针对FGFR1的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及特异性针对FGFR1的抗体。更具体地，本发明专利技术涉及以高亲和力特异性结合并中和人、猕猴和小鼠形式的FGFR1的单克隆抗体。本发明专利技术还涉及编码所述抗体的核酸、用于表达这些核酸的载体，以及用于生产所述抗体的宿主细胞。此外，本发明专利技术涉及所述抗体在癌症的诊断和/或治疗中的用途。

Monoclonal antibody against FGFR1

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对FGFR1的单克隆抗体
本专利技术涉及特异性针对FGFR1的抗体。更具体地，本专利技术涉及单克隆抗体，且更优选地是全人单克隆抗体，其以高亲和力结合并中和FGFR1。本专利技术还涉及编码所述抗体的核酸、用于表达这些核酸的载体，以及用于生产所述抗体的宿主细胞。此外，本专利技术涉及所述抗体在癌症的诊断和/或治疗中的用途。专利技术背景成纤维细胞生长因子(FGF)(Beenken等)是一肝素结合蛋白家族(目前有23个成员)，其调节各种细胞的功能。它们参与许多生理过程，例如在发育和血管生成过程中的形态发生，对包括肿瘤和内皮细胞在内的各种类型细胞的增殖，迁移和分化有影响(Fernig和Gallagher，1994，Eswarakumar等，2005)。它们在许多病理过程中发挥着重要作用。有四种主要类型的成纤维细胞生长因子受体(FGFR)，其具有共同的结构特征：FGFR1，FGFR2，FGFR3和FGFR4。它们都具有细胞外配体结合结构域，其含有3个Ig样结构域(D1至D3；它们因此属于免疫球蛋白超家族)和独特的跨膜和细胞质区域。它们还在Ig结构域D1和D2之间具有所谓的“酸盒(acidbox)”，其显然用作FGF结合的调节剂。每个受体都可以被几个FGF结合(Ornitz等，1996)。FGFR1参与了癌症和关节炎等疾病。FGFR1基因扩增与多种癌症有关，如非小细胞肺癌，乳腺癌，胃癌和食道癌，胶质母细胞瘤，头颈部肿瘤或骨肉瘤(Katoh和Nakagama，2014，Touat等，2015)。FGFR1有几种可供选择的剪接形式，最常见的是：1)结构域D3不同的两种：它们被命名为FGFR1-IIIb和FGFR1-IIIc(Johnson和Williams，1993)和2)D1结构域的存在或不存在上不同的两种：它们被命名为FGFR1a和FGFR1b。前一取代构成被认为是受体结合结构域的一部分，因此最有可能使两种剪接形式具有不同的配体特异性，从而对FGF/FGFR途径具有不同的作用。这两种形式也被证明是差异表达的，这可能是由FGFR1介导的复杂功能的精妙控制机制的一部分。根据这些发现，FGFR1已成为癌症治疗或肥胖或糖尿病等其他疾病的有吸引力的靶点(Jiao等，2011，Wu等，2011)。在过去几年中，已经发表了几篇描述靶向FGFR的特异性抗体及其治疗用途的文献。其中，WO2005037235公开了对FGFR1-IIIb，FGFR1-IIIc和/或FGFR4有特异性的抗体。这些抗体被描述为拮抗和中和FGFR1和/或FGFR4IIIc，作为例如肥胖症或糖尿病的治疗。另一个实例是WO2012108782，其涉及特异性靶向FGFR1的结构域D2和D3的单克隆抗体，以及它们用于抑制肿瘤生长的用途。取决于预期的效果，具有激动剂作用的抗体可能是令人感兴趣的。例如，其中一些已在WO2012158704中公开。或者，靶向FGFR1的两个不同结构域的抗体可能是有趣的，例如WO2011000384中公开的抗体。使用通过仅与受体的特定结构域(例如D2和D3-IIIb和-IIIc)结合来中和受体的拮抗剂来阻断FGF/FGFR1途径应该导致肿瘤生长的抑制或减慢。然而，尽管已经报道了针对FGFR1等的不同抗体，但尚未有针对FGFR1的有效抗癌药物进入市场。考虑到癌症对公共健康的主要影响，仍然需要可用作药物的其他FGFR1拮抗剂，例如抗体。本专利技术提供了FGF/FGFR1途径的这类拮抗剂，其能够治疗与过度增殖和新血管形成有关的疾病。特别地，需要可用作药物的新型分子，特别是用于治疗癌症，例如非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，恶性胸膜间皮瘤，骨肉瘤，软组织肉瘤，胶质母细胞瘤，转移性肾细胞癌(mRCC)，乳腺癌或肝癌。
技术实现思路
