可分泌变体免疫调节蛋白和工程化细胞疗法制造技术

提供了免疫调节蛋白、编码此类免疫调节蛋白的核酸、经工程化以表达所述免疫调节蛋白的细胞和含有编码所述免疫调节蛋白的核酸的感染因子。在一些实施方案中，所述免疫调节蛋白是可分泌的。在一些实施方案中，所述免疫调节蛋白是表面表达的跨膜蛋白。所述免疫调节蛋白、工程化细胞和感染原提供了用于多种免疫和肿瘤病症的治疗效用。提供了用于制备和使用此类蛋白质的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】可分泌变体免疫调节蛋白和工程化细胞疗法相关申请的交叉引用本申请要求2016年10月20日提交的标题为“可分泌变体免疫调节蛋白和工程化细胞疗法(SecretableVariantImmunomodulatoryProteinsandEngineeredCellTherapy)”的美国临时申请案第62/410,827号、2017年3月22日提交的标题为“可分泌变体免疫调节蛋白和工程化细胞疗法(SecretableVariantImmunomodulatoryProteinsandEngineeredCellTherapy)”的美国临时申请案第62/475,210号和2017年7月27日提交的标题为“可分泌变体免疫调节蛋白和工程化细胞疗法(SecretableVariantImmunomodulatoryProteinsandEngineeredCellTherapy)”的美国临时申请案第62/537,921号的优先权，上述申请案各自的内容均通过引用以其全文并入。通过引用序列表并入本申请是与电子格式的序列表一起提交申请的。序列表以2017年10月19日创建的名为761612001440SeqList.TXT的文件提供，其大小为3,524,332字节。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其全文并入。
本公开文本提供了免疫调节蛋白、编码此类免疫调节蛋白的核酸、经工程化以表达所述免疫调节蛋白的细胞和含有编码所述免疫调节蛋白的核酸的感染因子。在一些实施方案中，所述免疫调节蛋白是可分泌的。在一些实施方案中，所述免疫调节蛋白是表面表达的跨膜蛋白。所述免疫调节蛋白、工程化细胞和感染原提供了用于多种免疫和肿瘤病症的治疗效用。提供了用于制备和使用此类蛋白质的组合物和方法。
技术介绍
通过介入由抗原呈递细胞(APC)或靶细胞与淋巴细胞在所述抗原呈递细胞或靶细胞与淋巴细胞之间形成的免疫突触(IS)中发生的过程来调节免疫应答在医学上越来越受关注。目前，用于增强或阻抑免疫应答的生物制品通常限制于免疫球蛋白(例如，抗PD-1mAb)或可溶性受体(例如，Fc-CTLA4)。在一些情况下，可溶性受体具有多种缺陷。虽然可用于拮抗蛋白质之间的相互作用，但可溶性受体通常缺少激动此类相互作用的能力。已证实抗体在这方面较少受限，并且激动性和拮抗性抗体二者的例子为本领域中已知。然而，可溶性受体和抗体二者都缺少对于IS中的功能关键的重要属性。从机理而言，IS中的细胞表面蛋白可以涉及多个蛋白质靶与其所结合的单一蛋白质的配合的且通常同时的相互作用。IS相互作用的发生与两个细胞的接合密切相关，并且这种结构中的单一蛋白质可与同一细胞上的蛋白质(顺式)以及相关细胞上的蛋白质(反式)很可能同时地相互作用。虽然已知一些可调节IS的药剂，但仍需要改进的治疗剂。提供了满足这种需求的实施方案。
技术实现思路
在一个方面中，提供了免疫调节蛋白，其包含至少一个非免疫球蛋白亲和性修饰的免疫球蛋白超家族(IgSF)结构域，所述免疫球蛋白超家族结构域包含野生型IgSF结构域中的一个或多个氨基酸取代，其中至少一个亲和性修饰的IgSF结构域特异性地结合野生型IgSF结构域的至少一个细胞表面同源结合配偶体；免疫调节蛋白不包含跨膜结构域；并且免疫调节蛋白不与半衰期延长部分缀合。在一些实施方案中，半衰期延长部分是多聚化结构域。在一些实施方案中，半衰期延长部分是Fc结构域。在一些实施方案中，免疫调节蛋白还包含信号肽。在一些实施方案中，信号肽是来自相应野生型IgSF成员的天然信号肽。在一些实施方案中，信号肽是非-天然信号肽。在一些实施方案中，信号肽是来自免疫球蛋白抗体分子的信号肽(例如，IgG-κ信号肽)、IL-2信号肽或CD33信号肽或已知或已描述的其他信号肽。示例性信号肽陈述于SEQIDNO：413-430中的任一个中。在免疫调节蛋白的一些实施方案中，至少一种细胞表面同源结合配偶体在哺乳动物细胞上表达。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是抗原呈递细胞(APC)、肿瘤细胞或淋巴细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是T细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是小鼠、大鼠、食蟹猴或人类细胞。在免疫调节蛋白的一些实施方案中，与野生型IgSF结构域相比，至少一个亲和性修饰的IgSF结构域具有增加的与至少一种细胞表面同源结合配偶体的结合亲和性。在免疫调节蛋白的一些实施方案中，与野生型IgSF结构域相比，包含至少一个亲和性修饰的IgSF结构域的免疫调节蛋白的特异性结合调节哺乳动物细胞的免疫活性。在一些实施方案中，与野生型IgSF结构域相比，包含至少一个亲和性修饰的IgSF结构域的免疫调节蛋白的特异性结合增加哺乳动物细胞的免疫活性。在一些实施方案中，与野生型IgSF结构域相比，免疫调节蛋白的特异性结合减弱哺乳动物细胞的免疫活性。在免疫调节蛋白的一些实施方案中，野生型IgSF结构域来自选自以下项的家族的IgSF家族成员：信号调节蛋白(SIRP)家族、髓细胞触发受体样蛋白(TREML)家族、癌胚抗原相关细胞粘附分子(CEACAM)家族、唾液酸结合Ig样凝集素(SIGLEC)家族、嗜乳脂蛋白家族、B7家族、CD28家族、含有V集和免疫球蛋白结构域的蛋白(VSIG)家族、V集跨膜结构域(VSTM)家族、主要组织相容性复合物(MHC)家族、信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)家族、白细胞免疫球蛋白样受体(LIR)、结合素(Nec)家族、结合素样(NECL)家族、脊髓灰质炎病毒受体相关(PVR)家族、天然细胞毒性触发受体(NCR)家族、T细胞免疫球蛋白和粘蛋白(TIM)家族和杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)家族。在一些实施方案中，野生型IgSF结构域来自选自以下项的IgSF成员：CD80、CD86、PD-L1、PD-L2、ICOS配体、B7-H3、B7-H4、CD28、CTLA4、PD-1、ICOS、BTLA、CD4、CD8-α、CD8-β、LAG3、TIM-3、CEACAM1、TIGIT、PVR、PVRL2、CD226、CD2、CD160、CD200、CD200R、NKp30、VISTA、VSIG3和VSIG8。在一些实施方案中，野生型IgSF结构域是人类IgSF结构域。在一些实施方案中，至少一个亲和性修饰的IgSF结构域与SEQIDNO：1-27和408中任一个中所述的氨基酸序列中所含的野生型IgSF结构域或其特异性结合片段具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，免疫调节蛋白与选自SEQIDNO：28-54和410中任一个的氨基酸序列或与其含有IgSF结构域的特异性结合片段具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，野生型IgSF结构域是B7家族的成员。在一些实施方案中，野生型IgSF结构域是CD80、CD86或ICOSL的结构域。在免疫调节蛋白的一些实施方案中，至少一种细胞表面同源结合配偶体是在T细胞上表达的刺激性受体，并且与野生型IgSF结构域对刺激性受体的结合亲和性相比，至少一个亲和性修饰的IgSF结构域具有增加的与刺激性受体的结合亲和性。在一些实施方案中，亲和性修饰的IgSF结构域与刺激性受体(例如从细胞分泌时)的结合增加T细胞的免疫活性。在一些实施方案中，亲和性修饰的IgSF结构域与刺激性受本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种工程化免疫细胞，其包含编码免疫调节蛋白的核酸分子，其中：所述免疫调节蛋白包含至少一个非免疫球蛋白亲和性修饰的免疫球蛋白超家族(IgSF)结构域，所述免疫球蛋白超家族结构域包含IgSF家族成员的野生型IgSF结构域中的一个或多个氨基酸取代，其中所述至少一个亲和性修饰的IgSF结构域特异性地结合所述野生型IgSF结构域的至少一个细胞表面同源结合配偶体；并且所述工程化免疫细胞表达并分泌所述免疫调节蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.20 US 62/410,827;2017.03.22 US 62/475,210;1.一种工程化免疫细胞，其包含编码免疫调节蛋白的核酸分子，其中：所述免疫调节蛋白包含至少一个非免疫球蛋白亲和性修饰的免疫球蛋白超家族(IgSF)结构域，所述免疫球蛋白超家族结构域包含IgSF家族成员的野生型IgSF结构域中的一个或多个氨基酸取代，其中所述至少一个亲和性修饰的IgSF结构域特异性地结合所述野生型IgSF结构域的至少一个细胞表面同源结合配偶体；并且所述工程化免疫细胞表达并分泌所述免疫调节蛋白。2.权利要求1的工程化免疫细胞，其中所述免疫调节蛋白不包含跨膜结构域。3.权利要求1或权利要求2的工程化免疫细胞，其中所述核酸分子包含与编码所述免疫调节蛋白的序列可操作地连接的编码分泌性信号肽的序列。4.权利要求3的工程化免疫细胞，其中所述信号肽是来自相应野生型IgSF成员的天然信号肽。5.权利要求3的工程化免疫细胞，其中所述信号肽是非-天然信号序列。6.权利要求3或权利要求5的工程化免疫细胞，其中所述信号肽是IgG-κ信号肽、IL-2信号肽或CD33信号肽。7.权利要求1至6中任一项的工程化免疫细胞，其中所述核酸分子还包含至少一个可操作地连接以控制所述免疫调节蛋白的表达的启动子。8.权利要求7的工程化免疫细胞，其中所述启动子是组成型活性启动子。9.权利要求7的工程化免疫细胞，其中所述启动子是诱导型启动子。10.权利要求7或权利要求9的工程化免疫细胞，其中所述启动子响应于对T细胞激活信号传导有响应的元件。11.权利要求7、9和10中任一项的工程化免疫细胞，其中所述启动子包含NFAT的结合位点或NF-κB的结合位点。12.权利要求1至11中任一项的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是淋巴细胞。13.权利要求12的工程化免疫细胞，其中所述淋巴细胞是T细胞、B细胞或NK细胞。14.权利要求1至13中任一项的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是T细胞。15.权利要求14的工程化免疫细胞，其中所述T细胞是CD4+或CD8+。16.权利要求1至15中任一项的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是抗原呈递细胞。17.权利要求1至16中任一项的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是从受试者获得的原代细胞。18.权利要求17的工程化免疫细胞，其中所述受试者是人类受试者。19.权利要求1至18中任一项的工程化免疫细胞，其中与所述野生型IgSF结构域对所述至少一种细胞表面同源结合配偶体的结合亲和性相比，所述至少一个亲和性修饰的IgSF结构域具有增加的与所述至少一种细胞表面同源结合配偶体的结合亲和性。20.权利要求1至19中任一项的工程化免疫细胞，其中所述野生型IgSF结构域来自选自以下各项的家族的IgSF家族成员：B7家族、信号调节蛋白(SIRP)家族、髓细胞触发受体样蛋白(TREML)家族、癌胚抗原相关细胞粘附分子(CEACAM)家族、唾液酸结合Ig样凝集素(SIGLEC)家族、嗜乳脂蛋白家族、CD28家族、含有V集和免疫球蛋白结构域的蛋白(VSIG)家族、V集跨膜结构域(VSTM)家族、主要组织相容性复合物(MHC)家族、信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)家族、白细胞免疫球蛋白样受体(LIR)、结合素(Nec)家族、结合素样(NECL)家族、脊髓灰质炎病毒受体相关(PVR)家族、天然细胞毒性触发受体(NCR)家族、T细胞免疫球蛋白和粘蛋白(TIM)家族或杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)家族。21.权利要求1至20中任一项的工程化免疫细胞，其中所述野生型IgSF结构域来自选自以下项的IgSF成员：PD-L1、PD-L2、CD80、CD86、ICOS配体、B7-H3、B7-H4、CD28、CTLA4、PD-1、ICOS、BTLA、CD4、CD8-α、CD8-β、LAG3、TIM-3、CEACAM1、TIGIT、PVR、PVRL2、CD226、CD2、CD160、CD200、CD200R、NKp30、VISTA、VSIG3和VSIG8。22.权利要求1至21中任一项的工程化免疫细胞，其中所述野生型IgSF结构域是人类IgSF结构域。23.权利要求1至22中任一项的工程化免疫细胞，其中所述野生型IgSF结构域来自作为刺激性受体的配体的IgSF成员，其中所述刺激性受体包含共刺激信号传导结构域。24.权利要求1至23中任一项的工程化免疫细胞，其中所述至少一种细胞表面同源结合配偶体是T细胞上表达的刺激性受体，并且与所述野生型IgSF结构域对所述刺激性受体的结合亲和性相比，所述至少一个亲和性修饰的IgSF结构域具有增加的与所述刺激性受体的结合亲和性。25.权利要求23或权利要求24的工程化免疫细胞，其中所述刺激性受体为CD28、ICOS或CD226。26.权利要求1至22中任一项的工程化免疫细胞，其中所述野生型IgSF结构域来自作为抑制性受体的配体的IgSF成员，其中所述抑制性受体包含ITIM信号传导结构域。27.权利要求1至22和26中任一项的工程化免疫细胞，其中所述至少一种细胞表面同源结合配偶体是在T细胞上表达的抑制性受体，并且与所述野生型IgSF结构域对所述抑制性受体的结合亲和性相比，所述至少一个亲和性修饰的IgSF结构域具有增加的与所述抑制性受体的结合亲和性。28.权利要求25或权利要求26的工程化免疫细胞，其中：所述抑制性受体是PD-1、CTLA-4、LAG3、TIGIT、TIM-3、BTLA、VSIG3或VSIG8，并且所述至少一个亲和性修饰的IgSF结构域分别是PD-1、CTLA-4、LAG3、TIGIT、TIM-3、BTLA、VSIG3或VSIG8的配体的亲和性修饰的IgSF结构域；或所述抑制性受体的配体是PD-L1、PD-L2、B7-1、B7-2、MHCII类、CD155、CD112、CEACAM-1、GAL9或VISTA，并且所述至少一个亲和性修饰的IgSF结构域分别是PD-L1、PD-L2、B7-1、B7-2、MHCII类、CD155、CD112、CEACAM-1、GAL9或VISTA的亲和性修饰的IgSF结构域。29.权利要求26至28中任一项的工程化免疫细胞，其中所述抑制性受体是PD-1，并且所述至少一个亲和性修饰的IgSF结构域是PD-L1的亲和性修饰的IgSF，或是PD-L2的亲和性修饰的IgSF。30.权利要求1至28中任一项的工程化免疫细胞，其中所述亲和性修饰的IgSF结构域是亲和性修饰的CD155IgSF结构域或亲和性修饰的CD112IgSF结构域，并且所述至少一种细胞表面同源结合配偶体是CD226、TIGIT或CD112R。31.权利要求1至30中任一项的工程化免疫细胞，其中所述亲和性修饰的IgSF结构域与所述野生型IgSF结构域相差不多于十个氨基酸取代。32.权利要求1至30中任一项的工程化免疫细胞，其中所述亲和性修饰的IgSF结构域与所述野生型IgSF结构域相差不多于五个氨基酸取代。33.权利要求1至32中任一项的工程化免疫细胞，其中所述一个或多个亲和性修饰的IgSF结构域是或者包含亲和性修饰的IgV结构域、亲和性修饰...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·斯旺森，M·科尔纳克尔，
申请(专利权)人：高山免疫科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US