一种鲜食型甘薯脱毒组培苗培养方法技术

本发明专利技术公开一种鲜食型甘薯脱毒组培苗培养方法，包括以下步骤：1)选择无病毒症状的待拨尖薯苗，在34℃培养箱中培养，用复配抗病毒剂进行定时喷雾，每两天喷一次，培养7天后选择合适的茎尖进行正常的脱毒培养；2)进行甘薯茎尖的培养与检测，获得合格的脱毒组培苗；3)将检测好的组培苗，在防污染甘薯组培苗切断专用培养基中进行快速扩繁，有一定数量后，移出培养成驯化苗用于原种的繁育。本发明专利技术的培养方法使鲜食品种脱毒组培苗脱毒效率提高了40％，并可进行工厂化生产，降低成本，扩大应用，防控甘薯病毒病害，保证甘薯产业健康发展。

A method of virus-free tissue culture of fresh sweet potato

【技术实现步骤摘要】
一种鲜食型甘薯脱毒组培苗培养方法
本专利技术涉及一种鲜食型甘薯脱毒组培苗培养方法。
技术介绍
甘薯作为世界第七大粮食作物，主要分布在亚洲、非洲、拉丁美洲等地区，中国种植面积约占世界总数的80％。随着人们保健意识的增强，食用甘薯成为广大市民的首选，鲜食用甘薯的价格一直是高位稳定，薯农种植热情高涨，特别是甘薯品种普薯32、龙薯9号，以其薯形好，食味优，商品价值高，颇受薯农和广大消费者喜爱，南北薯区均有较大面积的种植，已占到鲜食甘薯种植的30％，是目前生产中高产、高效的主要品种，但该品种抗病性差，感病毒速度很快，严重影响了其产量和品质。有资料显示，该品种因病毒的减产在30％～50％。甘薯茎尖组织脱毒培养是防控甘薯病毒病的主要措施，也是获得健康种苗的主要手段，近年来，甘薯SPVD和卷叶病毒在各大薯区迅速蔓延，对甘薯生产造成严重威胁。推广脱毒种薯种苗可有效防控甘薯病毒病对生产的危害，但几个老的鲜食用品种，因其生长特性使其培养较为困难，甘薯组培技术应用多年，一直很难进行工厂化运作，其主要原因是在组织培养过程中，对条件要求较高，脱毒效率低、较易产生污染，一旦污染所有工作将需从头开始，因此，风险大，对操作者要求高，使得甘薯脱毒组培一直没有工厂化，本研究就是要解决其组织培养中脱毒效率低和高污染问题。脱毒效率提高的方法有很多，但不一定所有品种均有效，目前生产中影响严重的甘薯SPVD和卷叶病毒，针对不同品种设定不同提高脱毒效率的方法，是十分心要的。植物病菌的抗菌剂有很多种，但都不能直接进行高压消毒，否则抗菌剂会失效，所以对操作方法和抗菌效果都产生很大影响，切断快繁是甘薯脱毒组培中让脱毒试管苗快速增殖的方法，也是操作中最易受到污染的步骤，若在培养基中加入一种物质，既能很好的防污染，又能直接进行高压消毒，这样组织培养中快繁风险就小很多，但抗菌物质的加入量，会直接影响组培苗的生长，所以研究最适防控药剂，及确定用量的多少，以达到安全、省工、高效的目的，对脱毒组培工厂化生产提供可能和安全保障。植培灵是一种组培实验中为防污染所采用的杀菌剂，它的厂方推荐浓度是2.5ml/L，但是经实际操作后发现该浓度用于甘薯组培时，会出现一定概率的黄化，死苗等现象，给组培苗繁育工作造成很大风险，为了获得可在甘薯脱毒组培中应用的最适方法和浓度，本专利技术开展了一系列试验，最终确定脱毒组培苗切断的专用培养基配方。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的问题，本专利技术提供一种鲜食型甘薯脱毒组培苗培养方法。为了实现上述目的，本专利技术采用的一种鲜食型甘薯脱毒组培苗培养方法，包括以下步骤：1)选择无病毒症状的待拨尖薯苗，在34℃培养箱中培养，用复配抗病毒剂进行定时喷雾，每两天喷一次，培养7天后选择合适的茎尖进行正常的脱毒培养；2)进行甘薯茎尖的培养与检测，获得合格的脱毒组培苗；3)将检测好的组培苗，在高效防污染培养基中进行快速扩繁，有一定数量后，移出培养成驯化苗用于原原种的繁育。作为改进，所述步骤1)中的复配抗病毒剂采用三氮唑与吗啉胍复配。作为改进，所述步骤3)中的高效防污染培养基的配方包括MS、植培灵1.0ml/L、蔗糖30g/L和琼脂7.0g/L。作为改进，所述步骤1)中的薯苗采用普薯32或龙薯9号。本专利技术的培养方法解决了国内目前主要鲜食甘薯品种普薯32和龙薯9号在甘薯脱毒组织培养中脱毒效率低和切断快繁时高污染率的问题，使鲜食品种脱毒组培苗脱毒效率提高了40％，并可进行工厂化生产，降低成本，扩大应用，防控甘薯病毒病害，保证甘薯产业健康发展。本专利技术根据生产中的实际情况，确定可行技术路线，从促进生长的温度和钝化病毒的药剂筛选入手，确定了提高脱毒效率的方法，同时进行能用于高压消毒的药剂筛选，筛选到药剂后，确定最佳浓度，最后获得高效防污染配方，在生产中应用效果好。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面对本专利技术进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限制本专利技术的范围。实施例1一种鲜食型甘薯脱毒组培苗培养方法，包括以下步骤：由于组织培养是利用植物生长点病毒含量低的原理进行脱毒培养，但有的品种生长点生长慢，病毒传导快，脱毒效率低，本专利技术利用高温促进生长点快速生长，再利用筛选的抗病毒剂进行植株体内病毒的钝化，限制病毒传导速度，以达到提高脱毒效率的目的；具体的是，选择无病毒症状的待拨尖薯苗，在34℃培养箱中高温培养，并用筛选出的特殊复配抗病毒剂进行定时喷雾，培养7天后再选择合适的茎尖进行正常的脱毒培养；其中，最适温度和抗病毒剂的筛选过程如下：1)材料与方法1.1)设计温度与参试药剂：设定温度32℃、34℃、36℃、38℃，对照为28℃；参试药剂：盐酸吗啉双胍、三氮唑与吗啉胍复配(以各药剂的最适浓度，按1:1的比例复配)、4％嘧肽霉素250倍、病毒灵与丙硫咪唑复配(以各药剂的最适浓度，按1:1的比例复配)，对照为水；1.2)试验材料：无症龙薯9号、普薯32大田苗各100株；1.3)具体步骤：a、将15cm长(到心叶处)的薯苗分别栽种于花盆中，每盆栽种5株，每品种栽种20盆，待用；b、将光照培养箱分别调到28℃、32℃、34℃、36℃、38℃，每个温度下放置5盆，配制好的抗病毒剂每天喷施1次(喷施量以每个植株叶面湿润但不滴液为准)，观察其生长势和植株表现，第8天，调查植株的株高，在显微镜下观察生长点情况，确定最适温度；c、确定的最适温度条件下，薯苗再经过7天病毒钝化喷施，取不同药剂处理的植株茎尖，在超净工作台上对茎尖进行消毒(消毒方法：剪取2cm～3cm的顶芽，剪去外叶，自来水冲洗20min～30min，在超净台内先用75％乙醇浸泡40s，再用2％次氯酸钠溶液浸泡5min，用无菌水冲洗4次～5次)；d、茎尖剥离与接种(在超净工作台内将处理好的茎尖在40倍双目体视解剖镜下，用镊子和解剖针或手术刀剥离茎尖直至露出半圆形光滑生长点，用手术刀或解剖针从0.1～0.3mm处切下只含1～2个叶原基的微茎尖，迅速接种于茎尖培养基上，进行离体培养，用酒精灯烤干容器口并封口，在容器上注明编号、品种名称、接种时间)；培养成苗(甘薯组织培养室最适温度保持在26℃～30℃，相对湿度应≤70％，光照时间是12h/d～16h/d，光照强度2000lx-3000lx)；病毒分子检测(参照农业行业标准)。试验结果如下表1。表1不同温度对甘薯品种生长与成苗率影响分析表1可知，在不同温度培养条件下，以34℃-36℃下培养薯苗生长势最好，茎尖最易拨尖和培养成苗；38℃生长快，但茎尖拨尖的效果不理想，成苗率低；低于34℃生长慢，达不到催长的目的。1.4)选用盐酸吗啉双胍、三氮唑与吗啉胍复配、4％嘧肽霉素、病毒灵与丙硫咪唑复配，四种药剂分别对薯苗进行喷施，茎尖培养后进行病毒检测，具体如下表2所示。表2不同药剂对甘薯品种生长与成苗率影响结合表2的结果可知：四种药剂都有一定的效果，但从薯苗生长势、茎尖成苗率、病毒检出率几个指标看，34℃条件下，三氮唑与吗啉胍复配(以各药剂的最适浓度，按1:1的比例复配)喷施的脱毒效果最好。将检测好的组培苗，在防污染甘薯组培苗切断专用培养基中进行快速扩繁，有一定数量后，移出培养成驯化苗用于原原种的繁育；其中，培养基筛选的具体步骤如下本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鲜食型甘薯脱毒组培苗培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)选择无病毒症状的待拨尖薯苗，在34℃培养箱中培养，用复配抗病毒剂进行定时喷雾，每两天喷一次，培养7天后选择合适的茎尖进行正常的脱毒培养；2)进行甘薯茎尖的培养与检测，获得合格的脱毒组培苗；3)将检测好的组培苗，在高效防污染培养基中进行快速扩繁，有一定数量后，移出培养成驯化苗用于原原种的繁育。

【技术特征摘要】
1.一种鲜食型甘薯脱毒组培苗培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)选择无病毒症状的待拨尖薯苗，在34℃培养箱中培养，用复配抗病毒剂进行定时喷雾，每两天喷一次，培养7天后选择合适的茎尖进行正常的脱毒培养；2)进行甘薯茎尖的培养与检测，获得合格的脱毒组培苗；3)将检测好的组培苗，在高效防污染培养基中进行快速扩繁，有一定数量后，移出培养成驯化苗用于原原种的繁育。2.根据权利要求1所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢睿寰，钱济龙，张勍，孙井康，谢逸萍，
申请(专利权)人：徐州中农薯科农业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32