本专利技术提供了特异性结合FGFR1的新型单克隆抗体，特别是完全人抗体或其活性片段。这些FGFR1抗体不仅能够结合而且能够中和(或拮抗)FGFR1。因此它们尤其能够与FGFR1+细胞结合，例如NCI-H520(ATCC编号HTB-182)，NCI-H1581(ATCC编号CRL-5878)，DMS114(ATCC编号CRL-2066)或DMS53(ATCC编号CRL-2062)。在第一个实施方式中，本专利技术描述了通过其互补决定区(CDR)序列与FGFR1结合的抗体或其部分。包含所述CDR的抗体保留了这些CDR来源的母体分子的FGFR1结合特异性。在另一个实施方式中，描述了所述抗体的构架区(FR)。所述FR将与本专利技术所述CDR组合。在另一个实施方式中，还公开了感兴趣的抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列，以及可与其组合的优选的恒定区的氨基酸序列。本专利技术的又一个实施方式由编码本专利技术抗体的多核苷酸序列，包含所述多核苷酸序列的载体和细胞系组成。还描述了用于制备根据本专利技术的抗体的方法。本专利技术的另一个实施方式是一种药物组合物，其包含一种或至少一种感兴趣的抗体。在另一个实施方式中，根据本专利技术的单克隆抗体用作FGFR1拮抗剂或简单地用作FGFR1结合剂，例如用作抗体药物偶联物。特别地，它们可用于治疗与FGFR1或FGFR1途径相关的病症，尤其是与FGFR1过表达相关的病症。因此，根据本专利技术的单克隆抗体可用于治疗自身免疫疾病或炎性疾病。具体而言，这类疾病或病症选自多发性硬化、类风湿性关节炎或舍格伦综合征。它们还可用于治疗伴有已知FGFR1扩增的癌症，例如NSCLC，SCLC，HNSCC，恶性胸膜间皮瘤，骨肉瘤，软组织肉瘤，胶质母细胞瘤，mRCC，乳腺癌或肝癌。在最后一个实施方式中，本专利技术描述了与FGFR1细胞外结构域上存在的表位结合的抗体或其部分。特别地，它们结合FGFR1的片段，包括仅来自结构域D2的氨基酸残基(例如形成mAb#A08的表位的氨基酸残基)或来自结构域D3的氨基酸残基(例如形成mAb#A05的表位的氨基酸残基)。定义-术语“免疫球蛋白”(Ig)指由一种或多种多肽组成的蛋白，所述一种或多种多肽基本由免疫球蛋白基因编码。一种形式的免疫球蛋白构成抗体的基本结构单元。该形式是四聚体且由两个相同的免疫球蛋白链的对组成，各对具有一条轻链和一条重链。轻链具有两部分：可变结构域(VL)和恒定结构域(CL)，其在轻链的上下文中也称为恒定区。重链也具有两部分：可变结构域(VH)和恒定区(CH)。在各对中，轻链和重链可变结构域共同主要负责结合抗原，且恒定区负责抗体效应功能。全长免疫球蛋白“轻链”(通常约25kDa)由N末端处的可变结构域基因(通常约110个氨基酸)和C末端处的κ或λ恒定区结构域(分别为CK和Cλ)编码。全长免疫球蛋白“重链”(通常约50kDa)类似地由可变结构域基因(通常约116个氨基酸)和后文所述其他恒定区基因之一(通常约330个氨基酸)编码。存在五种类型的哺乳动物重链，其由希腊字母命名：[α]、[δ]、[ε]、[γ]和[μ]。重链类型分别将抗体的同种型限定为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。恒定区在相同同种型的所有抗体中都相同，但在不同同种型的抗体中不同。重链[γ]、[α]和[δ]的恒定区由三个Ig恒定结构域(CH1、CH2和CH3)和一个铰链区(用于增加挠性)组成；重链[ε]和[μ]的恒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合FGFR1的单克隆抗体或其部分，其包含：a.包含H‑CDR1、H‑CDR2和H‑CDR3的重链可变结构域，其中：i.H‑CDR1包含选自SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：60的氨基酸序列或由其组成，ii.H‑CDR2包含选自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：61的氨基酸序列或由其组成，iii.H‑CDR3包含选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9至SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：62和SEQ ID NO：90的氨基酸序列或由其组成；和b.