一种铁皮石斛精制多糖及其制备方法技术

本发明专利技术涉及药物提取领域，特别是一种铁皮石斛精制多糖及其制备方法。本发明专利技术提供的铁皮石斛精制多糖具有良好的抗氧化活性，尤其清除羟自由基能力良好。

A refined polysaccharide of Dendrobium candidum and its preparation

The invention relates to the field of medicine extraction, in particular to a refined polysaccharide of Dendrobium candidum and a preparation method thereof. The refined polysaccharide of Dendrobium candidum provided by the invention has good antioxidant activity, in particular good ability of scavenging hydroxyl radicals.

【技术实现步骤摘要】
一种铁皮石斛精制多糖及其制备方法
本专利技术涉及药物提取领域，特别是一种铁皮石斛精制多糖及其制备方法。
技术介绍
铁皮石斛(Dendrobiumofficinale)是一种兰科植物，又名黑节草，为多年生附生型草本植物，长于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，在自然野生状态下萌发率低，且必需与真菌共生才能萌发，再加上其生长缓慢，野生石斛已经很少，已被列为我国重点保护的珍惜濒危药用植物。主要分布我国的广西、浙江、云南、安徽等地。《中华人民共和国药典》中记载铁皮石斛具有益胃生津，滋阴清热的功能。多糖、氨基酸、石斛碱是铁皮石斛的主要有效成分，现代研究表明铁皮石斛有增强免疫、抗疲劳、抗氧化、促消化、降血糖、降血压、抗肝损伤、抗肿瘤等方面药理作用。因而具有“药中黄金”、“救命仙草”的美誉。铁皮石斛与其他石斛相比，多糖含量较高，药理活性更强，在免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗癌、抗肝损伤等方而具有良好的应用前景。但目前一些方而研究水平相对简单，主要表现在研究对象多为粗多糖，杂质较多，难以在分子水平上阐述其药用机理，并且多糖分子结构难以准确得出。铁皮石斛多糖与其它石斛多糖的专属性鉴别研究较少，质量难以控制。因此，铁皮石斛多糖的纯化工艺以及专属性鉴别研究应该是今后的研究方向，以确保铁皮石斛多糖产品的质量。
技术实现思路
为了克服现有技术存在的不足，本专利技术提供一种铁皮石斛精制多糖及其制备方法。本专利技术所述铁皮石斛，均为兰科植物Dendrobiumofficinale的茎。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：一种如式Ⅰ所示的铁皮石斛精制多糖式Ⅰ。本专利技术还提供上述式Ⅰ所示的铁皮石斛精制多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)将铁皮石斛茎，加水，80℃提取2h，提取两次，浓缩，加入95％乙醇，4℃下醇沉48h，离心分离沉淀，冷冻干燥得到铁皮石斛多糖粗品；(2)将步骤(1)所得的铁皮石斛多糖粗品溶于去离子水，加入氯化717阴离子交换树脂进行脱色，脱色后溶液离心取上清液，加入氯仿、正丁醇充分摇匀并震荡，离心除去出现的沉淀。重复多次加入氯仿、正丁醇的操作直至离心后无沉淀产生；冷冻干燥得到除蛋白样品；(3)取步骤(2)所得的除蛋白样品溶于去离子水，0.45μm滤膜过滤除杂，上DEAE-52纤维素层析柱，用280ml去离子水进行洗脱，流速1ml/min，收集洗脱液，用3500Da透析袋进行透析1天，浓缩，冷冻干燥，得到初步纯化多糖；(4)取步骤(3)所得的初步纯化多糖溶于去离子水，0.45μm滤膜过滤除杂，上SephadexG-100凝胶层析柱，用100ml去离子水洗脱，流速0.5mL/min，弃去先流出的50ml，收集后流出的50ml，用3500Da透析袋进行透析1天，浓缩，冷冻干燥，即得铁皮石斛精制多糖。与现有技术比较，本专利技术的方法具有以下优点：本专利技术的铁皮石斛精制多糖具有良好的抗氧化活性，尤其清除羟自由基能力良好。附图说明图1为DOP的HPLC-GPC图。图2为DOP衍生化后HPLC图。图3为DOP红外光谱图。图4为DOP的1H-NMR谱。图5为DOP的13C-NMR谱。图6为DOP甲基化TIC图。图7为DOP结构图。图8为多糖清除ABTS自由基能力。图9为多糖清除羟基自由基能力。图10多糖总还原能力具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1铁皮石斛精制多糖的制备1.1主要材料铁皮石斛，采自广西；抗坏血酸(Vc)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)等，均为国产分析纯；氯化717阴离子交换树脂，索莱宝科技有限公司；DEAE-52纤维素，大连美仑生物技术有限公司；SephadexG-100、3500Da透析袋，上海源叶生物科技有限公司；D-(+)-葡萄糖、D-(+)-甘露糖、D-(+)-半乳糖(AR)，阿拉丁试剂有限公司；L-鼠李糖，大连美仑生物技术有限公司；D-半乳糖醛酸，中国食品药品检定研究院。1.2主要仪器旋转蒸发仪RE-3000，上海亚荣生化有限公司；超声波清洗机，洁盟清洗设备有限公司；集热式恒温加热磁力搅拌器DF-101S，巩义市予华仪器有限责任公司；离心机，上海安亭科学仪器厂；ThermoMultiskanGo酶标仪，美国赛默飞公司；真空冷冻干燥机LGJ-10，北京松源华兴科技发展有限公司；高效液相色谱LC-20A，日本岛津仪器公司；HH数显恒温油浴锅，常州国宇仪器制造有限公司。1.3方法(1)将新鲜的铁皮石斛茎干燥粉末1g，加入30ml蒸馏水，80℃提取2h，提取两次，旋转蒸发仪浓缩至20ml，加入80ml95％乙醇，4℃下醇沉48h，离心分离沉淀，真空冷冻干燥得到铁皮石斛多糖粗品0.3156g；(2)将步骤(1)所得的铁皮石斛多糖粗品溶于10ml去离子水，加入氯化717阴离子交换树脂进行脱色，脱色后溶液离心取上清液，加入氯仿2ml、正丁醇0.5ml，充分摇匀，震荡，离心除去出现的沉淀。重复多次加入氯仿、正丁醇的操作直至离心后无沉淀产生。冷冻干燥得到除蛋白样品。(3)取0.3g步骤(2)所得的样品溶于去离子水，0.45μm滤膜过滤除杂，上DEAE-52纤维素层析柱，用280ml去离子水进行洗脱，流速1ml/min，收集洗脱液，用3500Da透析袋进行透析1天，浓缩，冷冻干燥，得到初步纯化多糖0.052g。(4)取步骤(3)所得的初步纯化多糖0.050g铁皮石斛初步纯化多糖于2mL的去离子水，0.45μm滤膜过滤除杂，上SephadexG-100凝胶层析柱，用100ml去离子水洗脱，流速0.5mL/min，弃去先流出的50ml，收集后流出的50ml，用3500Da透析袋进行透析1天，浓缩，冷冻干燥，即得铁皮石斛精制多糖0.024g，命名为DOP。实施例2分子量分析分别称取不同分子量的葡聚糖标准品，加入0.002mol/L磷酸二氢钠(含0.05％NaN3)，将其配置成浓度约3mg/mL的对照品溶液，之后逐一进行GPC检测，根据标准糖Mw的保留时间绘制标准曲线，统计线性关系。称取一定量的多糖样品，加入0.002mol/L磷酸二氢钠(含0.05％NaN3)，将其配制成浓度约为1mg/mL的溶液，进样检测。根据标准糖重均分子量(Mw)的保留时间得到标准曲线，y＝-0.4394x+10.788，R2＝0.9982。从图1中可以得出，DOP的保留时间为12.150min，经以标准曲线计算，得到样品主要成分峰的Mw为2.76X10^5。实施例3组成分析采用UV-VIS检测器，色谱柱为C18柱(5μm，4.6mm×250mm)，柱温30℃，流动相为磷酸盐缓冲液和乙腈以82:18的比例进行等度洗脱，进样体积为10μL，流速为1mL/min，检测波长为250nm。如图2所示，高效液相分离得到两个峰，与标准单糖的液相色谱图进行比较，得出DOP由甘露糖(Man)和葡萄糖(Glc)组成，计算其峰面积比后得到其摩尔比为14.72：1。实施例4红外光谱分析干燥的精制多糖样品1mg与50mg干燥的KBr晶体混匀研磨后压片，采用傅里叶变换红外光谱仪扫描分析(扫描范围400-4000cm-1)。DOP的红外光谱如图3，3379cm-1和1061.08cm-1吸收峰是分别由糖分子内或分子间氢键的羟本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种如式Ⅰ所示的铁皮石斛精制多糖

【技术特征摘要】
1.一种如式Ⅰ所示的铁皮石斛精制多糖2.根据权利要求1所述的铁皮石斛精制多糖，其特征在于，所述铁皮石斛精制多糖由以下方法制备：(1)将铁皮石斛茎，加水，80℃提取2h，提取两次，浓缩，加入95％乙醇，4℃下醇沉48h，离心分离沉淀，冷冻干燥得到铁皮石斛多糖粗品；(2)将步骤(1)所得的铁皮石斛多糖粗品溶于去离子水，加入氯化717阴离子交换树脂进行脱色，脱色后溶液离心取上清液，加入氯仿、正丁醇充分摇匀并震荡，离心除去出现的沉淀。重复多次加入氯仿、正丁醇的操作直至离心后无沉淀产生；冷冻干燥得到除蛋白样品；(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱华，朱家豪，牛思琪，申利群，田程飘，鲁家豪，
申请(专利权)人：广西民族大学，
类型：发明
国别省市：广西,45