用于增强基因表达的组合物和方法技术

本公开一般涉及用于调节基因表达的核酸分子。本文公开包括了包含可操作地连接至目的基因的编码序列的病毒衣壳增强子的一种或多种结构元件的核酸分子。在一些实施方式中，病毒衣壳增强子包含来自病毒衣壳蛋白的下游环(DLP)或DLP的变体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于增强基因表达的组合物和方法相关申请本申请要求于2016年12月5日提交的美国临时申请序列号62/430,250、2017年4月17日提交的美国临时申请序列号62/486,361、和2017年11月17日提交的美国临时申请序列号62/587,954的优先权。上述申请的内容在此通过引用明确地并入本文。序列表的并入所附序列表中的材料通过引用结合到本申请中。所附序列表文本文件名为SGI012WO_SeqListing.txt，创建于2017年12月4日且为169KB。
本公开涉及分子生物学和基因工程领域，包括用于调节基因表达的核酸分子，以及核酸分子在例如细胞培养物的合适宿主细胞中或在受试者中产生所需产物，并且赋予宿主细胞或受试者有益特征的用途。
技术介绍
生物技术和分子生物学的进步为开发具有商业上所需特征或性状的重组细胞和生物体提供了许多机会。特别是现代基因工程技术极大地加速了基因的引入，从而加速了重组细胞和生物体的新特性。在例如宿主细胞或转基因生物体中所需基因的适当表达水平有助于实现该目标。然而，尽管存在许多分子工具，但宿主细胞和生物体的遗传修饰通常受到目的基因表达水平不足或不受控表达的限制。因此，仍然需要能够增强宿主细胞和生物体中转基因表达的调节元件。包括在各种类型的生物中起作用的调节元件、表达载体和表达系统的新型分子工具的鉴定可用于开发遗传增强的细胞和生物体。
技术实现思路
本节提供了本申请的一般概述，并未全面描述其全部范围或其所有特征。本公开一般涉及用于在体外、离体或体内调节例如增加基因表达的方法和组合物。基因表达可以是例如在动物细胞和其它真核细胞中。该基因可以是例如编码目的蛋白质的异源基因。在一个方面，本文公开的一些实施方式涉及核酸分子，包括(i)编码病毒衣壳增强子或其变体的一个或多个RNA茎环的第一核酸序列；(ii)可操作地连接至第一核酸序列的第二核酸序列，其中第二核酸序列包含目的基因(GOI)的编码序列。根据本公开的核酸分子的实施方式的实施可包括一个或多个下列特征。在一些实施方式中，第一核酸序列可操作地连接在GOI的编码序列的上游。在一些实施方式中，核酸分子还包括可操作地连接在第一核酸序列的上游的启动子。在一些实施方式中，核酸分子还包括可操作地连接在第一核酸序列的上游的5’UTR序列。在一些实施方式中，5’UTR序列可操作地连接在启动子下游和第一核酸序列的上游。在一些实施方式中，核酸分子还包括可操作地连接在第二核酸序列的上游的自身蛋白酶肽的编码序列。在一些实施方式中，自身蛋白酶肽的编码序列可操作地连接在第一核酸序列的下游和第二核酸序列的上游。在一些实施方式中，自身蛋白酶肽包含选自由以下组成的组中的肽序列：猪捷申病毒-12A(P2A)，口蹄疫病毒(FMDV)2A(F2A)，马鼻炎A病毒(ERAV)2A(E2A)，托西埃塞(Thoseaasigna)病毒2A(T2A)，细胞质多角体病毒2A(BmCPV2A)，软化病病毒2A(BmIFV2A)及其组合。在一些实施方式中，核酸分子还包括下游可操作地在第二序列核酸序列的连接的3’UTR序列。在一些实施方式中，病毒衣壳增强子衍生自属于披膜病毒科(Togaviridae)的病毒种的衣壳基因。在一些实施方式中，病毒种属于披膜病毒科的甲病毒属。