包含L‑CDR1、L‑CDR2和L‑CDR3的轻链可变结构域，其中：i.L‑CDR1包含选自SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：63的氨基酸序列或由其组成，ii.L‑CDR2包含选自SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：64的氨基酸序列或由其组成，并且iii.L‑CDR3包含选自SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：65和SEQ ID NO：66的氨基酸序列或由其组成。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.23 EP 16200304.0;2017.04.13 EP 17166540.9;1.一种结合FGFR1的单克隆抗体或其部分，其包含：a.包含H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3的重链可变结构域，其中：i.H-CDR1包含选自SEQIDNO：3、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7和SEQIDNO：60的氨基酸序列或由其组成，ii.H-CDR2包含选自SEQIDNO：4、SEQIDNO：8和SEQIDNO：61的氨基酸序列或由其组成，iii.H-CDR3包含选自SEQIDNO：5、SEQIDNO：9至SEQIDNO：17、SEQIDNO：62和SEQIDNO：90的氨基酸序列或由其组成；和b.包含L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3的轻链可变结构域，其中：i.L-CDR1包含选自SEQIDNO：18、SEQIDNO：21和SEQIDNO：63的氨基酸序列或由其组成，ii.L-CDR2包含选自SEQIDNO：19和SEQIDNO：64的氨基酸序列或由其组成，并且iii.L-CDR3包含选自SEQIDNO：20、SEQIDNO：22、SEQIDNO：23、SEQIDNO：65和SEQIDNO：66的氨基酸序列或由其组成。2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其中：a.H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3分别包含以下序列或由以下序列组成：i.氨基酸序列SEQIDNO：3，SEQIDNO：4和SEQIDNO：5，或ii.氨基酸序列SEQIDNO：60，SEQIDNO：61和SEQIDNO：62；或iii.氨基酸序列SEQIDNO：3，SEQIDNO：4和SEQIDNO：90，并且b.L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3分别包含以下序列或由以下序列组成：i.氨基酸序列SEQIDNO：18，SEQIDNO：19和SEQIDNO：20，或ii.氨基酸序列SEQIDNO：63，SEQIDNO：64和SEQIDNO：66。3.如权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中：a.所述重链可变结构域还包含构架区H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4，其中：i.H-FR1包含选自SEQIDNO：30和SEQIDNO：67的氨基酸序列或由其组成ii.H-FR2包含选自SEQIDNO：31和SEQIDNO：68的氨基酸序列或由其组成iii.H-FR3包含选自SEQIDNO：32和SEQIDNO：69的氨基酸序列或由其组成，并且iv.H-FR4包含选自SEQIDNO：33和SEQIDNO：70的氨基酸序列或由其组成；并且b.所述轻链可变结构域还包含构架区L-FR1、L-FR2、L-FR...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·伊夫兰德，C·埃斯达，X·赵，Q·安，J·叶，G·郝，L·托雷吉斯，V·苏德，D·南那曼，R·莱特尔，B·霍克，
申请(专利权)人：默克专利有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE