检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒及方法技术

本发明专利技术提供一种检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒及方法，该胶体金试剂盒包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和支撑垫。硝酸纤维素膜依次设置第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条和捕获试剂条。第一检测试剂条包被抗Ⅳ型胶原蛋白单克隆抗体，第二检测试剂条包被抗足糖萼蛋白单克隆抗体，第三检测试剂条包被抗中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体，第四检测试剂条包被抗肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体；捕获试剂条包被与金标垫上包被的单克隆抗体结合的二抗。本发明专利技术所述胶体金试剂盒实现同时定量检测早期糖尿病肾病的多种生物标志物，节省检测早期糖尿病肾病的成本，提高检测效率。

Colloidal gold kit and method for detecting biomarkers of diabetic nephropathy

【技术实现步骤摘要】
检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒及方法
本专利技术属于生物标志物检测领域，尤其涉及一种检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒及方法。
技术介绍
糖尿病肾病是糖尿病最严重的慢性微血管并发症之一，并最终引起终末肾衰竭，是糖尿病患者死亡的主要原因。然而，糖尿病肾病早期很难发现，且临床糖尿病肾病诊断黄金标准肌酐和蛋白尿也只能间接反映肾脏实质性病变，在正常蛋白尿期间无法诊断早期糖尿病肾病。通常当临床确诊时，糖尿病肾病患者错过了最佳的治疗时机，致使疾病急剧恶化，不可逆转。因此，针对糖尿病肾病早期损伤生物标志物早发现、早干预，具有重要的现实意义。目前研究发现了许多早期糖尿病肾病相关的生物标志物，有些生物标志物可以在此阶段释放到尿液中，尿液中的蛋白种类及含量的高低直接反映了泌尿系统，尤其是肾脏的健康状态，可以预测糖尿病肾病发生、发展及预后的情况。比如足糖萼蛋白(podocalyxin)，是足细胞损伤的早期生物标志物，并与疾病的发展正相关；Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)，在维持细胞基底膜正确装配方面具有重要的作用；肾病蛋白(Nephrin)，在裂空隔膜的装配中发挥重要的作用；肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)，是肾小球间质细胞损伤的生物标志物，可以预测糖尿病肾病的发生；中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、胱抑素C(cystatinC)、神经生长因子-1(Netrin-1)是肾小管近端损伤的生物标志物。对这些与疾病发生发展密切相关的生物标志物进行检测，有助于了解糖尿病肾病发生和发展，有效提高对肾病并发症的预测能力。目前检测早期糖尿病肾病的检测设备中常用的方法是采用酶联免疫技术(ELISA)，其技术缺点如下：检测设备体积大、成本高；检测时间长、重复性不好，不适合临床的快速筛查。然而，目前尚无利用多种生物标志物同时进行定量检测的设备，因此不能实现同时定量检测早期糖尿病肾病的多种生物标志物，从而无法为早期糖尿病肾病临床诊断提供依据。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒，旨在解决目前检测设备无法同时定量检测早期糖尿病肾病多种生物标志物的问题。为实现上述目的，本专利技术提供了一种检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒，所述胶体金试剂盒包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及支撑垫，其中，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫首尾相互重叠一段预设长度，所述硝酸纤维素膜上依次设置第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条以及捕获试剂条，其中：所述样品垫包括Ⅳ型胶原蛋白标准品、足糖萼蛋白标准品、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白标准品和肝型脂肪酸结合蛋白标准品；所述金标垫上包被有Ⅳ型胶原蛋白单克隆抗体、足糖萼蛋白单克隆抗体、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体和肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体；所述第一检测试剂条包被有抗Ⅳ型胶原蛋白单克隆抗体，所述第二检测试剂条包被有抗足糖萼蛋白单克隆抗体，所述第三检测试剂条包被有抗中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体，所述第四检测试剂条包被有抗肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体；所述捕获试剂条包被有与所述金标垫上包被的单克隆抗体结合的二抗。优选的，所述第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条和捕获试剂条还包括有用于定量生物样品液体的生物标志物的指示剂。优选的，所述指示剂为酶、辅基、荧光物质、生物发光物质或放射活性物质。优选的，所述第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条设置在所述硝酸纤维素膜的排列顺序是沿着样品垫上的样品层析方向并按照生物标志物分子量从大到小平行等间隔排列。优选的，所述预设长度为1.5～2mm，所述二抗为羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG。优选的，所述样品垫和金标垫均采用玻璃纤维膜或聚酯膜材料制成。优选的，所述支撑垫为一种硬质塑料底板或PVC支撑底板。优选的，所述吸水垫采用吸水能力的吸水纤维或吸水海绵材料制成，用于吸附并引流所述金标垫上的生物样品液体，使生物样品液体通过所述金标垫将金标抗体复合物沿着样品液体的层析方向吸附至所述硝酸纤维素膜上相应的检测试剂条位置或捕获试剂条的位置。本专利技术还提供一种使用胶体金试剂盒检测糖尿病肾病生物标志物的方法，该方法包括如下步骤：从受试者获得尿液作为生物样品液体；将生物样品液体倒入金标垫的加样位置处；生物样品液体的生物标志物与金标垫上的相应抗体结合形成胶体金抗体复合物；胶体金抗体复合物随着样品液体在硝酸纤维膜上层析流动，被第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条上的单克隆抗体结合；判断捕获试剂条上的颜色是否发生变化；如果捕获试剂条上的颜色发生变化，则将第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条和第四检测试剂条的颜色与样品垫的标准品颜色进行比较得出生物标志物的含量。优选的，所述的检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒的检测方法还包括如下步骤：如果捕获试剂条上的颜色发生变化，则确定胶体金试剂盒的第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条已失效。相较于现有技术，本专利技术所述检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒采用上述技术方案，达到如下技术效果：可以针对早期糖尿病肾病的多种早期生物标志物进行检测，解决单一生物标志物筛查谱狭窄及预见性较差的问题，可以节省检测成本，提高检测准确性。此外，所述胶体金试剂盒可以结合定量检测仪一起使用实现多种生物标志物的同时定量检测，为早期糖尿病肾病临床诊断提供依据，提高检测效率。附图说明图1是本专利技术检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒较佳实施例的结构示意图；图2是使用本专利技术胶体金试剂盒检测糖尿病肾病生物标志物的方法较佳实施例的流程示意图。本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式为更进一步阐述本专利技术为达成上述目的所采取的技术手段及功效，以下结合附图及较佳实施例，对本专利技术的具体实施方式、结构、特征及其功效进行详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。需要说明的是，本专利技术检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒适合检测以下四种生物标志物，通过检测这四种生物标志物的含量，为糖尿病肾病早期诊断提供辅助。足糖萼蛋白(podocalyxin)是O连接的跨膜糖蛋白，位于肾脏足细胞足突顶膜区，是肾小球基底膜电荷屏障的主要成分，保证肾小球滤过膜电荷屏障的完整性，在肾脏滤过功能中发挥着重要作用。Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)是肾小球基底膜及系膜基质的重要组称成分，在肾小球基底膜滤过完整性中发挥着重要作用。糖尿病人高血糖刺激产生Ⅳcollagen，若增加的Ⅳcollagen沉积到糖尿病人肾脏肾小球系膜基质上，会产生弥散性肾小球硬化症；若沉积到肾小球基底膜或肾小管上，会导致系膜扩增、肾小球间质化和肾小管损伤。肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)在肾近端小管细胞内表达，参与肾小管间质细胞能量产生及代谢过程。在糖尿病肾病并发过程中，尿液中L-FABP表达水平与尿白蛋白浓度成正相关，预示着尿液中L-FABP是肾小管间质细胞损伤的生物标志物。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是一种铁离子结合蛋白，在肾小管内本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒，其特征在于，所述胶体金试剂盒包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及支撑垫，其中，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫首尾相互重叠一段预设长度，所述硝酸纤维素膜上依次设置第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条以及捕获试剂条，其中：所述样品垫包括Ⅳ型胶原蛋白标准品、足糖萼蛋白标准品、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白标准品和肝型脂肪酸结合蛋白标准品；所述金标垫上包被有Ⅳ型胶原蛋白单克隆抗体、足糖萼蛋白单克隆抗体、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体和肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体；所述第一检测试剂条包被有抗Ⅳ型胶原蛋白单克隆抗体，所述第二检测试剂条包被有抗足糖萼蛋白单克隆抗体，所述第三检测试剂条包被有抗中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体，所述第四检测试剂条包被有抗肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体；所述捕获试剂条包被有与所述金标垫上包被的单克隆抗体结合的二抗。

【技术特征摘要】
1.一种检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒，其特征在于，所述胶体金试剂盒包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及支撑垫，其中，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫首尾相互重叠一段预设长度，所述硝酸纤维素膜上依次设置第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条以及捕获试剂条，其中：所述样品垫包括Ⅳ型胶原蛋白标准品、足糖萼蛋白标准品、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白标准品和肝型脂肪酸结合蛋白标准品；所述金标垫上包被有Ⅳ型胶原蛋白单克隆抗体、足糖萼蛋白单克隆抗体、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体和肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体；所述第一检测试剂条包被有抗Ⅳ型胶原蛋白单克隆抗体，所述第二检测试剂条包被有抗足糖萼蛋白单克隆抗体，所述第三检测试剂条包被有抗中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体，所述第四检测试剂条包被有抗肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体；所述捕获试剂条包被有与所述金标垫上包被的单克隆抗体结合的二抗。2.如权利要求1所述的检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒，其特征在于，所述第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条和捕获试剂条还包括有用于定量生物样品液体的生物标志物的指示剂。3.如权利要求2所述的检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒，其特征在于，所述指示剂为酶、辅基、荧光物质、生物发光物质或放射活性物质。4.如权利要求1所述的检测糖尿病肾病生物标志物的胶体金试剂盒，其特征在于，所述第一检测试剂条、第二检测试剂条、第三检测试剂条、第四检测试剂条设置在所述硝酸纤维素膜的排列顺序是沿着样品垫上的样品层析方向并按照生物标志物分子量从大到小平行等间隔排列。5.如权利要求1所述的检测糖尿病...

【专利技术属性】
技术研发人员：哈瑞·赫斯奥夫，卢卡·穆桑特，阿尔贝托·贝尼托·马丁，马扬克·萨拉斯瓦特，多洛塔·艾娃·塔塔奇，瑞塔·凯撒·赫斯奥夫，张贯京，邹和群，葛新科，肖应芬，唐小浪，刘义，
申请(专利权)人：深圳市贝沃德克生物技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44