【技术实现步骤摘要】
一种木材靶向细胞DNA提取方法
本专利技术涉及木材组织DNA提取方法，具体涉及一种从木材靶向细胞中精准提取DNA的方法。
技术介绍
随着我国经济的持续快速增长以及天然林全面停止采伐，我国对进口木材的需求呈现出膨胀性的发展态势，已经成为全球最大的热带木材进口国。在这样的背景下，我国的木材贸易，特别是以CITES管制木材为代表的热带木材进口贸易已受到国际社会的广泛关注。因此，实现木材科学准确识别，将为我国木材进出口监管、保护与可持续利用全球木材资源提供重要技术支持。木材是树木的茎干部分，如不结合根、叶、花与果实进行识别，单纯依据木材及其解剖构造特征，一般只能识别到“属”或“类”，而无法实现木材“种”水平的识别。这是依据木材解剖构造特征识别木材的世界性难题。近年来，在木材物种识别技术发展前沿，DNA条形码技术得到了重点关注和发展，并在濒危珍贵木材“种”水平识别得到了应用。由于木材细胞普遍为死亡细胞；木材细胞发生死亡后，DNA会逐渐被释放的核酸酶分解成小片段分子，DNA含量也会逐渐减少。当木材经过高温干燥加工处理或长期存储，DNA降解愈加严重。因此，如何从木材细胞中有效提...
【技术保护点】
1.一种木材靶向细胞DNA提取方法，其特征在于：去除木材表面外源污染，利用细胞化学方法并结合显微技术定位和分离富集DNA的靶向细胞，并加入DNA裂解液、除杂、沉淀、溶解、纯化和巢式PCR扩增高效提取木材DNA。
【技术特征摘要】
1.一种木材靶向细胞DNA提取方法，其特征在于：去除木材表面外源污染，利用细胞化学方法并结合显微技术定位和分离富集DNA的靶向细胞，并加入DNA裂解液、除杂、沉淀、溶解、纯化和巢式PCR扩增高效提取木材DNA。2.如权利要求1所述的木材靶向细胞DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从木材组织中切取体积为V的木材样品，去除木材表面外源污染；(2)将步骤(1)得到的木材样品切取木材径切面切片，使用细胞化学方法并结合显微技术检测木材细胞中DNA的含量与分布，确定富集DNA的靶向细胞；(3)将步骤(2)得到的木材径切面切片置于倒置显微镜下分离木材靶向细胞，收集；(4)将步骤(3)得到的装有木材靶向细胞容器中加入DNA裂解液，混匀后置于水浴加热，将容器冷却，再加入除杂缓冲液，混匀后离心；(5)将步骤(4)得到的上清液转移至新容器中，向新容器中加入DNA沉淀缓冲液，用移液器混匀后离心；(6)将步骤(5)中得到的上清液弃掉，向新容器中加入清洗缓冲液，离心清洗；(7)向步骤(6)得到的沉淀有DNA的新容器中加入双蒸水，静置溶解，得到DNA提取液；(8)将步骤(7)得到的DNA作为模板，加入到反应体系中进行PCR扩增反应，得到DNA目的片段。3.如权利要求1或2所述的木材靶向细胞DNA提取方法，其特征在于：所述的靶向细胞包括但不局限于薄壁细胞；所述体积为V为7～13mm×7～13mm×7～13mm，优选为10mm×10mm×10mm；所述木材径切面切片是使用滑走式切片机切取；所述的容器为离心管；所述的步骤(4)中混匀是涡旋振荡混匀；所述的水浴加热是置于摇床台上水浴加热；所述去除木材表面外源污染包括表面切除、和/或消毒处理、和/或激光辐射净化；所述的步骤(2)中细胞化学方法检测木材细胞中DNA的含量与分布。4.如权利要求1至3任一所述的木材靶向细胞DNA提取方法，其特征在于：去除木材表面外源污染包括使用激光辐射扫描木材样品表面，然后将木材样品置于次氯酸钠浸泡，然后使用解剖刀将木材样品外表面切除；所述的步骤(2)中将木材径切面切片置于载玻片上，使用DAPI溶液将木材径切面切片染色后，再用磷酸盐缓冲液洗涤；分离木材靶向细胞，收集于离心管中；步骤(4)中，加入1.0-4.5mlDNA裂解液充分震荡混匀，50-70℃裂解5h；冷却后按照体积比加入0.5-1.0倍体积的除杂缓冲液，混匀5-20min后离心，离心速率为5000-15000rpm，离心时间为5-15min；步骤(5)中向新离心管中按照体积比加入0.5倍体积的DNA沉淀缓冲液，混匀，于2-6℃静置后离心，离心速率为5000-15000rpm，离心时间为1-15min；所述的(6)中离心速率为5000-15000r...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦立超，陆杨，殷亚方，何拓，李姗，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院木材工业研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
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