人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，按质量百分比由以下组分组成：人成纤维细胞调节培养浓缩液20.0％～50.0％、卵磷脂2.0％～8.0％、三油酸甘油酯0.5～2.0％、抗氧化剂0.1％～4.0％、稳定剂0.4％～8.0％、甘草酸二钾0.2％～8.0％、丙二醇6.0％～27.0％，柠檬酸缓冲液15.0～49.0％，以上各组分质量百分比之和为100％。本发明专利技术还公开了上述脂质体的制备方法，其得到的脂质体粒径均一，PDI分布小，可常温保存18个月，在保留了人成纤维细胞调节培养液活性的同时解决了人成纤维细胞调节培养液保存期短，存储条件苛刻的问题。同时本发明专利技术公开了人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体在美容护肤技术领域中的应用。

Flexible liposome of human fibroblast regulatory medium and its preparation and Application

The invention discloses a flexible liposome of human fibroblast regulating culture medium, which is composed of the following components by mass percentage: human fibroblast regulating culture concentrate 20.0% - 50.0%, lecithin 2.0% - 8.0%, triglyceride 0.5-2.0%, antioxidant 0.1% - 4.0%, stabilizer 0.4% - 8.0%, dipotassium glycyrrhizinate 0.2% - 8.0%, propylene glycol 6.0% - 27.0%, Citric acid buffer 15.0-49.0%, the sum of the above components is 100%. The invention also discloses the preparation method of the liposome. The obtained liposome has uniform particle size, small PDI distribution, and can be stored at room temperature for 18 months. While retaining the activity of human fibroblast regulating culture medium, the problem of short storage period and harsh storage conditions of human fibroblast regulating culture medium is solved. At the same time, the invention discloses the application of flexible liposome of human fibroblast regulating culture medium in the field of beauty and skin care technology.

【技术实现步骤摘要】
人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体及其制备方法和应用
本专利技术属于生物医学美容护肤
，具体涉及一种人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，具体还涉及上述人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体的制备方法，本专利技术还涉及该柔性脂质体在美容护肤
的应用。
技术介绍
随着人们生活水平的提高，人们对于美容保养越来越重视，市场上的美容保养品种类繁多，但大都只能停留在皮肤表面起到物理屏障的作用，不能透过皮肤屏障，从肌底解决皮肤问题，并且现有的美容产品不具有生物学活性，不能有效促进细胞的新陈代谢，改善皮肤问题。人成纤维细胞调节培养液含有丰富的活性细胞生长因子及胶原蛋白，并且其生物活性极高，对多种细胞生理功能和代谢活动发挥生物调节作用，在美容护肤、整形外科、烧伤溃疡以及各种皮肤病的伤口修复与愈合中有重要作用。但是人成纤维细胞调节培养液属于生物活性制品，其富含的活性细胞生长因子及胶原蛋白极易失活，存储条件特别苛刻，需要冷冻或冷藏保存，并且将其直接添加到霜膏、乳液、面膜等产品中，常温条件下极易失活，达不到美容护肤的效果，极大的限制了其在美容护肤
的应用。柔性脂质体(如Transfersome和Ethosome)作为有效的透皮载体具有独一无二多样性的功能，能转运不同的药物，而不需要考虑其大小、结构、分子量或极性。柔性脂质体具有独特的变形性和穿透机理，使其可以以完整的形式，在皮肤水化力的作用下，变形穿透皮肤屏障，由角质层细胞间通道进入皮下组织，达到发挥疗效的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，能够保留人成纤维细胞调节培养液细胞生长因子及胶原蛋白的活性，从而提高了人成纤维细胞调节培养液的活性保存期、透皮吸收性及生物利用度。本专利技术的第二个目的在于提供上述人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体的制备方法。本专利技术的第三个目的在于提供上述人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体在美容护肤
中的应用，解决现有美容用人成纤维细胞调节培养液直接应用效果不明显或配伍性性差的问题。本专利技术所采用的技术方案是，人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，按质量百分比由以下组分组成：人成纤维细胞调节培养浓缩液20％～50％、卵磷脂2.0％～8.0％、三油酸甘油酯0.5～2.0％、抗氧化剂0.1％～4.0％、稳定剂0.4％～8.0％、甘草酸二钾0.2％～8.0％、丙二醇6.0％～27.0％，柠檬酸缓冲液15～49％，以上组分质量百分比之和为100％。本专利技术的特征还在于，人成纤维细胞调节培养浓缩液为无血清人成纤维细胞调节培养液经过超滤浓缩后得到，其总蛋白含量为10～20mg/mL；抗氧化剂为番茄红素、辅酶Q10、愈创树脂、类胡萝卜素、二丁基化羟基甲苯、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素E醋酸酯、姜黄素、没食子酸丙酯、丁基羟基茴香醚中的一种或多种；稳定剂为蛋氨酸、精氨酸、辛酸、聚山梨酯、PEG400、胆酸钠，去氧胆酸钠中的一种或多种；人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体粒径为190～210nm；本专利技术所采用的第二个技术方案是，人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体的制备方法，具体按照以下步骤实施：步骤1，按质量百分比分别称取以下原料：人成纤维细胞调节培养浓缩液20.0％～50.0％、卵磷脂2.0％～8.0％、三油酸甘油酯0.5～2.0％、抗氧化剂0.1％～4.0％、稳定剂0.4％～8.0％、甘草酸二钾0.2％～8.0％、丙二醇6.0％～27.0％，柠檬酸缓冲液15.0～49.0％，以上组分质量百分比之和为100％；步骤2，将步骤1称取的卵磷脂、三油酸甘油酯和抗氧化剂溶解于无水乙醇中，在水浴条件下搅拌，使其完全溶解，得醇相溶液；步骤3，将步骤1称取的甘草酸二钾和稳定剂加入到柠檬酸缓冲液中得混合溶液；步骤4，将步骤3得到的混合溶液滴加到步骤2的醇相溶液中，边滴加边搅拌，滴加完成后，超声形成W/O型初乳，并将初乳转移到旋转蒸发瓶中，充入N2，旋转蒸发除去乙醇；步骤5，将步骤4所得W/O型初乳，采用高压微射流进行循环处理，即可得粒径均一的W/O型初乳；步骤6，将步骤1称取的人成纤维细胞调节培养浓缩液与丙二醇混合均匀后，滴加到步骤5所得W/O型初乳中，水浴条件下，进行磁力搅拌，搅拌完成后，在冰水浴中超声，即可得到W/O/W型人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体。本专利技术采用的第二种技术方案的特点还在于，步骤2中卵磷脂、三油酸甘油酯和抗氧化剂总质量与无水乙醇加入的质量之比为1:2～1:5.5，三油酸甘油酯与卵磷脂的质量比为1:1～1:16；抗氧化剂与卵磷脂的质量比1:2～1:20，水浴温度为30～50℃，搅拌时间为10～20min，搅拌速率为500～800r/min；步骤3中稳定剂与卵磷脂的质量比1:1～1:5；甘草酸二钾与卵磷脂的质量比1:1～1:10；柠檬酸缓冲液的与醇相溶液的质量之比为1:10～16:5。步骤4中滴加速度为10mL/min，搅拌速度为500～800r/min，滴加完成后，搅拌10～15min，超声温度30～40℃，超声时间15～25min，超声功率300w，超声完成后，旋转蒸发除去乙醇，水浴温度为20～35℃。步骤5中微射流的压力为200MPa以下，循环处理次数为3～5次，得到的W/O型初乳粒径为180～200nm。本专利技术的第三个技术方案是，人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，在美容护肤
中的应用。本专利技术具有如下有益效果：1.本专利技术采用脂质体技术将人成纤维细胞调节培养液进行包裹，并制备成纳米级柔性脂质体，粒径均一，PDI分布小，可常温保存18个月，在保留了人成纤维细胞调节培养液活性的同时解决了人成纤维细胞调节培养液保存期短，存储条件苛刻的问题。2.本专利技术制备的人成纤维细胞调节培养液纳米柔性脂质体中含有丙二醇和甘草酸二钾。丙二醇是一种保湿剂，甘草酸二钾是一种具有抗炎、抗过敏、同时具有保湿功效的化妆品原料，将这两种物质添加到纳米柔性脂质体中，不仅使脂质体本身具有了保湿、抗炎、抗过敏功效，而且增加了磷脂双分子层的流动性和柔性，使其在传递过程中发生变形，更易通过比其粒径小的间隙，达到肌底层，解决了培养液中活性成分透皮吸收难的问题，并且提高了人成纤维细胞调节培养液的生物利用度。3.本专利技术制备的人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，可以直接进行应用，也可以以任意比例添加到膏霜、乳剂、面膜等产品中，拓宽了其在生物医学美容护肤
的应用。附图说明图1为本专利技术人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体的制备工艺流程图；图2为本专利技术实施例1～3所得人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体的粒径随储存时间的变化图；图3为本专利技术实施例1～3所得人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体的Zeta电位绝对值随储存时间的变化图；图4为本专利技术实施例2所得人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体与未经包裹的人成纤维细胞调节培养浓缩液总蛋白体外累积经皮渗透量随时间变化图；图5为本专利技术所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，其特征在于，按质量百分比由以下组分组成：人成纤维细胞调节培养浓缩液20.0％～50.0％、卵磷脂2.0％～8.0％、三油酸甘油酯0.5～2.0％、抗氧化剂0.1％～4.0％、稳定剂0.4％～8.0％、甘草酸二钾0.2％～8.0％、丙二醇6.0％～27.0％，柠檬酸缓冲液15.0～49.0％，以上组分质量百分比之和为100％。/n

