使用抗人BNP片段(4-32)抗体的免疫测定方法技术

本发明专利技术的目的在于，仅通过免疫测定，对特定的人BNP片段进行检测，并测定人BNP片段比例，从而容易地提供对心脏疾病的诊断、预测有用的信息。为此目的，本发明专利技术提供一种使用目前为止未被关注的人BNP片段(4‑32)特异性抗体的测定方法。提供一种对样品中的人BNP片段(4‑32)的免疫测定方法，其特征在于，使用与人BNP片段(4‑32)反应且不与人全长BNP(1‑32)、人BNP片段(3‑32)及人BNP片段(5‑32)反应的抗体。还提供一种测定方法，其中该抗体为与含有人BNP片段(4‑32)的N末端的位点反应的抗体和与人BNP片段(4‑10)反应的抗体。

Immunoassay using antibodies against human BNP fragment (4-32)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用抗人BNP片段(4-32)抗体的免疫测定方法
本专利技术涉及利用免疫反应的、人BNP片段的测定方法和测定试剂。更具体而言，涉及使用抗人BNP片段(4-32)特异性抗体的人BNP片段的测定方法和测定试剂。
技术介绍
BNP是脑利钠肽(brainnatriureticpeptide)的缩写，是由在心脏中合成并分泌的32个氨基酸组成的激素。已知当心脏负荷增加或心肌肥大发生时，BNP在血液中的浓度会增加。目前，BNP作为心力衰竭的生化标志物在临床现场中被广泛使用，BNP浓度的测定在心脏病的筛查、心力衰竭严重程度的评价、心力衰竭的治疗效果的判定，或者作为心力衰竭患者的预后预测指标方面被认为是有用的。专利文献1、非专利文献1中公开了通过测定血液中的BNP来诊断心肌缺血状态的方法。具体而言，用特异性抗体对血液样品中的BNP及其处理产物(人BNP片段(3-32)、人BNP片段(4-32)、人BNP片段(5-32)等)进行选择性浓缩，之后，通过质谱仪检测每种处理产物，以确定特定的处理产物的比例与再狭窄的有无之间的关系。另外，专利文献2中公开了一种使用人BNP片段(3-32)特异性的抗体来对人BNP片段(3-32)进行特异性测定的方法，该抗体具有与人BNP片段(3-32)反应而不与全长的人BNP及人proBNP反应的特征。并且该方法暗示了在诸如高血压、心脏功能/肾功能的诊断等以人BNP(3-32)的增减为指标的疾病诊断方面的有用性。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第WO2010/023749号小册子专利文献2：日本特开2014-91719号公报非专利文献非专利文献1：ClinicalChemistry59：9(2013)，p1-8
技术实现思路
专利技术所要解决的问题在专利文献1、非专利文献1的方法中，使用与人BNP(1-32)、BNP(3-32)、BNP(4-32)、BNP(5-32)中的任一种均反应的抗体，对样品中的BNP片段进行浓缩，然后进行质谱分析，根据所得MS谱的信号强度比计算各自的丰度比。因此，在该方法中，由于使用质谱仪分别检测每个BNP片段，因此装置配置变大，操作复杂，不适合快速处理大量样品。在专利文献2的方法中，公开了一种与人BNP片段(3-32)反应而不与全长的人BNP及人proBNP反应的抗体。然而，没有公开该抗体是否与其他片段即人BNP(4-32)和BNP(5-32)反应，也就是说没有公开是否仅与人BNP片段中的人BNP片段(3-32)特异性反应。另外，既没有记载也没有暗示能够特异性检测人BNP片段(3-32)以外的片段的抗体。如上所述，到目前为止，尚没有建立仅通过免疫分析就能够测定BNP和BNP片段的方法。本专利技术的目的在于，仅通过免疫分析，对各种人BNP片段进行检测，并测定人BNP片段比例，从而容易地提供对心脏疾病的诊断、预测有用的信息，以提供一种能够通过特异性抗体来测定目前为止未被关注的人BNP片段(4-32)的方法为课题。用于解决问题的手段为了解决上述问题，本专利技术的专利技术人努力进行了能够特异性地仅检测人BNP片段(4-32)的抗体的探索，结果是首次成功获得了多种该抗体，并使用该抗体验证了对样品中的人BNP片段(4-32)的特异性检测，从而完成了本专利技术。即，本专利技术具有以下结构。<1>样品中的人BNP片段(4-32)的免疫测定方法，其特征在于，该免疫测定方法使用与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体。<2><1>所述的免疫测定方法，其中，与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体为与含有人BNP片段(4-32)的N末端的位点反应的抗体。