wt％；所述均质处理的压力为20-80MPa；所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、复合蛋白酶及中性蛋白酶中的两种以上，所述蛋白酶的质量为鸢乌贼蛋白质量的0.2wt％-0.5wt％；所述酶解反应的温度为50-65摄氏度，酶解反应的时间为3-8h；所述灭酶处理的温度为90-95摄氏度，灭酶处理的时间为20-40min。优选地，步骤(2)所述均质处理的次数为1-3次。进一步地，步骤(3)所述超滤膜的截留分子量为1-10kDa，所述洗脱液为超纯水。进一步地，步骤(4)所述蛋白溶液的质量百分比浓度为1-5wt％；所述谷氨酰胺转胺酶的添加量为纯化后的蛋白肽质量的0.1-1.0wt％；所述水浴加热的温度为35-45摄氏度，所述水浴加热的时间为30-240min；所述灭酶处理的温度为90-95摄氏度，所述灭酶处理的时间为20-40min。进一步地，步骤(1)、步骤(3)及步骤(4)所述浓缩的方式包括真空浓缩，步骤(1)、步骤(3)及步骤(4)所述干燥的方式包括冷冻干燥及喷雾干燥。优选地，步骤(1)所述离心的离心速率为4000-12000rpm，离心的时间为15-40min；步骤(2)及步骤(4)所述离心的离心速率为4000-10000r/min；离心的时间为15-30min，离心的温度为4-25摄氏度。进一步优选地，步骤(2)及步骤(4)所述离心的温度为4摄氏度。本专利技术提供的具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽能够应用在制备乳液和奶油中。本专利技术在前期筛选抗氧化性最好的组分(具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽)时，在步骤(3)所述收集洗脱液的步骤中，分段收集洗脱液各组分，同时检测收集的各组分的DPPH自由基清除率和OH自由基清除率，根据DPPH自由基清除率和OH自由基清除率检测结果，收集DPPH自由基清除率和OH自由基清除率最高的组分即为抗氧化性最好的组分。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和有益效果：(1)本专利技术提供的制备方法，采用生物酶法等技术，以鸢乌贼为原料，制备出具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽；所述具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽，其乳化活性好，EAI能达140-200m2/g，乳化稳定性高，在室温条件下ESI为70-120min，抗氧化活性高，在样品蛋白浓度为1mg/mL时DPPH自由基清除率60-80％，羟自由基清除率50-70％；(2)本专利技术提供的具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽的制备方法，具有工艺简便、产品安全及可应用于实际生产等优点。具体实施方式以下结合附图和实例对本专利技术的具体实施作进一步说明，但本专利技术的实施和保护不限于此。需指出的是，以下若有未特别详细说明之过程，均是本领域技术人员可参照现有技术实现或理解的。所用试剂或仪器未注本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽，其特征在于，氨基酸序列如SEQID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
20180827 CN 20181098152411.一种具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽，其特征在于，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种如权利要求1所述的具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.一种制备权利要求1所述的具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）鸢乌贼蛋白提取
将鸢乌贼去除头、内脏后洗净、沥干，用绞肉机绞成肉糜，将肉糜加入水中，混合均匀，得到肉糜液，调节肉糜液的pH为碱性，搅拌处理，离心取上清液，将上清液的pH调节为酸性，离心取沉淀，加水，混合均匀得到混合液，调节混合液的pH值为中性，透析至透析液中检测不出盐离子，浓缩，干燥得到鸢乌贼蛋白；
（2）鸢乌贼蛋白预处理及控制酶解
将步骤（1）所述鸢乌贼蛋白加入水中，均质处理，混合均匀得到鸢乌贼蛋白的水溶液，调节鸢乌贼蛋白的水溶液pH值为6.5-8.0，升温，加入蛋白酶进行酶解反应，然后进行灭酶处理，离心取上清液，得到酶解液；
（3）鸢乌贼蛋白肽的分离富集
将步骤（2）所述酶解液通过超滤膜，取滤过液；将所述滤过液通过葡聚糖凝胶层析柱，用洗脱液洗脱，收集分子量为300Da-900Da的组分，浓缩，干燥，得到纯化后的蛋白肽；
（4）鸢乌贼蛋白肽的限制性酶法交联
将步骤（3）所述纯化后的蛋白肽加入水中，混合均匀，得到蛋白溶液，调节所述蛋白溶液的pH值为7.0-8.0，然后加入谷氨酰胺转胺酶，水浴加热，然后进行灭酶处理，离心取上清液，浓缩，干燥得到所述具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽。


4.根据权利要求3所述的制备具有乳化活性与抗氧化活性的鸢乌贼蛋白肽的方法，其特征在于，步骤（1）所述肉糜与水的质量比为1:5-1:20；所述调节肉糜液的pH为碱性，是使调节后的肉糜液pH值为8-11；所述搅拌处理的搅拌速率为60-1200r/min，搅拌处理的时间为0.5-3h；所述将上清液的pH调节为酸性，使调节...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晓，杨贤庆，李来好，陈胜军，吴燕燕，马海霞，邓建朝，杨少玲，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院南海水产研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44