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miRNA125b纳米粒子的应用制造技术

技术编号:22556079 阅读:36 留言:0更新日期:2019-11-16 00:35
miRNA125b纳米粒子的应用,它涉及黑色素细胞领域,本发明专利技术将浓度为5~20ug/mL的miRNA125b纳米粒子与黑色素细胞培养24~48h,用于抑制黑色素细胞增值。本发明专利技术针对MIR‑125b对小鼠黑色素细胞黑色素的合成具有抑制作用,并初步探索其分子机制,为哺乳动物毛色形成的分子网络提供理论依据。本发明专利技术应用于黑色素领域。

Application of mirna125b nanoparticles

The application of mirna125b nanoparticles relates to the field of melanocytes. The present invention cultivates mirna125b nanoparticles with melanocytes at a concentration of 5-20ug / ml for 24-48h to inhibit the proliferation of melanocytes. The invention aims at the inhibitory effect of Mir \u2011 125b on the synthesis of melanin in mouse melanocytes, and preliminary exploration of its molecular mechanism, so as to provide theoretical basis for the molecular network of mammalian hair color formation. The invention is applied to the field of melanin.

【技术实现步骤摘要】
miRNA125b纳米粒子的应用
本专利技术涉及的miRNA125b纳米粒子领域,具体涉及miRNA125b纳米粒子的应用。
技术介绍
皮肤是脊椎动物最容易被观察到的重要表型特征,人类皮肤可呈红黄棕及黑色,这主要与色素的沉着程度有关,黑色素细胞可合成黑色素,将其分泌到皮肤角质细胞中,与肤色及毛发调控密切相关。黑色素最重要作用是可以吸收紫外线,保护肌肤免受光老化、皮肤炎症和皮肤癌的侵害。黑色素细胞的代谢若是受到破坏或抑制,会产生一些疾病,例如遗传疾病白化症,黑色素细胞瘤等,据了解,在皮肤肿瘤中,约有80%的死亡是由黑色素瘤造成。此外黑痣、雀斑等皮肤上的斑点,也都与黑色素细胞有关。综上所述,黑色素细胞的研究有利于理解和掌握产生黑色素机制和它的调节,在美容和化妆品领域可以制造新的美白产品,在医学领域可以治疗白化病,白癜风,黑毒肿等疾病,而且黑色素有很大应用潜力,如用作化妆品或染发剂装饰、清除自由基、生物杀虫剂光保护等。黑色素可用于病毒性疾病的预防和治疗,可溶性黑色素在体外对HIV病毒有显著抑制作用,还可抗流感病毒诱导细胞凋亡.这些都与我们的生活息息相关。已知MicroRNA是皮肤生理学的重要调节剂并且被认为是治疗皮肤疾病的新治疗靶标。miR-125b被确定为稳态黑素生成的有效调节剂。
技术实现思路
本专利技术提供了一种miRNA125b纳米粒子的用途。本专利技术的miRNA125b纳米粒子的应用,将浓度为5~20ug/mL的miRNA125b纳米粒子与黑色素细胞培养24~48h,用于抑制黑色素细胞增值。本专利技术包含以下有益效果:本专利技术针对MIR-125b对小鼠黑色素细胞黑色素的合成具有抑制作用,并初步探索其分子机制,为哺乳动物毛色形成的分子网络提供理论依据。本专利技术发现miR-125b的表达与色素水平呈负相关,miR-125b模拟物可降低色素沉着相关基因和黑色素含量的表达,这意味着miR-125b可减少色素沉着。本专利技术旨在探究MIR-125b对黑色素细胞产生黑色素调控的具体机制以及验证对黑色素生成的抑制作用。近年来,已经有一些调控黑色素生成的miRNA调控黑色素的生成网络正在逐渐形成,进一步研究黑色素沉积的分子机制,利用miRNA定向改变毛色以及将miRNA应用于美容行业将会成为未来研究miRNA调控色素沉积的新方向。附图说明图1为实施例1的5μg/mlmir-125-b纳米粒子作用48h在黑色素细胞内表达图;图2为PHY-502载体质粒图。具体实施方式具体实施方式一:本实施方式的miRNA125b纳米粒子的应用,将浓度为5~20ug/mL的miRNA125b纳米粒子与黑色素细胞培养24~48h,用于抑制黑色素细胞增值。