<3><1>或<2>所述的免疫测定方法，其中，与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体为与人BNP片段(4-10)反应的抗体。<4><1>至<3>中任一项所述的免疫测定方法，其中，与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体为单克隆抗体。<5>一种人BNP片段(4-32)的免疫测定试剂，其特征在于，该免疫测定试剂使用与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体。<6><5>所述的免疫测定试剂，其中，与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体为与含有人BNP片段(4-32)的N末端的位点反应的抗体。<7><5>或<6>所述的免疫测定试剂，其中，与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体为与人BNP片段(4-10)反应的抗体。<8><5>至<7>中任一项所述的免疫测定试剂，其中，与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体为单克隆抗体。<9>一种抗体，其与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应。<10><9>所述的抗体，其与含有人BNP片段(4-32)的N末端的位点反应。<11><9>或<10>所述的抗体，其与人BNP片段(4-10)反应。<12><9>至<11>中任一项所述的抗体，其为单克隆抗体。专利技术效果根据本专利技术，能够特异性地免疫学测定样品中的人BNP片段(4-32)。因此，即使在含有BNP及各种人BNP片段的样品中，也能够仅对人BNP片段(4-32)进行免疫学测定。另外，通过与本专利技术的抗体以外的能够特异性检测各片段的抗体进行组合，可以免疫学测定各片段的丰度比，能够有助于实现以该比率为指标的疾病的预测。附图说明图1是示出通过竞争ELISA法确认本专利技术的三种抗体与各浓度的合成肽(BNP(1-32)、BNP(3-10)、BNP(4-10)、BNP(5-10))的反应性的结果的图。1A：96201抗体，1B：96204抗体，1C：96207抗体图2是示出通过蛋白质印迹法(Westernblotting)确认各抗体与各合成肽((1)BNP(1-32)、(2)BNP(4-32)、BNP(5-32))的反应性的结果的电泳图。2A：本专利技术的三种抗体(96201抗体、96204抗体、96207抗体)；2B：识别人BNP的环状位点的抗体(A)；2C：作为阴性对照的IgG抗体(B)图3是示出通过夹心ELISA法确认各抗体的组合对人BNP(1-32)及人B本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.样品中的人BNP片段(4‑32)的免疫测定方法，其特征在于，使用与人BNP片段(4‑32)反应且不与人全长BNP(1‑32)、人BNP片段(3‑32)及人BNP片段(5‑32)反应的抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.18 JP 2016-2042851.样品中的人BNP片段(4-32)的免疫测定方法，其特征在于，使用与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体。2.根据权利要求1所述的免疫测定方法，其中，与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体为与含有人BNP片段(4-32)的N末端的位点反应的抗体。3.根据权利要求1或2所述的免疫测定方法，其中，与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体为与人BNP片段(4-10)反应的抗体。4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫测定方法，其中，与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、人BNP片段(3-32)及人BNP片段(5-32)反应的抗体为单克隆抗体。5.人BNP片段(4-32)的免疫测定试剂，其特征在于，使用与人BNP片段(4-32)反应且不与人全长BNP(1-32)、...

【专利技术属性】
技术研发人员：清水知，宫崎修，铃木亨，
申请(专利权)人：积水医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP