一种具有预处理功能非宫颈脱落细胞保存液及应用制造技术

技术编号:22354362 阅读:48 留言:0更新日期:2019-10-23 01:35
本发明专利技术涉及到一种具有预处理功能非宫颈脱落细胞保存液及应用,具体地涉及一种含有细胞固定剂、清洁液、渗透压维持剂、微生物灭活剂、细胞裂解成分的非宫颈脱落细胞保存液。所述的保存液能够较好地保存非宫颈脱落细胞,包括粘液样本、体液样本、穿刺与刷取样本等,保护细胞的完整性与固定性。同时可使细胞的各部分易于着色,适于观察、长期保存和分析,保存的细胞也可适用于制作细胞蜡块、免疫组化检测等。

A non cervical exfoliated cell preservation solution with pretreatment function and its application

【技术实现步骤摘要】
一种具有预处理功能非宫颈脱落细胞保存液及应用
本专利技术涉及一种具有预处理功能非宫颈脱落细胞保存液及应用。
技术介绍
保存液的作用在于保护脱落细胞的完整性与固定性,保存细胞的目的在于把细胞的原有结构尽可能完整地保存下来,凝固或沉淀细胞内的成分,避免细胞发生降解、自溶、腐败和变形等,使细胞内的各种酶失去活性,防止细胞的各种分子变性、解离,并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。同时可使细胞的各部分易于着色,适于观察、长期保存和分析。传统的非妇科样本保存不稳定甚至不经保存液保存直接进行涂片,样本利用率只有20%左右,制片质量不稳定,细胞分布不均与,存在较多干扰判读的物质。非妇科样本保存需要较强渗透力的固定剂的作用,使细胞内的成分凝固或沉淀。还需要维持细胞的渗透压,细胞内液由小分子的水、无机离子,中等分子的脂类、氨基酸、核苷酸,大分子的蛋白质、核酸、脂蛋白、多糖等组成。细胞内液的阳离子主要是K+,其含量占细胞内液总阳离子量的90%以上,还有少量的钠离子和镁离子等,阴离子以HPO42-、H2PO4-和蛋白质为主,其他阴离子含量都很少。这些离子对于维持细胞内液渗透压的稳定和电中性起着重要作用,选择合适的渗透压维持剂也很重要。对于非妇科样本的保存最关键的是非有效诊断成分的消化与分解沉淀等,避免干扰诊断判读结果。目前大部分非宫颈样本的处理面临的是直接制作涂片,虽然细胞的形态保存较好但是背景干扰因素非常多,甚至直接影响阅片诊断;部分医技人员用单一的固定液处理后制片但是无法兼顾到形态的保存以及粘液与红细胞的崩解,导致制片质量不稳定,细胞分布不均与,存在较多干扰判读的物质,需要制做多张涂片甚至多次采样。时间与耗材成本较大,并且敏感性与特异性较低。市场上的非妇科样本保存液效果好的较少并且需要分多步处理清洗,主要有以下干扰因素:1.粘液样本中存在的粘液影响细胞沉淀与吸取,容易造成假阴性;2.血性样本处理不彻底,红细胞干扰判读;3.细胞溶解或膨胀,细胞保存效果较差,容易导致误判;4.细胞重叠与抱团现象较多,制片效果不能均匀平铺。此外,临床较多采用进口保存液,成本高,不利于普及与推广。本专利技术旨在解决非宫颈细胞样本存在的问题,从多方面提升与优化非宫颈细胞保存液的性能,并且有利于推广与普及。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有预处理功能的非宫颈脱落细胞保存液,能够较好地保存非宫颈脱落细胞,保护细胞的完整性与固定性,避免细胞固缩、溶解和膨胀;粘液处理能力与血细胞崩解能力强,分解红细胞,分散粘液,清除干扰成分,背景清晰,便于阅片诊断。本专利技术提供的细胞保存液的特征在于含有细胞固定剂、清洁液、渗透压维持剂、微生物灭活剂、细胞裂解成分。各组分与含量百分比:固定剂20-60%,清洁液20-45%,渗透压维持剂1-25%,微生物灭火剂1-15%,细胞崩解成分0.5-8%。其中,上述细胞固定剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中至少一种;清洁液为Tris缓冲盐溶液、磷酸缓冲盐溶液、柠檬酸缓冲溶液中至少一种;渗透压维持剂为氯化钠、氯化钾中至少一种;微生物灭活剂为甲醛、β-丙内酯中至少一种;细胞崩解成分为二硫苏糖醇、三羟甲基氨基甲烷、红细胞裂解液、碳酸氢钠、磷酸三钠、冰醋酸中至少一种。本专利技术提供的细胞裂解成分,粘液处理能力与血细胞崩解能力强,能有效分解红细胞、分散粘液以及清除干扰成分,使得制片背景清晰,便于阅片诊断。本专利技术提供一种非宫颈脱落细胞保存液应用与制片方法,使用流程简单便捷,步骤如下:1)取适量所述保存液置于保存液瓶内备用;2)送检样本在50ml以上的,进行样本浓缩,取样后2-3次离心去除上清液后置于保存液瓶内,样本量在50ml以下的取样后直接置于保存液瓶内;3)振荡5-10min后转移至试管进行2000R/min离心5-10min;4)去除上清液,缓冲液调节细胞浓度;5)吸取细胞悬液1-1.5ml至制片仓,自然沉降或离心甩片;6)取出玻片进行染色流程,镜下检测判读结果,通过人工观察或数字扫描仪扫描分析检查细胞形态。附图说明图1:经过本专利技术的保存液保存后制片,异常细胞镜检图片。图2:经过本专利技术的保存液保存后制片,正常细胞镜检图片。图3:实施例一镜检细胞图片。图4:实施例二镜检细胞图片。图5:实施例三镜检细胞图片。本专利技术提供的保存液具有预处理功能,可以在制片之前完成细胞的固定,粘液消化处理、红细胞崩解,细胞舒展分散保存,节约时间与耗材成本,提高敏感性与特异性。具体实施方式以下是本专利技术的具体实施例,但是专利技术保护的范围不仅仅限于这些实施例,在专利技术基础上构思的或者等同替代的均在本专利技术的保护范围内。实施例一:本实施例中的保存液包含如下组分:甲醇45%,Tris缓冲盐溶液39%,氯化钠5%,甲醛溶液2%,二硫苏糖醇2%,冰醋酸2%,红细胞裂解液5%。本实施例中细胞保存液应用与制片方法,使用流程如下:1.取15ml保存液置于50ml保存液瓶内备用;2.送检胸水样本250ml,2次离心去除上清液后置于保存液瓶内;3.振荡5min后转移至试管进行2000R/min离心5min;4.去除上清液,缓冲液调节为4ml细胞悬液;5.吸取细胞悬液1ml至制片仓,离心甩片;6.取出玻片进行HE染色流程,染色后封片镜下检测判读细胞形态。实施效果:细胞保存完整,无细胞固缩、溶解和膨胀,细胞平铺均匀,无重叠,背景清晰干净,细胞核大深染,呈异型,诊断为异常细胞。实施例二:本实施例中的保存液包含如下组分:甲醇50%,磷酸缓冲盐溶液26%,氯化钠15%,β-丙内酯5.5%,冰醋酸1.5%,红细胞裂解液2%。本实施例中细胞保存液应用与制片方法,使用流程如下:1.取15ml保存液置于50ml保存液瓶内备用;2.送检痰液样本置于上述保存液瓶内;3.振荡8min后转移至离心管进行2000R/min离心6min;4.去除上清液,缓冲液调节为4ml细胞悬液;5.吸取细胞悬液1.2ml至制片仓,自然沉降制片;6.取出玻片进行巴氏细胞学染色流程,染色后封片镜下检测判读细胞形态。实施效果:细胞保存完整,无细胞固缩、溶解和膨胀,细胞平铺均匀,无重叠,背景清晰干净,细胞核浆比例正常,无深染,无异型,诊断为正常细胞。实施例三:本实施例中的保存液包含如下组分:甲醇30%,乙醇20%,Tris缓冲盐溶液20%,磷酸缓冲盐溶液23%,氯化钠2%,甲醛1%,冰醋酸1%,红细胞裂解液3%。本实施例中细胞保存液应用与制片方法,使用流程如下:1.取15ml保存液置于50ml保存瓶内备用;2.甲状腺穿刺样本置于上述保存液瓶内;3.振荡6min后转移至离心管进行2000R/min离心5min;4.去除上清液,缓冲液调节为4ml细胞悬液;5.吸取细胞悬液0.5ml至制片仓,自然沉降制片;6.取出玻片进行HE染色流程,染色后封片镜下检测判读细胞形态。实施效果:细胞保存完整,无细胞固缩、溶解和膨胀,细胞平铺均匀,无重叠,背景清晰干净,细胞核大深染,呈异型,诊断为异常细胞。本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种具有预处理功能非宫颈脱落细胞保存液及应用,其特征在于含有细胞固定剂、清洁液、渗透压维持剂、微生物灭活剂和细胞裂解成分。

【技术特征摘要】
1.一种具有预处理功能非宫颈脱落细胞保存液及应用,其特征在于含有细胞固定剂、清洁液、渗透压维持剂、微生物灭活剂和细胞裂解成分。2.根据权利要求1所述的具有预处理功能非宫颈脱落细胞保存液,其特征在于包括如下组分与含量百分比:细胞固定剂20-60%,清洁液20-45%,渗透压维持剂1-25%,微生物灭活剂1-15%,细胞崩解成分0.5-8%。3.根据权利要求1和权利要求2所述的具有预处理功能非宫颈脱落细胞保存液,其特征在于所述的细胞固定剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中至少一种;所述的清洁液为Tris缓冲盐溶液、磷酸缓冲盐溶液、柠檬酸缓冲溶液中至少一种;所述的渗透压维持剂为氯化钠、氯化钾中至少...

【专利技术属性】
技术研发人员:姚斌左露露
申请(专利权)人:南京福怡科技发展股份有限公司
类型:发明
国别省市:江苏,32

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