在一些实施方式中，甲病毒种是东部马脑炎病毒(EEEV)，委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)，Everglades病毒(EVEV)，Mucambo病毒(MUCV)，Semlikiforest病毒(SFV)，Pixuna病毒(PIXV)，Middleburg病毒(MIDV)，Chikungunya病毒(CHIKV)，O’Nyong-Nyong病毒(ONNV)，RossRiver病毒(RRV)，BarmahForest病毒(BF)，Getah病毒(GET)，Sagiyama病毒(SAGV)，Bebaru病毒(BEBV)，Mayaro病毒(MAYV)，Una病毒(UNAV)，Sindbis病毒(SINV)，Aura病毒(AURAV)，Whataroa病毒(WHAV)，Babanki病毒(BABV)，Kyzylagach病毒(KYZV)，西部马脑炎病毒(WEEV)，HighlandJ病毒(HJV)，FortMorgan病毒(FMV)，Ndumu(NDUV)，Salmonid甲病毒(SAV)或BuggyCreek病毒。在一些实施方式中，病毒衣壳增强子包含病毒种的下游环(DLP)基序，并且其中DLP基序包含一个或多个RNA茎环中的至少一个。在一些实施方式中，病毒衣壳增强子包含与SEQIDNO：1和46-52中的至少一个显示出至少80％序列同一性的核酸序列。在一些实施方式中，核酸序列与SEQIDNO：1和46-52中的至少一个表现出至少95％的序列同一性。在一些实施方式中，GOI的编码序列编码多肽。在一些实施方式中，多肽是治疗性多肽，预防性多肽，诊断性多肽，营养保健多肽，工业酶，报告多肽或其组合。在一些实施方式中，多肽是抗体，抗原，免疫调节剂，细胞因子，酶或其组合。在一些实施方式中，本公开的核酸分子还包含编码第二病毒衣壳增强子或其变体的一个或多个RNA茎环的第三核酸序列；和可操作地连接至第三核酸序列的第四核酸序列，其中第四核酸序列包含第二目的基因(GOI)的编码序列。在一些实施方式中，核酸分子还包括第二自身蛋白酶肽的编码序列，其可操作地连接在第三核酸序列的下游和第四核酸序列的上游。在一些实施方式中，本公开的核酸分子是mRNA分子或RNA复制子。在一些实施方式中，核酸分子是表达载体或转录载体。在一些实施方式中，表达载体或转录载体还包含一种或多种另外的转录调节序列。在一些实施方式中，表达载体或转录载体还包含一种或多种另外的转录调节序列。在一些实施方式中，表达载体或转录载体还包含一种或多种另外的翻译调节序列。在一些实施方式中，核酸分子是质粒，噬菌体载体，粘粒(cosmid)，黏粒(fosmid)，病毒复制子，穿梭载体或其组合。在一些实施方式中，核酸分子是原核载体或真核载体。在一些实施方式中，核酸分子通过从头合成产生。在一些实施方式中还公开了包括在细胞中产生目的多肽的方法，其包括将根据本公开的核酸分子引入细胞中，从而产生由细胞中的GOI编码的多肽。在另一个相关方面，本文公开的一些实施方式涉及在细胞中产生目的多肽的方法，其包括将RNA分子引入细胞，其中RNA分子包含病毒衣壳增强子或其变体的一个或多个RNA茎环，以及目的多肽的编码序列，从而在细胞中产生目的多肽。在一些实施方式中，RNA分子是信使RNA(mRNA)分子或复制RNA分子。在一些实施方式中，RNA分子在引入细胞之前通过从头合成和/或体外转录产生。在一些实施方式中，RNA分子包含病毒种的下游环(DLP)基序，并且其中DLP基序包含病毒衣壳增强子的一个或多个RNA茎环中的至少一个。在一些实施方式中，RNA分子还包含在一个或多个RNA茎环中至少一个的下游和目的多肽的编码序列上游的自身蛋白酶肽的编码序列。在一些实施方式中，自身蛋白酶肽包含选自由以下组成的组中的肽序列：猪捷申病毒-12A(P2A)，口蹄疫病毒(FMDV)2A(F2A)，马鼻炎A病毒(ERAV)2A(E2A)，托西埃塞病毒2A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸分子，其包括：第一核酸序列，其编码病毒衣壳增强子或其变体的一个或多个RNA茎环；和第二核酸序列，其可操作地连接至所述第一核酸序列，其中所述第二核酸序列包含目的基因(GOI)的编码序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.05 US 62/430,250;2017.04.17 US 62/486,361;1.一种核酸分子，其包括：第一核酸序列，其编码病毒衣壳增强子或其变体的一个或多个RNA茎环；和第二核酸序列，其可操作地连接至所述第一核酸序列，其中所述第二核酸序列包含目的基因(GOI)的编码序列。2.根据权利要求1所述的核酸分子，其中，所述第一核酸序列可操作地连接在所述GOI的编码序列上游。3.根据权利要求1或2所述的核酸分子，其还包含可操作地连接在所述第一核酸序列上游的启动子。4.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸分子，其还包含可操作地连接在所述第一核酸序列上游的5’UTR序列。5.根据权利要求4所述的核酸分子，其中，所述5’UTR序列可操作地连接在所述启动子下游和所述第一核酸序列上游。6.根据权利要求1至5中任一项所述的核酸分子，其还包含可操作地连接在所述第二核酸序列上游的自身蛋白酶肽的编码序列。7.根据权利要求6所述的核酸分子，其中，所述自身蛋白酶肽的编码序列可操作地连接在所述第一核酸序列下游和所述第二核酸序列上游。8.根据权利要求6至7中任一项所述的核酸分子，其中，所述自身蛋白酶肽包含选自由猪捷申病毒-12A(P2A)、口蹄疫病毒(FMDV)2A(F2A)、马鼻炎A病毒(ERAV)2A(E2A)、托西埃塞病毒2A(T2A)、细胞质多角体病毒2A(BmCPV2A)、软化病病毒2A(BmIFV2A)及其组合组成的组中的肽序列。9.根据权利要求1至8中任一项所述的核酸分子，其还包含可操作地连接在所述第二序列核酸序列下游的3’UTR序列。10.根据权利要求1至9中任一项所述的核酸分子，其中，所述病毒衣壳增强子衍生自属于披膜病毒科的病毒种的衣壳基因。11.根据权利要求10所述的核酸分子，其中，所述病毒种属于披膜病毒科的甲病毒属。12.根据权利要求11所述的核酸分子，其中，所述甲病毒种选自由东部马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)、Everglades病毒(EVEV)、Mucambo病毒(MUCV)、Semlikiforest病毒(SFV)、Pixuna病毒(PIXV)、Middleburg病毒(MIDV)、Chikungunya病毒(CHIKV)、O’Nyong-Nyong病毒(ONNV)、RossRiver病毒(RRV)、BarmahForest病毒(BF)、Getah病毒(GET)，Sagiyama病毒(SAGV)、Bebaru病毒(BEBV)、Mayaro病毒(MAYV)、Una病毒(UNAV)、Sindbis病毒(SINV)、Aura病毒(AURAV)、Whataroa病毒(WHAV)、Babanki病毒(BABV)、Kyzylagach病毒(KYZV)、西部马脑炎病毒(WEEV)、HighlandJ病毒(HJV)、FortMorgan病毒(FMV)、Ndumu(NDUV)、Salmonid甲病毒(SAV)和BuggyCreek病毒组成的组。13.根据权利要求10至12中任一项所述的核酸分子，其中，所述病毒衣壳增强子包含所述病毒种的下游环(DLP)基序，并且其中所述DLP基序包含所述一个或多个RNA茎环中的至少一个。14.根据权利要求1至11中任一项所述的核酸分子，其中，所述病毒衣壳增强子包含与SEQIDNO：1和46-52中的至少一个显示出至少80％序列同一性的核酸序列。15.根据权利要求14所述的核酸分子，其中，所述核酸序列与SEQIDNO：1和46-52中的至少一个表现出至少95％序列同一性。16.根据权利要求1至15中任一项所述的核酸分子，其中，所述GOI的编码序列编码多肽。17.根据权利要求1至16中任一项所述的核酸分子，其中，所述多肽选自由治疗性多肽、预防性多肽、诊断性多肽、营养保健多肽、工业酶、报告多肽及其组合组成的组。18.根据权利要求1至16中任一项所述的核酸分子，其中，所述多肽选自由抗体、抗原、免疫调节剂、细胞因子、酶及其组合组成的组。19.根据权利要求1至18中任一项所述的核酸分子，其还包含：第三核酸序列，其编码第二病毒衣壳增强子或其变体的一个或多个RNA茎环；和第四核酸序列，其可操作地连接至所述第三核酸序列，其中所述第四核酸序列包含第二目的基因(GOI)的编码序列。20.根据权利要求19所述的核酸分子，其还包含可操作地连接在所述第三核酸序列下游和所述第四核酸序列上游的第二自身蛋白酶肽的编码序列。21.根据权利要求1至20中任一项所述的核酸分子，其中，所述核酸分子是mRNA分子或RNA复制子。22.根据权利要求1至20中任一项所述的核酸分子，其中，所述核酸分子是表达载体或转录载体。23.根据权利要求22所述的核酸分子，其还包含一种或多种另外的转录调节序列。24.根据权利要求22或23所述的核酸分子，其还包含一种或多种另外的翻译调节序列。25.根据权利要求22至24中任一项所述的核酸分子，其中，所述核酸分子是质粒、噬菌体载体、粘粒、黏粒、病毒复制子、穿梭载体或其组合。26.根据权利要求22至25中任一项所述的核酸分子，其中，所述核酸分子是原核载体或真核载体。27.根据权利要求1-26中任一项所述的核酸分子，其中，所述核酸分子通过从头合成产生。28.一种用于在细胞中产生目的多肽的方法，其包括将根据权利要求16-27中任一项所述的核酸分子引入所述细胞，从而产生由所述细胞中的GOI编码的多肽。29.一种用于在细胞中产生目的多肽的方法，其包括将RNA分子引入所述细胞，其中所述RNA分子包含：病毒衣壳增强子或其变体的一个或多个RNA茎环，和所述目的多肽的编码序列，从而在细胞中产生目的多肽。30.根据权利要求29所述的方法，其中，所述RNA分子是信使RNA(mRNA)分子或复制RNA分子。31.根据权利要求29或30所述的方法，其中，所述RNA分子在引入所述细胞之前通过从头合成和/或体外转录产生。32.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中，所述RNA分子包含病毒种的下游环(DLP)基序，并且其中所述DLP基序包含所述病毒衣壳增强子的一个或多个RNA茎环中的至少一个。33.根据权利要求29至32中任一项所述的方法，其中，所述RNA分子还包含在所述一个或多个RNA茎环中的至少一个下游和所述目的多肽的编码序列上游的自身蛋白酶肽的编码序列。34.根据权利要求33所述的方法，其中，所述自身蛋白酶肽包含选自由猪捷申病毒-12A(P2A)、口蹄疫病毒(FMDV)2A(F2A)、马鼻炎A病毒(ERAV)2A(E2A)、托西埃塞病毒2A(T2A)、细胞质多角体病毒2A(BmCPV2A)、软化病病毒2A(BmIFV2A)及其组合组成的组中的肽序列。35.根据权利要求29至34中任一项所述的方法，其中，所述多肽选自由治疗性多肽、预防性多肽、诊断性多肽、营养保健多肽、工业酶、报告多肽及其组合组成的组。36.根据权利要求29至34中任一项所述的方法，其中，所述多肽选自由抗体、抗原、免疫调节剂、细胞因子、酶及其组合组成的组。37.根据权利要求29至36中任一项所述的方法，其中，所述细胞存在于组织、器官或受试者中。38.根据权利要求37所述的方法，其中，所述受试者选自由人、马、猪、灵长类动物、小鼠、雪貂、大鼠、棉鼠、牛、猪、绵羊、兔、猫、狗、鸟、鱼、山羊、驴、仓鼠和水牛组成的组。39.一种用于在细胞中产生信使RNA(mRNA)的方法，其包括向所述细胞施用核酸分子，所述核酸分子包含编码病毒衣壳增强子或其变体的一个或多个RNA茎环的第一核酸序列，和可操作地连接至所述第一核酸序列的第二核酸序列，其中所述第二核酸序列包含目的基因(GOI)的编码序列，从而产生所述GOI的mRNA。40.根据权利要求39所述的方法，其中，所述第一核酸序列可操作地连接在所述GOI的编码序列上游。41.根据权利要求39或40所述的方法，其还包含可操作地连接在所述第一核酸序列上游的启动子。42.根据权利要求39至41中任一项所述的方法，其还包含可操作地连接在所述第一核酸序列上游的5’UTR序列。43.根据权利要求42所述的方法，其中，所述5’UTR序列可操作地连接在所述启动子下游和所述第一核酸序列上游。44.根据权利要求39至43中任一项所述的方法，其还包含可操作地连接在所述第二核酸序列上游的自身蛋白酶肽的编码序列。45.根据权利要求44所述的方法，其中，所述自身蛋白酶肽的编码序列可操作地连接在所述第一核酸序列下游和所述第二核酸序列上游。46.根据权利要求44至45中任一项所述的方法，其中，所述自身蛋白酶肽包含选自由猪捷申病毒-12A(P2A)、口蹄疫病毒(FMDV)2A(F2A)、马鼻炎A病毒(ERAV)2A(E2A)、托西埃塞病毒2A(T2A)、细胞质多角体病毒2A(BmCPV2A)、软化病病毒2A(BmIFV2A)及其组合组成的组中的肽序列。47.根据权利要求39至46中任一项所述的核酸分子，其还包含可操作地连接在所述第二序列核酸序列下游的3’UTR序列。48.根据权利要求39至47中任一项所述的方法，其中，所述病毒衣壳增强子衍生自属于披膜病毒科的病毒种的衣壳基因。49.根据权利要求39至48中任一项所述的方法，其中，所述病毒种属于披膜病毒科的甲病毒属。50.根据权利要求49所述的方法，其中，所述甲病毒种选自由东部马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)、Everglades病毒(EVEV)、Mucambo病毒(MUCV)、Semlikiforest病毒(SFV)、Pixuna病毒(PIXV)、Middleburg病毒(MIDV)、Chikungunya病毒(CHIKV)、O’Nyong-Nyong病毒(ONNV)、RossRiver病毒(RRV)、BarmahForest病毒(BF)、Getah病毒(GET)，Sagiyama病毒(SAGV)、Bebaru病毒(BEBV)、Mayaro病毒(MAYV)、Una病毒(UNAV)、Sindbis病毒(SINV)、Aura病毒(AURAV)、Whataroa病毒(WHAV)、Babanki病毒(BABV)、Kyzylagach病毒(KYZV)、西部马脑炎病毒(WEEV)、HighlandJ病毒(HJV)、FortMorgan病毒(FMV)、Ndumu(NDUV)、Salmonid甲病毒(SAV)和BuggyCreek病毒组成的组。51.根据权利要求48至50中任一项所述的方法，其中，所述病毒衣壳增强子包含所述病毒种的下游环(DLP)基序，并且其中所述DLP基序包含所述一个或多个RNA茎环中的至少一个。52.根据权利要求51所述的方法，其中，所述病毒衣壳增强子包含与SEQIDNO：1和46-52中的至少一个表现出至少80％序列同一性的核酸序列。53.根据权利要求52所述的核酸分子，其中，所述核酸序列与SEQIDNO：1和46-52中的至少一个表现出至少95％序列同一性。54.根据权利要求39至53中任一项所述的方法，其中，所述GOI的编码序列编码多肽。55.根据权利要求54所述的方法，其中，所述多肽选自由治疗性多肽、预防性多肽、诊断性多肽、营养保健多肽、工业酶、报告多肽及其组合组成的组。56.根据权利要求54所述的方法，其中，所述多肽选自由抗体、抗原、免疫调节剂、细胞因子、酶及其组合组成的组。57.根据权利要求39至56中任一项所述的方法，其还包括：第三核酸序列，其编码第二病毒衣壳增强子或其变体的一个或多个RNA茎环；和第四核酸序列，其可操作地连接至所述第三核酸序列，其中所述第四核酸序列包含第二目的基因(GOI)的编码序列。58.根据权利要求57所述的方法，其还包括可操作地连接在所述第三核酸序列下游和所述第四核酸序列上游的第二自身蛋白酶肽的编码序列。59.根据权利要求39至58中任一项所述的方法，其中，所述核酸分子是RNA复制子。60.根据权利要求39至58中任一项所述的方法，其中，所述核酸分子是表达载体或转录载体。61.根据权利要求59或60所述的方法，其中，所述核酸分子还包含一种或多种另外的转录调节序列。62.根据权利要求60或61所述的核酸分子，其还包含一种或多种另外的翻译调节序列。63.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中，所述核酸分子是选自由质粒、噬菌体载体、粘粒、黏粒、病毒复制子、穿梭载体及其组合组成的组中的表达载体。64.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中，所述核酸分子是原核表达载体或真核表达载体。65.根据权利要求39至64中任一项所述的方法，其中，所述细胞存在于组织、器官或受试者中。66.根据权利要求65所述的方法，其中，所述受试者选自人、马、猪、灵长类动物、小鼠、雪貂、大鼠、棉鼠、牛、猪、绵羊、兔、猫、狗、鸟、鱼、山羊、驴、仓鼠和水牛。67.根据权利要求39至66中任一项所述的方法，其还包括产生由所述细胞中GOI的mRNA编码的多肽。68.根据权利要求39至66中任一项所述的方法，其还包括：获得产生的所述GOI的mRNA；将获得的mRNA导入第二细胞，用于在所述第二细胞中表达由所述GOI的mRNA编码的多肽。69.一种核酸分子，其包含编码经修饰的病毒RNA复制子的核酸序列，其中，所述经修饰的病毒RNA复制子包含：编码病毒衣壳增强子或其变体的一种或多种结构元件的第一核酸序列，其中所述病毒衣壳增强子与所述病毒RNA复制子是异源的，和编码至少一种非结构病毒蛋白或其部分的第二核酸序列，其中，所述第一核酸序列可操作地连接在所述第二核酸序列上游。70.根据权利要求69所述的核酸分子，其中，所述病毒衣壳增强子的一种或多种结构元件中的至少一种包含一个或多个RNA茎环。71.根据权利要求69或70所述的核酸分子，其中，所述病毒衣壳增强子衍生自属于披膜病毒科的病毒种的衣壳基因。72.根据权利要求71所述的核酸分子，其中，所述病毒种属于披膜病毒科的甲病毒属。73.根据权利要求72所述的核酸分子，其中，所述甲病毒种选自由东部马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)、Everglades病毒(EVEV)、Mucambo病毒(MUCV)、Semlikiforest病毒(SFV)、Pixuna病毒(PIXV)、Middleburg病毒(MIDV)、Chikungunya病毒(CHIKV)、0’Nyong-Nyong病毒(ONNV)、RossRiver病毒(RRV)、BarmahForest病毒(BF)、Getah病毒(GET)，Sagiyama病毒(SAGV)、Bebaru病毒(BEBV)、Mayaro病毒(MAYV)、Una病毒(UNAV)、Sindbis病毒(SINV)、Aura病毒(AURAV)、Whataroa病毒(WHAV)、Babanki病毒(BABV)、Kyzylagach病毒(KYZV)、西部马脑炎病毒(WEEV)、HighlandJ病毒(HJV)、FortMorgan病毒(FMV)、Ndumu(NDUV)和BuggyCreek病毒组成的组。74.根据权利要求71至73中任一项所述的核酸分子，其中，所述病毒衣壳增强子包含所述病毒种的下游环(DLP)基序，并且其中所述DLP基序包含所述一个或多个RNA茎环中的至少一个。75.根据权利要求69或70所述的核酸分子，其中，所述病毒衣壳增强子包含与SEQIDNO：1和46-52中的至少一个表现出至少80％序列同一性的核酸序列。76.根据权利要求75所述的核酸分子，其中，所述核酸序列与SEQIDNO：1和46-52中的至少一个表现出至少95％序列同一性。77.根据权利要求69至76中任一项所述的核酸分子，其中，所述编码经修饰的病毒RNA复制子的核酸序列还包含自身蛋白酶肽的编码序列，所述自身蛋白酶肽的编码序列可操作地连接在所述第一核酸序列下游和所述第二核酸序列上游。78.根据权利要求77所述的核酸分子，其中，所述自身蛋白酶肽包含选自由猪捷申病毒-12A(P2A)、口蹄疫病毒(FMDV)2A(F2A)、马鼻炎A病毒(ERAV)2A(E2A)、托西埃塞病毒2A(T2A)、细胞质多角体病毒2A(BmCPV2A)、软化病病毒2A(BmIFV2A)及其组合组成的组中的肽序列。79.