本实施方式所述的黑色素细胞为melan-a小鼠黑色素细胞,购买自上海沪震生物科技有限公司。具体实施方式二:本实施方式与具体实施方式一不同的是:miRNA125b纳米粒子的浓度为10~15ug/mL。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式三:本实施方式与具体实施方式一不同的是:miRNA125b纳米粒子的浓度为12~18ug/mL。其它与具体实施方式一相同具体实施方式四:本实施方式与具体实施方式一不同的是:培养时间为32~48h。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式五:本实施方式与具体实施方式一不同的是:所述的培养24~48h,是在96孔板中进行的。其它与具体实施方式一相同。本
技术实现思路
不仅限于上述各实施方式的内容,其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现专利技术的目的。通过以下实施例验证本专利技术的有益效果:实施例1miRNA125b纳米粒子对黑色素细胞的功能验证:一、miRNA125b纳米粒子的构建;1载体的双酶切取含PHY-502载体质粒(购买得到,质粒如图2所示)的菌液过夜培养,并取新鲜菌液3-5mL提取质粒。2.取1μg新鲜质粒,用相应的限制性内切酶进行双酶切。酶切体系如下:于37℃酶切约3h。1)将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳,电泳结束后,进行胶回收,步骤如下:在、紫外灯下,切下包含目的片段的胶条。用天平称量总重量并减去空管的重量算出凝胶的重量,按100mg=100μL来计算凝胶的体积,并加入3倍凝胶体积的QGbuffer置于50℃水浴锅内将凝胶彻底融化。期间适当摇晃EP管,加快凝胶的溶解。2)凝胶彻底融化后,加入与凝胶等体积的异丙醇并混合均匀。3)将上述液体全部转移到滤柱内,13000rpm离心30s。(可重复一次)然后弃掉管内液体,向柱内加入750μL的PEbuffer。离心1min。弃掉管内液体,再次空离2min。换一个新的1.5mL的EP管,向柱子内加入20μL的ddH2O,离心1min。为了提高回收率,可将溶解的DNA再次加入柱子内离心一分钟。弃掉柱子,即为回收的载体片段,并测定浓度。3.目的片段的扩增及酶切(1)将合成的引物稀释成终浓度为10μmol/L的储藏液。(2)利用稀释的引物及客户提供的模板进行PCR扩增。体系如下:模板1-2μg引物12μL引物22μLPCRmix25μLddH2O补足50μL将上述材料加入薄壁管内混匀并点离后放入PCR仪内,选择好合适的退火温度和延伸温度,即可开始PCR扩增。(3)PCR结束后进行琼脂糖凝胶电泳,并回收目的基因。方法同上。(4)将回收后的目的基因进行双酶切,酶切体系如下:于37℃酶切约5h或者过夜。(5)将酶切产物进行琼脂糖电泳并回收目的片段,方法同上。4.过表达载体与目的片段的连接(1)测定回收载体和目的片段的浓度,并按载体:目的片段=1:7的摩尔比例计算载体和目的片段所需的体积比。(2)过表达载体与目的片段的连接,连接体系如下:回收载体160ng目的片段80ng5×CEEntryBuffer4μLExnaseentry2μLddH2O补足20μL于37℃连接30min后,立即置于5℃冰水浴冷却。5.转化(1)将感受态细胞置于冰上(4℃)待其自然解冻后,取10μL连接产物加入感受态细胞中于冰上(4℃)放置30min。(2)之后于42℃水浴中热击90s。然后迅速置于冰上(4℃)放置2-3min。(3)加入500μL不含抗生素的SOC培养基于37℃,225rpm振荡培养45min。(4)30本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.miRNA125b纳米粒子的应用,其特征在于将浓度为5~20ug/mL的miRNA125b纳米粒子与黑色素细胞培养24~48h,用于抑制黑色素细胞增值。/n

【技术特征摘要】
1.miRNA125b纳米粒子的应用,其特征在于将浓度为5~20ug/mL的miRNA125b纳米粒子与黑色素细胞培养24~48h,用于抑制黑色素细胞增值。


2.根据权利要求1所述的miRNA125b纳米粒子的应用,其特征在于miRNA125b纳米粒子的浓度为10~15ug/mL。


3.根据权利要求2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘君星刘玉荣王琳魏凤香
申请(专利权)人:佳木斯大学
类型:发明
国别省市:黑龙;23

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