一种用于检测星座链球菌的试剂及其临床应用制造技术

本发明专利技术涉及胃癌的临床诊断技术领域，公开了一种用于检测星座链球菌的试剂，包括生物标记物以及内参引物，其中所述生物标记物包括针对星座链球菌的特异性引物A和特异性引物B，及其在胃癌、特别是早期胃癌诊断中的临床应用。本发明专利技术提供的试剂及临床应用检测方法，通过分析消化道排泄物或分泌物，如粪便或唾液中星座链球菌的相对丰度即可实现对胃癌、特别是早期胃癌高危人群的诊断筛查，是一种无创、简便、准确、灵敏、人群接受度高的新型检测手段，有望成为将来胃癌早期诊断的一种辅助诊断手段，并且有助于高危人群早期发现胃癌，做好胃癌的预警工作。

A reagent for the detection of Streptococcus constellatus and its clinical application

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测星座链球菌的试剂及其临床应用
本专利技术涉及胃癌的临床诊断
，尤其涉及一种用于检测星座链球菌的试剂及其临床应用。
技术介绍
胃癌是一种起源于胃上皮的恶性肿瘤。据最新统计，胃癌发病率在全球常见恶性肿瘤中分别排名第四(男性)、第五位(女性)，死亡率分别排名第三(男性)、第五位(女性)(SiegelRL，MillerKD，JemalA.CancerStatistics，2017.CACancerJClin.2017；67(1)：7-30)。胃癌的高发病率和高死亡率已使其成为全球消化学科和肿瘤学界的棘手难题之一。早期胃癌(癌组织局限于胃黏膜层及黏膜下层，按TNM分期标准，属T1)的5年生存率较高约90％，而IV期胃癌仅<10％(Recio-BoilesA，BabikerHM.Cancer，Gastric.StatPearls.TreasureIsland(FL)2018)。目前胃癌的确诊依赖于病理组织学检查，胃镜及镜下活检目前是诊断胃癌的“金标准”。影像学检查主要起到评估病情的辅助作用，可用于评估胃癌淋巴结或远处转移程度和情况。故早期筛查、预警对胃癌的防治极为重要。迄今为止，临床上尚无一种无创、简便、准确、灵敏、人群接受度高的方法可广泛用于人群的胃癌的早期发现与诊断。尿素呼气试验作为其中为数不多的无创检查，主要用于检测有无幽门螺杆菌感染，然而该检测仅能提供患者是否感染幽门螺杆菌的依据，据统计临床上仅1％幽门螺杆菌感染的患者最终发展为胃癌，故该检测与胃癌的相关性并不大。目前临床上主要分血清学筛查和内镜筛查两种途径，均属侵入性检查：(1)检测血清胃泌素-17和胃蛋白酶原(Pepsinogen，PG)属“血清学活检”方法，由于其影响因素较多而特异性较低。PGI大于70ng/ml及PGI/II>3作为胃癌筛查策略的敏感性、特异性约为85％和74％7。而胃泌素-17的敏感性小于60％，特异性小于70％，且由于其主要由胃窦G细胞分泌，以及易受药物、胃酸分泌等其他因素的影响，临床应用率并不高；(2)单一或联合肿瘤标记物检测因其对胃癌，特别是早期胃癌诊断的阳性率低，后者的阳性率常不到10％，通常不作为胃癌的有效筛查策略，其中糖类抗原CA72-4、糖类抗原CA19-9、癌胚抗原CEA等肿瘤标记物被视为与胃癌的相关性较高，可联合应用辅助胃癌的诊断，然而联合应用价格较昂贵，性价比低；(3)内镜筛查即指电子胃十二指肠镜检查，近年来已逐步取代了早期X线钡餐检查，它可对可疑病变处取活检组织行病理学检查，使其对胃癌的筛查更具针对性，然而也存在侵入性、费用昂贵、人群接受度较低、对内镜操作医师的临床经验依赖性等缺陷，鉴于我国目前国情尚不能成为胃癌大规模筛查的手段，且普通胃镜对早期胃癌病灶的检出阳性率低，作为大规模筛查早期胃癌的可能性仍较低，在我国能够通过胃镜等手段筛诊出的早期胃癌不到10％。(4)目前有既往少数文献报道，可通过胃黏膜活检的途径，对胃黏膜内联合多种细菌的丰度进行16SrRNA基因测序，从而辅助诊断胃癌。然而该检测方法目前仅停留于科学研究阶段，尚不可直接应用于临床，且其具有一定侵入性，并且价格昂贵，基因组检测所需耗时较长，并不适用于一般人群的筛查及随访(CokerOO，DaiZ，NieY，ZhaoG，CaoL，NakatsuG，etal.Mucosalmicrobiomedysbiosisingastriccarcinogenesis.Gut.2018；67(6)：1024-32)。因此，本领域的技术人员致力于开发一种适用于无创、简便、准确、灵敏、人群接受度高的新型检测手段的生物标记物及试剂，能够通过分析消化道排泄物或分泌物，如粪便或唾液中某一种细菌的相对丰度的无创、简便的检测方式，即可早期筛选诊断出胃癌高危人群，尤其是早期胃癌高危人群，并且对胃癌的诊断具有较高的准确性、敏感性和特异性，可以成为胃癌的一种辅助诊断手段，有助于高危人群早期发现胃癌，做好胃癌的预警工作。
技术实现思路
有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是如何提供一种无创、简便、准确、灵敏、人群接受度高的新型检测手段的生物标记物及试剂，能够通过分析消化道排泄物或分泌物、如粪便或唾液中某一种细菌的相对丰度的无创、简便的检测方式，即可早期筛选诊断出胃癌高危人群，尤其是早期胃癌高危人群，并且对胃癌的诊断具有较高的准确性、敏感性和特异性，克服现有技术的不足。为实现上述目的，本专利技术提供了一种用于检测星座链球菌的试剂，包括生物标记物以及内参引物，其中所述生物标记物包括针对星座链球菌的特异性引物A和特异性引物B。进一步地，所述特异性引物A包括上游引物A1和下游引物A2，其中，所述上游引物A1的核苷酸序列为ATCCGATGCGAAAGTGCAGA，所述下游引物A2的核苷酸序列为GGAGAGCGCCTTCCAAATCT。进一步地，所述特异性引物B包括上游引物B1和下游引物B2，其中，所述上游引物B1的核苷酸序列为AAATGCGGCGCTAGCAAAAC，所述下游引物B2的核苷酸序列为CGTTGCAGCTGTCGTAAAGG。进一步地，所述内参引物选择针对16srRNA的引物时，所述内参引物包括上游引物16srRNA-F和下游引物16srRNA-R，其中，所述上游引物16srRNA-F的核苷酸序列为GGTGAATACGTTCCCGG，所述下游引物16srRNA-R的核苷酸序列为TACGGCTACCTTGTTACGACTT。本专利技术还提供了一种如上所述的一种用于检测星座链球菌的试剂的临床应用，所述临床应用为采用所述特异性引物A或所述特异性引物B进行胃癌诊断或早期胃癌诊断。进一步地，所述临床应用的检测方法为实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)方法，所述临床应用的检测指标为受试者样品中的星座链球菌DNA样品与所述内参引物的循环阈值平均值之差△Ct的界定值。进一步地，所述受试者样品为粪便时，采用所述特异性引物A，则所述界定值为-18.71，△Ct高于-18.71的为胃癌或早期胃癌高危人群；采用所述特异性引物B，则所述界定值为-20.48，△Ct高于-20.48的为胃癌高危人群，且当△Ct高于-23.62时则为早期胃癌高危人群。进一步地，所述受试者样品为唾液时，采用所述特异性引物A，则所述界定值为-15.31，△Ct高于-15.31的为胃癌高危人群；采用所述特异性引物B，则所述界定值为-15.48，△Ct高于-15.48的为胃癌高危人群。进一步地，所述临床应用还可联合采用所述特异性引物A和所述特异性引物B。进一步地，所述受试者样品中的星座链球菌DNA样品选择浓度>10ng/μl且OD260/280比值在1.70至2.10之间的DNA样品。与现有技术相比，本专利技术至少具有以下有益的技术效果：(1)本专利技术所采用的检测方法利用受试者提供的粪便或唾液(自然排泄物或分泌物)为检测样品，通过分析粪便或唾液中的星座链球菌的相对丰度，便能早期判别其是否为胃癌(特别是早期胃癌)高危人群，可谓非侵入性、安全系数高的一种检测方法；(2)本专利技术通过检测粪便或唾液中星座链球菌相对丰度的方法，在人群中，利用该细菌特异性引物A或特异性引物B区别胃癌患者、早期胃癌患者与健康人群本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测星座链球菌的试剂，其特征在于，包括生物标记物以及内参引物，其中所述生物标记物包括针对星座链球菌的特异性引物A和特异性引物B。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测星座链球菌的试剂，其特征在于，包括生物标记物以及内参引物，其中所述生物标记物包括针对星座链球菌的特异性引物A和特异性引物B。2.如权利要求1所述的一种用于检测星座链球菌的试剂，其特征在于，所述特异性引物A包括上游引物A1和下游引物A2，其中，所述上游引物A1的核苷酸序列为ATCCGATGCGAAAGTGCAGA，所述下游引物A2的核苷酸序列为GGAGAGCGCCTTCCAAATCT。3.如权利要求1所述的一种用于检测星座链球菌的试剂，其特征在于，所述特异性引物B包括上游引物B1和下游引物B2，其中，所述上游引物B1的核苷酸序列为AAATGCGGCGCTAGCAAAAC，所述下游引物B2的核苷酸序列为CGTTGCAGCTGTCGTAAAGG。4.如权利要求1所述的一种用于检测星座链球菌的试剂，其特征在于，所述内参引物选择针对16srRNA的引物时，所述内参引物包括上游引物16srRNA-F和下游引物16srRNA-R，其中，所述上游引物16srRNA-F的核苷酸序列为GGTGAATACGTTCCCGG，所述下游引物16srRNA-R的核苷酸序列为TACGGCTACCTTGTTACGACTT。5.一种如权利要求1～4任意一项所述的一种用于检测星座链球菌的试剂的临床应用，其特征在于，所述临床应用为采用所述特异性引物A或所述特异性引物B进行胃癌诊断或早期胃癌诊断。6.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：房静远，陈萦晅，周澄蓓，薛锦慧，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：上海,31