试样是否含有尾孢菌属或者假尾孢菌属的菌的判定方法技术

本发明专利技术提供判定试样是否含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方的方法。本发明专利技术的方法对将所述试样添加在含有N,N,N',N'‑四甲基‑1,4‑苯二胺和5‑(2,4‑二磺基苯基)‑3‑(2‑甲氧基‑4‑硝基苯基)‑2‑(4‑硝基苯基)‑2H‑四唑鎓的水溶液(pH值：5.1～6.5)中而得的混合物，照射具有400nm～500nm的波长的光和具有500nm～800nm的波长的光，分别测定第1吸光度Ay和第2吸光度Ax，在满足Ay/Ax≥1.5，或者混合物为橙色的情况下，判定试样含有菌。

Determination method of whether the sample contains coccidiosis or pseudococcidiosis

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】试样是否含有尾孢菌属或者假尾孢菌属的菌的判定方法
本专利技术涉及判定试样是否含有尾孢菌属或者假尾孢菌属的菌的方法。
技术介绍
尾孢菌属的菌引发叶斑病。非专利文献1公开了通过免疫学方法在分子水平上迅速检测豆科植物中的尾孢菌属的菌的方法。现有技术文献非专利文献非专利文献1:MariaGabrielaLatorreRapelaet.al.“EarlyDetectionofCercosporaSpeciesinSoybeanPlants:ImmunologicandMolecularMethods”,AmericanJournalofPlantSciences,2015,6,2939-2948
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的目的是提供判定试样是否含有尾孢菌属或者假尾孢菌属的菌的新的方法。用于解决课题的手段本专利技术提供判定试样是否含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方的方法。本专利技术的方法具备以下工序：工序(a)，将所述试样添加到含有N,N,N’,N’-四甲基-1,4-苯二胺和5-(2,4-二磺基苯基)-3-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-四唑鎓的水溶液中，得到混合物，其中，所述水溶液具有5.1～6.5的pH值，工序(b)，对所述混合物照射具有400纳米～500纳米的波长的光，测定所述混合物的第1吸光度Ay，工序(c)，对所述混合物照射具有超过500纳米且为800纳米以下的波长的光，测定所述混合物的第2吸光度Ax，和工序(d)在满足以下算式(I)的情况下，判定所述试样含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方，Ay/Ax≥1.5(I)。取代工序(b)～工序(d)，本专利技术的方法具备工序(e)，在所述混合物为橙色的情况下，判定所述试样含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方。专利技术的效果本专利技术提供判定试样是否含有尾孢菌属或者假尾孢菌属的菌的新的方法。具体实施方式以下，详细说明本专利技术的实施方式。(第1实施方式)根据第1实施方式的方法具备以下4个工序(a)～(d)。(工序(a))工序(a)中，将试样添加到含有N,N,N',N'-四甲基-1,4-苯二胺(以下称为“TMPD”)和用以下化学式表示的化合物(以下称为“WST-8”)的水溶液中，得到混合物。TMPD可以作为N,N,N',N'-四甲基-1,4-苯二胺二盐酸盐(CAS号：637-01-4)获得。WST-8可以作为5-(2,4-二磺基苯基)-3-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-四唑鎓,内盐,单钠盐(CAS号：193149-74-5)获得。水溶液具有5.1～6.5的pH值。在水溶液具有低于5.1的pH值的情况下，不能检测尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌。更详细地，即使试样含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方，也会在后述的工序(d)中得出试样不含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌的任一方这样的错误结论。请参照后述的比较例2。在水溶液具有超过6.5的pH值的情况下，不能检测尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌。更详细地，即使试样不含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌的任一方，也会在后述的工序(d)中得出试样含有尾孢菌属的菌或者假尾孢菌属的菌这样的错误结论。请参照后述的比较例19。因此，水溶液具有5.1～6.5的pH值。本专利技术具有通过适当pH值条件下(即，5.1～6.5)的TMPD和WST-8的组合来检测尾孢菌属的菌或者假尾孢菌属的菌的特征。TMPD和WST-8的任一方的缺失都会使尾孢菌属的菌或者假尾孢菌属的菌的检测变得不可能。混合物期望在室温静置1天以上。(工序(b))工序(b)中，对工序(a)中得到的混合物照射具有400纳米～500纳米的波长的光，测定混合物的第1吸光度Ay。作为一例，可以对混合物照射具有460纳米的波长的光，测定混合物的第1吸光度Ay。(工序(c))工序(c)中，对工序(a)中得到的混合物照射具有超过500纳米且为800纳米以下的波长的光，测定混合物的第2吸光度Ax。作为一例，可以照射具有610纳米的波长的光，测定混合物的第2吸光度Ax。对工序(b)和工序(c)的顺序不限定。换言之，可以先进行工序(b)，然后进行工序(c)。或者，先进行工序(c)，然后进行工序(b)。(工序(d))工序(d)中，在满足以下算式(I)的情况下，判定所述试样含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方。Ay/Ax≥1.5(I)由后述的实施例可明确，在混合物含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方的情况下，Ay/Ax的值为1.5以上。另一方面，混合物不含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌的任一方的情况下，Ay/Ax的值小于1.5。换言之，在混合物含有TMPD、WST-8、以及尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌的至少一方的全部的情况下，具有400纳米～500纳米的波长的光被混合物充分吸收。具有超过500纳米且为800纳米以下的波长的光容易透射混合物。另一方面，在混合物不含有TMPD、WST-8、以及尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方的任一者的情况下，具有400纳米～500纳米的波长的光基本不被混合物吸收。具有超过500纳米且为800纳米以下的波长的光不易透射混合物。该吸收度的差反映在Ay/Ax的值上。(第2实施方式)根据第2实施方式的方法具备工序(a)和工序(e)。第2实施方式所包含的工序(a)与第1实施方式所包含的工序(a)相同。(工序(e))由后述的实施例也可明确，只要在试样含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方的情况下，混合物就变成橙色。另一方面，在试样不含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌的任一方的情况下，混合物由于TMPD的原因而变成紫色。因此，工序(e)中，在混合物变成橙色的情况下，判定试样含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌的至少一方。另一方面，在混合物不变成橙色的情况下，判定试样不含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌的任一方。判定可以通过目视容易地进行。考虑含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌的至少一方的混合物变成橙色的原因是因为，透明的WST-8由于尾孢菌属的菌或者假尾孢菌属的菌而被还原变成橙色的WST-8甲本专利技术还包含用于实施上述的判定方法的装置。本专利技术的装置至少具备WST-8和TMPD。本专利技术的装置还可以进一步具备：用于收容试样的容器、用于培养菌的培养基、能够照射具有规定波长的光的光源、用于测定吸光度的吸光度计、用于光学检测菌显色试剂的显色的光学传感器、用于显示检测的结果的显示元件等。(实施例)参照以下实施例更详细地说明本专利技术。(实施例1)本专利技术者使用金属钩切下将菌高粱尾孢菌(Cercosporasorghi)培养3天以上而得的琼脂培养基。接着，本专利技术者们将切下的培养基添加到10％马铃薯葡萄糖液体培养基(Difco研究所制、以下称为“10％PDB”)中，得到混合物。将混合物使用微量移液器进行搅拌。混合物使用细胞滤过器(从コーニング株式会社作为商品名#352235购得)进行过滤。这样，将琼脂培养基除去。本专利技术者使用血细胞计数板(从サンリード硝子有限会社作为商品名A131获得)，计算滤液中含有的孢子的浓度。接着，本专利技术者们基于该孢子的浓度使用10％PDB稀释混合物，以含有的孢子的数为10万个的方式制备试样溶液。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.判定试样是否含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方的方法，该方法具备以下工序：工序(a)，将所述试样添加到含有N,N,N’,N’‑四甲基‑1,4‑苯二胺和5‑(2,4‑二磺基苯基)‑3‑(2‑甲氧基‑4‑硝基苯基)‑2‑(4‑硝基苯基)‑2H‑四唑鎓的水溶液中，得到混合物，其中，所述水溶液具有5.1～6.5的pH值，工序(b)，对所述混合物照射具有400纳米～500纳米的波长的光，测定所述混合物的第1吸光度Ay，工序(c)，对所述混合物照射具有超过500纳米且为800纳米以下的波长的光，测定所述混合物的第2吸光度Ax，和工序(d)在满足以下算式(I)的情况下，判定所述试样含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方，Ay/Ax≥1.5(I)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.05.12 JP 2017-0952511.判定试样是否含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方的方法，该方法具备以下工序：工序(a)，将所述试样添加到含有N,N,N’,N’-四甲基-1,4-苯二胺和5-(2,4-二磺基苯基)-3-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-四唑鎓的水溶液中，得到混合物，其中，所述水溶液具有5.1～6.5的pH值，工序(b)，对所述混合物照射具有400纳米～500纳米的波长的光，测定所述混合物的第1吸光度Ay，工序(c)，对所述混合物照射具有超过500纳米且为800纳米以下的波长的光，测定所述混合物的第2吸光度Ax，和工序(d)在满足以下算式(I)的情况下，判定所述试样含有尾孢菌属的菌和假尾孢菌属的菌中的至少一方，Ay/Ax≥1.5(I)。2.根据权利要求1所述的方法，该方法中，所述尾孢菌属的菌是选自高粱尾孢菌(Cercosporasorghi)和玉米尾孢菌(Cercosporazeae-maydis)中的至少1种。3.根据权利要求1所述的方法，该方法中，所述假尾孢菌属的菌是煤污假尾孢菌(Pseudocercosporafuligena)。4.根据权利要求1所述的方法，该方法中，所述水溶液是缓冲液。5.用于实施权利要求1～4的任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：串田祐辉，狩集庆文，
申请(专利权)人：松下知识产权经营株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP