用于分析完整蛋白质、抗体、抗体亚基和抗体药物缀合物的装置和方法制造方法及图纸

本公开涉及用于分析生物混合物中的完整抗体、抗体亚基、抗体药物缀合物亚基、抗体药物缀合物和完整蛋白质的装置和方法。

Devices and methods for the analysis of complete proteins, antibodies, antibody subunits and antibody drug conjugates

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于分析完整蛋白质、抗体、抗体亚基和抗体药物缀合物的装置和方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年2月28日提交的标题为“DevicesandMethodsforAnalyzingIntactProteins，Antibodies，AntibodySubunits，andAntibodyDrugConjugates”的美国临时申请No.62/464,682的权益和优先权，该申请的全部内容以引用方式并人本文。
本专利技术涉及用于分析生物混合物中的完整抗体、双特异性抗体、抗体亚基、抗体药物缀合物亚基、抗体药物缀合物和完整蛋白质的装置和方法。
技术介绍
与完整抗体分析相关的最大障碍之一是使用电喷雾电离(ESI)质谱的相对电离效率。使用现有技术，诸如液相色谱与质谱联用(LC-MS)，可容易地测量出良好的电离肽和小分子，精确至1pg/mL(～1pM)。相比之下，现有技术可测量在纯溶液中浓度仅精确至0.1μg/mL(～60nM)的去糖基化抗体。灵敏度的这种近似三个数量级的差异主要是由于经由电喷雾电离完整蛋白质的挑战，该操作由于完整抗体和小分子之间的分子量差异而明显更具挑战性。蛋白质的分子量也对电荷状态分布(CSD)的宽度具有显著影响。随着分子量的增加，CSD的宽度也增大，这通过在大量离子上分离离子电流导致了信噪比(S∶N)的减小，(Compton，P.D.；Zamdborg，L.；Thomas，P.M.；Kelleher，N.L.Anal.Chem.2011，83，6868-6874)。因此，开发能够使CSD变窄并且增加电荷状态的技术将进一步有助于提高分析完整蛋白质的灵敏度。
技术实现思路
本专利技术涉及用于分析生物混合物中的完整抗体、抗体亚基、抗体药物缀合物亚基、抗体药物缀合物和完整蛋白质的装置和方法，与常规高流量分析LC-MS相比，该装置和方法提供显著提高的灵敏度、线性度和分辨率。因此，本文提供了用于分析生物混合物的组分的方法。该方法的一个实施方案包括至少三个步骤。一个步骤涉及提供包含完整抗体或其片段、抗体药物缀合物或其亚基，或完整蛋白质中的一种或多种的样品。另一个步骤涉及将该样品暴露于包括捕集器的第一维度。另一个步骤涉及将该样品暴露于包括固定相的第二维度。然后分离该样品的组分。随后，确定样品中每种组分的质荷比。可选地，该方法可还包括另一个步骤，其中一些分离在捕集器上发生，使得当将样品加载到捕集器上时，小的离子被去除出样品(“脱盐”)。当样品从捕集器洗脱至第二维度时，该任选的步骤在捕集器上发生，使得进一步分离发生。捕集器的化学性质和第二维度的化学性质必须适当地相匹配以提供最佳峰形。该方法的另一个实施方案包括至少四个步骤。一个步骤涉及提供包含完整抗体或其片段、抗体药物缀合物或其亚基，或完整蛋白质中的一种或多种的样品。另一个步骤涉及将该样品暴露于第一维度分离。另一个步骤涉及将该样品暴露于第二维度分离。另一个步骤涉及使用柱后补偿(PCA)微流量装置将增荷(supercharging)试剂或消荷(decharging)试剂添加到样品中。然后分离该样品的组分。随后，确定样品中每种组分的质荷比。在一些实施方案中，微流量装置包括基于微流体的系统。另选地，微流量装置可包括基于毛细管的系统。本文还提供了包括至少四个部件的装置。一个部件是第一维度分离器，诸如，例如捕集器。另一个部件是第二维度分离器，诸如，例如固定相。另一个部件是柱后补偿(PCA)微流量装置。另一个部件是质谱仪。在一些实施方案中，该装置还包括紫外/可见光(UV/Vis)光谱仪。在其他实施方案中，质谱仪是四极杆飞行时间(QToF)质谱仪。在具体实施方案中，微流量装置包括基于微流体的系统。另选地，微流量装置可包括基于毛细管的系统。本文提供的方法和装置能够使用二维微量级分离来离析、纯化、分析和检测生物混合物中的完整抗体、抗体亚基、抗体药物缀合物亚基、抗体药物缀合物和完整蛋白质。该技术涉及用于分析生物混合物的组分的方法。该方法包括(i)提供包含完整抗体或其片段、抗体药物缀合物或其亚基或完整蛋白质中的一种或多种的样品；(ii)将该样品暴露于包括捕集器的第一维度；(iii)将该样品暴露于包括固定相的第二维度；(iv)分离该样品的组分；以及(v)确定样品中每种组分的质荷比。该方法可还包括检测样品中每种组分的步骤。紫外线(UV)和/或可见光光谱法可用于检测样品中的每种组分。可在将样品暴露于第二维度之前执行检测步骤。可在将样品暴露于第一维度和将样品暴露于第二维度之间执行检测步骤。该方法可还包括将增荷试剂添加到样品中。该增荷试剂可选自甲酰胺、甲氧基乙醇、甘油和间硝基苄醇(m-NBA)。增荷试剂可以是甘油。在将样品暴露于第二维度之后，可将增荷试剂添加到样品中。可在将样品暴露于第二维度和确定样品中每种组分的质荷比之间，将增荷试剂添加到样品中。可使用微流量装置将增荷试剂添加到样品中。该方法可还包括将消荷试剂添加到样品中。消荷试剂可以是咪唑。在将样品暴露于第二维度之后，可将消荷试剂添加到样品中。可在将样品暴露于第二维度和确定样品中每种组分的质荷比之间，将消荷试剂添加到样品中。可使用微流量装置将消荷试剂添加到样品中。微流量装置可以是柱后补偿(PCA)微流量装置。微流量装置可包括基于微流体的系统。微流量装置可包括基于毛细管的系统。该技术涉及用于分析生物混合物的组分的方法。该方法包括：(i)提供包含完整抗体或其片段、抗体药物缀合物或其亚基或完整蛋白质中的一种或多种的样品；(ii)将该样品暴露于第一维度分离；(ii)将该样品暴露于第二维度分离；(iv)使用柱后补偿(PCA)微流量装置将增荷试剂或消荷试剂添加到样品中；(v)分离该样品的组分；以及(vi)确定样品中每种组分的质荷比。第一维度分离可包括在第一固定相上捕集样品的一部分。第二维度分离可包括将样品暴露于第二固定相。该方法可还包括检测样品中每种组分的步骤。紫外线(UV)和/或可见光光谱法可用于检测样品中的每种组分。可在将样品暴露于第二维度之前执行检测步骤。可在将样品暴露于第一维度和将样品暴露于第二维度之间执行检测步骤。该增荷试剂可选自甲酰胺、甲氧基乙醇、甘油和间硝基苄醇(m-NBA)。增荷试剂可以是甘油。消荷试剂可以是咪唑。微流量装置可包括基于微流体的系统。微流量装置可包括基于毛细管的系统。样品可以是生物样品。生物样品可来源于受试者。受试者可以是人类受试者。生物样品可选自血液或来源于血液、组织、尿液、唾液、淋巴液和活检。生物样品可以是血液或来源于血液。生物样品可以是血浆或血清。该技术涉及一种装置，其包括(i)包括捕集器的第一维度分离器；包括固定相的第二维度分离器；柱后补偿(PCA)微流量装置；和质谱仪。该装置可包括紫外/可见(UV/Vis)光谱仪。质谱仪可以是四极杆飞行时间(QToF)质谱仪。微流量装置可包括基于微流体的系统。微流量装置可包括基于毛细管的系统。本文所述的方法和装置的上述实施方案具有一个或多个优点。例如，与常规高流量分析LC-MS相比，某些实施方案提供显著提高的灵敏度、线性度和分辨率。在一些实施方案中，通过结合两个不同的色谱维度、提供在每个维度中的选择性地调谐的能力并且从而允许控制重聚集功能来实现一个或多个优点。在某些实施方案中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于分析生物混合物的组分的方法，所述方法包括：(i)提供包含完整抗体或其片段、抗体药物缀合物或其亚基或完整蛋白质中的一种或多种的样品；(ii)将所述样品暴露于包括捕集器的第一维度；(iii)将所述样品暴露于包括固定相的第二维度；(iv)分离所述样品的所述组分；以及(v)确定所述样品中所述组分中的每种组分的质荷比。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.02.28 US 62/4646821.一种用于分析生物混合物的组分的方法，所述方法包括：(i)提供包含完整抗体或其片段、抗体药物缀合物或其亚基或完整蛋白质中的一种或多种的样品；(ii)将所述样品暴露于包括捕集器的第一维度；(iii)将所述样品暴露于包括固定相的第二维度；(iv)分离所述样品的所述组分；以及(v)确定所述样品中所述组分中的每种组分的质荷比。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括检测所述样品中所述组分中的每种组分的步骤。3.根据权利要求2所述的方法，其中紫外线(UV)和/或可见光光谱法用于检测所述样品中的每种所述组分。4.根据权利要求2所述的方法，其中在将所述样品暴露于所述第二维度之前执行所述检测步骤。5.根据权利要求4所述的方法，其中在将所述样品暴露于所述第一维度和将所述样品暴露于所述第二维度之间执行所述检测步骤。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括将增荷试剂添加到所述样品中。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述增荷试剂选自甲酰胺、甲氧基乙醇、甘油和间硝基苄醇(m-NBA)。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述增荷试剂为甘油。...

【专利技术属性】
技术研发人员：GT罗曼，JP墨菲，
申请(专利权)人：沃特世科技公司，
类型：发明
国别省市：美国,US