根据权利要求69至78中任一项所述的核酸分子，其中，所述第一核酸序列可操作地位于所述经修饰的病毒RNA复制子的5’-末端下游约1至1000个核苷酸的区域内。80.根据权利要求69至79中任一项所述的核酸分子，其中，所述第二核酸序列包含相应未修饰的病毒RNA复制子的天然病毒非结构蛋白的基本上所有编码序列。81.根据权利要求69至80中任一项所述的核酸分子，其中，所述经修饰的病毒RNA复制子包含衍生自属于披膜病毒科的甲病毒属或属于动脉炎病毒科的动脉炎病毒属的病毒种的经修饰的RNA复制子。82.根据权利要求81的核酸分子，其中，所述动脉炎病毒种选自由马动脉炎病毒(EAV)、猪呼吸和生殖综合征病毒(PRRSV)、乳酸脱氢酶升高病毒(LDV)和猿猴出血热病毒(SHFV)组成的组。83.根据权利要求82所述的核酸分子，其中，所述第一核酸序列可操作地位于编码所述经修饰的动脉炎病毒RNA复制子的部分或全部pplab非结构蛋白的第二核酸序列上游。84.根据权利要求82或83所述的核酸分子，其中，所述编码经修饰的动脉炎病毒RNA复制子的核酸序列还包含一个或多个表达盒，其中所述一个或多个表达盒中的至少一个包含与目的基因(GOI)的编码序列可操作地连接的启动子。85.根据权利要求84所述的核酸分子，其中，所述经修饰的动脉炎病毒RNA复制子包含至少两个、三个、四个、五个或六个表达盒。86.根据权利要求84或85所述的核酸分子，其中，所述一个或多个表达盒中的至少一个可操作地连接在编码所述经修饰的动脉炎病毒RNA复制子的部分或全部pplab非结构蛋白的第二核酸序列下游。87.根据权利要求84至86中任一项所述的核酸分子，其中，所述一个或多个表达盒中的至少一个可操作地位于所述经修饰的动脉炎病毒RNA复制子的转录调节序列(TRS)下游，其中所述TRS选自由TRS1、TRS2、TRS3、TRS4、TRS5、TRS6和TRS7组成的组。88.根据权利要求84至87中任一项所述的核酸分子，其中，所述一个或多个表达盒中的至少一个还包含编码病毒衣壳增强子的一种或多种结构元件的第三核酸序列，其中所述第三核酸序列可操作地连接在所述GOI的编码序列上游。89.根据权利要求88所述的核酸分子，其中，所述编码经修饰的动脉炎病毒RNA复制子的核酸序列还包含自身蛋白酶肽的编码序列，所述自身蛋白酶肽的编码序列可操作地连接在所述第三核酸序列下游和所述GOI的编码序列上游。90.根据权利要求84至89中任一项所述的核酸分子，其中，所述GOI的编码序列编码选自由治疗性多肽、预防性多肽、诊断性多肽、营养保健多肽、工业酶、报告多肽及其任何组合组成的组中的多肽。91.根据权利要求84至89中任一项所述的核酸分子，其中，所述GOI的编码序列编码选自由抗体、抗原、免疫调节剂、细胞因子、酶及其任何组合组成的组中的多肽。92.根据权利要求69至91中任一项所述的核酸分子，其中，所述经修饰的病毒RNA复制子包含衍生自甲病毒种的经修饰的RNA复制子，所述甲病毒种选自由东部马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)、Everglades病毒(EVEV)、Mucambo病毒(MUCV)、Semlikiforest病毒(SFV)、Pixuna病毒(PIXV)、Middleburg病毒(MIDV)、Chikungunya病毒(CHIKV)、O’Nyong-Nyong病毒(ONNV)、RossRiver病毒(RRV)、BarmahForest病毒(BF)、Getah病毒(GET)，Sagiyama病毒(SAGV)、Bebaru病毒(BEBV)、Mayaro病毒(MAYV)、Una病毒(UNAV)、Sindbis病毒(SINV)、Aura病毒(AURAV)、Whataroa病毒(WHAV)、Babank...

【专利技术属性】
技术研发人员：库尔特·艾弗·卡姆鲁德，温茂年，纳撒尼尔·斯蒂芬·王，詹森·德哈特，
申请(专利权)人：杨森制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US