【技术特征摘要】
1.人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，其特征在于，按质量百分比由以下组分组成：人成纤维细胞调节培养浓缩液20.0％～50.0％、卵磷脂2.0％～8.0％、三油酸甘油酯0.5～2.0％、抗氧化剂0.1％～4.0％、稳定剂0.4％～8.0％、甘草酸二钾0.2％～8.0％、丙二醇6.0％～27.0％，柠檬酸缓冲液15.0～49.0％，以上组分质量百分比之和为100％。


2.如权利要求1所述的人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，其特征在于，所述人成纤维细胞调节培养浓缩液为无血清人成纤维细胞调节培养液经过超滤浓缩后得到，其总蛋白含量为10～20mg/mL。


3.如权利要求1所述的人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，其特征在于，所述抗氧化剂为番茄红素、辅酶Q10、愈创树脂、类胡萝卜素、二丁基化羟基甲苯、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素E醋酸酯、姜黄素、没食子酸丙酯、丁基羟基茴香醚中的一种或多种；所述稳定剂为蛋氨酸、精氨酸、辛酸、聚山梨酯、PEG400、胆酸钠，去氧胆酸钠中的一种或多种。


4.如权利要求1所述的人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体，其特征在于，所述人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体粒径为190～210nm。


5.权利要求1所述的人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：
步骤1，按质量百分比分别称取以下原料：人成纤维细胞调节培养浓缩液20.0％～50.0％、卵磷脂2.0％～8.0％、三油酸甘油酯0.5～2.0％、抗氧化剂0.1％～4.0％、稳定剂0.4％～8.0％、甘草酸二钾0.2％～8.0％、丙二醇6.0％～27.0％，柠檬酸缓冲液15.0～49.0％，以上组分质量百分比之和为100％；
步骤2，将步骤1称取的卵磷脂、三油酸甘油酯和抗氧化剂溶解于无水乙醇中，在水浴条件下搅拌一段时间，使其完全溶解，得醇相溶液；
步骤3，将步骤1称取的甘草酸二钾和稳定剂加入到柠檬酸缓冲液中，得到混合溶液；
步骤4，将步骤3得到的混合溶液滴加到步骤2的醇相溶液中，边滴加边搅拌，滴加完成后，超声形成W/O型初乳，并将初乳转移到旋转蒸发瓶中，充入N2，旋转蒸发除去乙醇；
...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡春梅，王海江，王静，肖萍，
申请(专利权)人：西安艾尔菲生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61