一种短命植物新疆小拟南芥组织培养方法技术

本发明专利技术属于植物组织培养方法领域，具体的说，涉及一种短命植物新疆小拟南芥组织培养方法。所述新疆小拟南芥组织培养方法，包括如下步骤：1)新疆小拟南芥种子的消毒，2)消毒后的种子在培养基上点播、培养；3)在步骤2)培养得到的小拟南芥幼苗上选取外植体；4)将外植体在不定芽培养基进行愈伤诱导培养，得到愈伤组织；进一步进行不定芽诱导培养得到不定芽；5)将不定芽在生根培养基进行生根诱导培养，得到完整植株。本发明专利技术提供小拟南芥不同外植体的组织培养，初步建立小拟南芥不同外植体的组织培养技术，为后续研究小拟南芥的基因转化和功能鉴定提供一定的研究基础。为进一步发掘小拟南芥耐逆资源及与环境适应性的研究提供理论依据。

Tissue culture of Arabidopsis thaliana

The invention belongs to the field of plant tissue culture method, in particular to a tissue culture method of Xinjiang Arabidopsis thaliana, a short-lived plant. The tissue culture method of Xinjiang Arabidopsis includes the following steps: 1) disinfection of Xinjiang Arabidopsis seeds, 2) the sterilized seeds are sown and cultured on the culture medium, 3) the explants are selected from the cultured Arabidopsis seedlings, 4) the explants are cultured on the adventitious bud culture medium to get the callus, and further the adventitious bud induction culture is carried out to get the callus Adventitious buds; 5) the adventitious buds were induced and cultured in the rooting medium to obtain complete plants. The invention provides tissue culture of different explants of Arabidopsis thaliana, preliminarily establishes tissue culture technology of different explants of Arabidopsis thaliana, and provides certain research basis for subsequent research on gene transformation and function identification of Arabidopsis thaliana. It provides a theoretical basis for further exploring the stress tolerance resources of Arabidopsis thaliana and its adaptability to the environment.

【技术实现步骤摘要】
一种短命植物新疆小拟南芥组织培养方法
本专利技术属于植物组织培养方法领域，具体的说，涉及一种短命植物新疆小拟南芥组织培养方法。
技术介绍
新疆小拟南芥(Arabidopsispumila)是一种早春短命植物，主要分布于新疆极端环境。小拟南芥是模式植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)的近缘种，同属于十字花科。且同拟南芥相比，它具有更强的抗盐抗旱性、更强的光合效率和更大的果实量，并且株型比拟南芥大。据报道，与拟南芥相比，小拟南芥可适应干旱环境，并耐受一定程度的盐胁迫。是研究生物和环境适应性机制的潜在模式材料，也是一种研究短命植物快速生长发育机制的模式植物。很多研究人员利用植物的愈伤组织来进行转基因相关的研究，而小拟南芥的组织培养技术还未见报道。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题在于：提供一种新疆小拟南芥的组织培养方法。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种短命植物新疆小拟南芥组织培养方法，所述培养方法包括如下步骤：1)新疆小拟南芥种子的消毒；2)消毒后的种子在培养基上点播、培养；3)在步骤2)培养得到的小拟南芥幼苗选取外植体；4)将外植体在不定芽培养基进行愈伤诱导培养，得到致密的愈伤组织；进一步进行不定芽诱导培养得到不定芽；5)将不定芽在生根培养基进行生根诱导培养，得到完整植株。其中，所述步骤1)包括：将新疆小拟南芥种子用70％的乙醇洗涤种子1min，再用20％次氯酸钠溶液震荡洗涤8-10min，最后用无菌水清洗6-7次，每次充分振荡混匀。进一步，所述外植体为根或下胚轴。当所述外植体为根或下胚轴时，所述步骤2中，种子的培养步骤为在4℃条件下春化处理3d，在16h光照/8h黑暗，温度为22℃条件下竖直培养7-8天，得到一周苗龄的小拟南芥幼苗。进一步，所述外植体为宽大肥厚的鲜绿叶片或粗壮叶柄。当所述外植体为宽大肥厚的鲜绿叶片或粗壮叶柄时，所述步骤2)中，种子的培养步骤为在4℃条件下春化处理3d，在16h光照/8h黑暗，温度为22℃条件下竖直培养7-8天，得到一周苗龄的小拟南芥幼苗，将小拟南芥幼苗移栽于含MS培养基的无菌广口瓶中，封口保证无菌，在16h光照/8h黑暗，温度为22℃条件下培养4周，得到五周苗龄的生长出很多莲座叶的小拟南芥幼苗。其中，所述步骤4中愈伤诱导培养的条件为：16h光照/8h黑暗，温度为22℃，不定芽诱导培养的条件为：16h光照/8h黑暗，温度为22℃。其中，所述步骤5中生根诱导培养的条件为：16h光照/8h黑暗，温度为22℃。其中，在步骤5之后，还包括步骤6，对完整植株进行炼苗，并移栽得到成苗，所述步骤6中炼苗条件为：16h光照/8h黑暗，温度为22℃。在上述方法中，每升所述MS培养基包括：30g的蔗糖、0.5g的2-吗啉乙磺酸和4.4g的基础培养基，所述MS培养基的pH值为5.8；所述不定芽诱导培养为MS+0.5mg/L6-BA和0.1mg/LNAA，所述MS+0.5mg/L6-BA和0.1mg/LNAA是向MS培养基中添加6-BA和NAA得到的培养基，所述MS+0.5mg/L6-BA和0.1mg/LNAA中，6-BA的含量为0.5mg/L，NAA的含量为0.1mg/L；所述生根培养基为MS+0.1mg/LNAA，所述MS+0.1mg/LNAA是向MS培养基中添加NAA得到的培养基，所述MS+0.1mg/LNAA中，NAA的含量为0.1mg/L。因此本发专利技术提供小拟南芥不同外植体的组织培养，建立了小拟南芥不同外植体的组织培养技术，为后续研究小拟南芥的基因转化和功能鉴定提供一定的研究基础，为进一步发掘小拟南芥耐逆资源及与环境适应性的研究提供理论依据。附图说明图1为小拟南芥不同外植体组织培养流程图；图2为小拟南芥根外植体组织培养过程，图2中，A为小拟南芥根形成致密型愈伤；B为根愈伤开始形成不定芽；C为根愈伤形成大量不定芽；D为小拟南芥组培苗转入生根培养基；E和F为组培苗长出大量根，图中比例尺代表1cm；图3为小拟南芥下胚轴外植体组织培养过程，图3中，A为小拟南芥下胚轴形成大量愈伤；B为下胚轴愈伤开始形成不定芽；C为不定芽转入生根培养基；D为组培苗长出大量根，图中比例尺代表1cm；图4为小拟南芥叶柄外植体组织培养过程，图4中，A为小拟南芥叶柄形成大量愈伤；B为叶柄愈伤开始形成不定芽；C为不定芽转入生根培养基；D为组培苗长出大量根，图中比例尺代表1cm；图5为小拟南芥叶片外植体组织培养过程，图5中，A为小拟南芥叶片形成大量愈伤；B为叶片愈伤开始形成不定芽；C为不定芽转入生根培养基；D为组培苗长出大量根，图中比例尺代表1cm。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。培养基成分：每升MS培养基包含：30g蔗糖+0.5g2-吗啉乙磺酸(2-(N-Morpholino)ethanesulfonicacid，Germany)+4.4g基础培养基(购自Murashige&SkoogBasalMediumwithVitamins，America的粉末状MS基础培养基)，pH值为5.8。不定芽诱导培养：MS培养基+6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.1mg/L)；生根培养基：MS培养基+NAA(0.1mg/L)。小拟南芥根、下胚轴、叶片和叶柄不同外植体均能在一定时间内形成大量愈伤组织，并且最后均可以被诱导形成大量不定芽，不定芽转入生根培养基进行生根诱导后，都可以诱导形成大量根。小拟南芥不同外植体组织培养的大致流程如图1所示。实施例1将新疆小拟南芥种子在超净工作台里先用70％的乙醇洗涤种子1min，再用20％次氯酸钠溶液震荡洗涤8-10min。最后用无菌水清洗6-7次，每次充分振荡混匀。将小拟南芥种子点播在含MS的培养皿中，放于4℃条件下春化处理3d，之后放置于16h光照/8h黑暗，温度为22℃条件的光照培养箱中竖直培养7-8天后得到小拟南芥幼苗，取小拟南芥幼苗的根作为外植体。剪取生长8天小拟南芥幼苗的根(约1cm)作为外植体。剪好的外植体放置于生芽诱导培养基上，每皿随机放置外植体若干个，每周将外植体转移到新鲜的培养基上，并且观察愈伤诱导和不定芽诱导情况，拍照并做好统计。小拟南芥根外植体在16h光照/8h黑暗，温度为22℃条件的光照培养箱的条件下培养至7天左右开始形成愈伤，培养至20天左右形成大量致密型愈伤组织(如图2-A所示)。对343个根外植体在不定芽诱导培养上进行愈伤诱导培养20天左右并统计，有341个外植体成功诱导出愈伤组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新疆小拟南芥组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)新疆小拟南芥种子的消毒；/n2)消毒后的种子在培养基上点播、培养；/n3)在步骤2)培养得到的小拟南芥幼苗上选取外植体；/n4)将外植体在不定芽培养基进行愈伤诱导培养，得到愈伤组织；进一步进行不定芽诱导培养得到不定芽；/n5)将不定芽在生根培养基进行生根诱导培养，得到完整植株。/n

【技术特征摘要】
1.一种新疆小拟南芥组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)新疆小拟南芥种子的消毒；
2)消毒后的种子在培养基上点播、培养；
3)在步骤2)培养得到的小拟南芥幼苗上选取外植体；
4)将外植体在不定芽培养基进行愈伤诱导培养，得到愈伤组织；进一步进行不定芽诱导培养得到不定芽；
5)将不定芽在生根培养基进行生根诱导培养，得到完整植株。


2.根据权利要求1所述的新疆小拟南芥组织培养方法，其特征在于，所述步骤1)包括：将新疆小拟南芥种子用70％的乙醇洗涤种子1min，再用20％次氯酸钠溶液震荡洗涤8-10min，最后用无菌水清洗6-7次，每次充分振荡混匀。


3.根据权利要求1或2所述的新疆小拟南芥组织培养方法，其特征在于，所述外植体为根或下胚轴。


4.根据权利要求3所述的新疆小拟南芥组织培养方法，其特征在于，所述步骤2中，种子的培养步骤为在4℃条件下春化处理3d，在16h光照/8h黑暗，温度为22℃条件下培养7-8天，得到一周苗龄的小拟南芥幼苗。


5.根据权利要求1或2所述的新疆小拟南芥组织培养方法，其特征在于，所述外植体为宽大肥厚的鲜绿叶片或粗壮叶柄作为外植体。


6.根据权利要求5所述的新疆小拟南芥组织培养方法，其特征在于，所述步骤2)中，种子的培养步骤为在4℃条件下春化处理3d，在16h光照/8h黑暗，温度为22℃条件下竖直培养7-8天得到小拟南芥幼苗，将小拟南芥幼苗移栽于含MS培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄先忠，金玉环，张亭亭，刘丹青，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65