小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的用途。本发明专利技术利用蟑螂过敏原建立了小鼠的哮喘模型，小鼠被分为对照组，哮喘组，哮喘干预组三组，通过气道阻力、病理切片、肺泡灌洗液中炎症细胞数量等方法，来评判小鼠疾病的严重程度。本发明专利技术中氨氧基乙酸的干预可以提高肺门淋巴结中Foxp3

The use of small molecular compound aminoacetic acid in the preparation of asthma drugs

The invention discloses the use of a small molecular compound aminoxyacetic acid in the preparation of asthma drugs. The invention uses cockroach allergen to establish a mouse asthma model. The mouse is divided into three groups: control group, asthma group and asthma intervention group. The severity of the disease of the mouse is evaluated by the methods of airway resistance, pathological section, number of inflammatory cells in the BALF, etc. The intervention of aminoacetic acid in the invention can improve Foxp3 in hilar lymph nodes

【技术实现步骤摘要】
小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的用途
本专利技术涉及生物
，具体是一种小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的用途。
技术介绍
哮喘是一种由过敏原所诱导的慢性呼吸系统疾病，症状为喘息、气促、呼吸困难等，严重者可危及生命，其特征主要为呼吸道慢性炎症和气道高反应性。近年来，哮喘的发病率不断上升，已成为一个重要的公共卫生问题。过敏性哮喘当前的治疗策略依赖于糖皮质激素、长效β2-受体激动剂等，但均为对症治疗，不能从根本上抑制哮喘发作。NaiveCD4+T细胞可以分化成各种T辅助细胞（Thelper），包括Th1，Th2，Th9，Th17和T-Regulatorycell（Treg）细胞。每一种不同的T辅助细胞具有它们独特的功能，是调节适应性免疫的重要组成部分。不同于其它的CD4+T细胞，Treg的主要功能是抑制免疫反应，维持自身的免疫耐受，并预防自身免疫性疾病的发生。Treg的表面标志物是CD4+和CD25+，其主要转录因子是ForkheadboxP3（Foxp3）。Foxp3对于Treg的抑制活性有着至关重要的作用。在小鼠中，缺陷型Foxp3导致免疫耐受性丧失和自身免疫疾病。过去一直认为Thelper(Th)1/Th2失衡是引起哮喘的主要原因，然而，越来越多的研究表明，其他类型的CD4+T细胞如Th17和Treg细胞也参与到哮喘的发病过程中，特别是在重症哮喘中。与轻度哮喘患者或健康对照相比，重症哮喘患者中，经常可以观察到Foxp3阳性Treg细胞的比例减少或功能受损。在小鼠哮喘模型中也有类似的报道，在常期的慢性炎症环境中Treg细胞会丧失抑炎的活性，甚至还会表现出向促炎细胞亚型进行再分化的现象。综上所述Treg与哮喘的发生，加重有着密切的关系。所以，寻找一种对Treg细胞有调节效果的小分子化合物，可能为治疗哮喘带来新的思路。
技术实现思路
本专利技术就是为了解决上述技术问题，所提供了一种小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的用途。本专利技术是按照以下技术方案实现的。一种小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的应用。进一步的，在小鼠哮喘模型中，氨氧基乙酸提高了哮喘小鼠肺门淋巴结中Foxp3+Treg细胞的比例。进一步的，在小鼠哮喘模型中，经过氨氧基乙酸干预的哮喘小鼠肺过敏性炎症减少，包括支气管周围炎症细胞的浸润减少和杯状细胞的增生减少，以及BALFs中嗜酸性粒细胞，淋巴细胞和中性粒细胞减少。进一步的，在小鼠哮喘模型中，氨氧基乙酸显著降低哮喘小鼠的气道阻力。本专利技术获得了如下的有益效果。本专利技术的氨氧基乙酸（AOA）是一种小分子转氨酶的抑制剂，小分子化合物AOA能在小鼠哮喘模型中显著的上调FOXP3+Treg细胞的比例，起到很好的保护作用，缓解肺部炎症和哮喘症状，因此，AOA可作为治疗哮喘的一个潜在的药物。附图说明图1是本专利技术气道高反应性检测图；图2是本专利技术小鼠肺组织病理切片图H&E及PAS染色图；图3是本专利技术支气管肺泡灌洗液细胞总数及细胞分类计数图；图4是本专利技术肺门淋巴结内Foxp3阳性细胞流式检测图。具体实施方式下面结合附图及实施例对本专利技术进行进一步说明。一、材料和方法1.实验动物6-8周雌性C57BL/6小鼠购自上海斯莱克实验动物有限公司。饲养在复旦大学实验动物科学部或复旦大学附属儿科医院动物房，饲养环境符合SPF级环境设施标准。实验方案得到了复旦大学附属儿科医院伦理委员会的批准。2.小鼠哮喘模型的建立以及AOA的干预根据实验室已经发表的方法（XUT,ZHOUY,QIUL,etal.ArylHydrocarbonReceptorProtectsLungsfromCockroachAllergen-InducedInflammationbyModulatingMesenchymalStemCells[J].JImmunol,2015），利用气道内滴注蟑螂过敏原（CRE）的方法，建立小鼠哮喘模型。首先，先利用异氟烷将小鼠麻醉至半昏迷状态，再将50μl的过敏原慢慢滴入小鼠气道内（20µg过敏原每只小鼠）。在第0，1，2，3天，每天向每只小鼠滴注20μgCRE，0-3天是模型的致敏阶段。而对照组小鼠则用PBS来替代过敏原。在第3天以后，让小鼠休息7天，在此期间不对小鼠做任何人为的干预。第10天到第13天，为模型的激发阶段，仍然用滴鼻的方法将20µg过敏原滴入每只小鼠的鼻腔之内。对照组还是用PBS来替代过敏原。对于哮喘干预（AOA）组的小鼠来说，在激发阶段，每天（D10-D13）通过腹腔向小鼠注射AOA(37.5μg/g体重)。在第14天时，检测气道阻力后，处死小鼠，收集小鼠的肺组织做石蜡切片或提取mRNA，收集气管肺泡灌洗液（BALF）等，以此来评判小鼠疾病的严重程度。分组：①对照组：致敏和激发阶段均采用50μlPBS处理；②哮喘组：致敏和激发阶段均采用50μlCRE（20μg）处理；③哮喘干预组：致敏和激发阶段均采用50μlCRE（20μg）处理，在在激发阶段，通过腹腔向小鼠注射AOA(37.5μg/g体重)。每组5只小鼠。每次，实验重复3次。3采集血液本专利技术中采血方式是摘除眼球采血。将小鼠深度麻醉，左手抓住小鼠颈部皮肤，并用食指用力将小鼠颈部皮肤向后拉扯，使眼球突出。用眼科弯镊夹住眼球并往上提拉，将鼠倒立，用离心管接住流出的血液。采血完毕立即人道处死小鼠。每次采血量0.6～0.1mL。4小鼠支气管肺泡灌洗液收集将处死小鼠，打开胸腔，暴露气管。在气管上用剪刀剪开一个小口，将留滞针的套管（软管）插入气管，滞留针头伸入大约1厘米（切忌过度伸入，以免刺破肺部）。注射器中吸入0.8mLPBS，接上滞留针头，注射入肺内，轻按摩小鼠胸口，吸出0.5mLPBS，收集到离心管中，重复一次，加入同一个1.5mL离心管。将1.5mL离心管离心：800g5min。收集沉淀细胞用于流式检测，上清用于检测细胞因子。5肺泡灌洗液计数（BALF，bronchoalveolarlavagefluid）将收集到的肺泡灌洗液离心后弃上清，并将细胞重悬于适量PBS中。将细胞悬液与台盼蓝等体积混合，用康宁全自动计数器计数（细胞总数）。通过流式细胞术进行BALF细胞分类计数。将以下每种抗体及其各自的同种型对照加入到BALF细胞中，PEanti-siglec-F(catalognumber:12-1702-80),fluoresceinisothiocyanateanti-alpha-mac3(85-11-0112-82),eFluor780anti-Gr-1(85-94-5931-71),PE-Cy5anti-CD3e(85-15-0031-63)andanti-CD19(85-15-0191-81)，以上抗体均来美国eBioscience公司。嗜酸性粒细胞定义为SSChighSiglecF+Mac3-细胞，肺泡巨噬细胞被鉴定为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的一种小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的应用，其特征在于：在小鼠哮喘模型中，氨氧基乙酸提高了哮喘小鼠肺门淋巴结中Foxp3+Treg细胞的比例。


3.根据权利要求1所述的一种小分子化合物氨氧基乙酸在制备治疗哮喘药物中的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：周玉峰，孙立成，
申请(专利权)人：复旦大学附属儿科医院，
类型：发明
国别省市：上海;31