辣木叶UPLC指纹图谱建立方法及其UPLC指纹图谱技术

本发明专利技术公开了辣木叶UPLC指纹图谱的建立方法及其UPLC指纹图谱，所建立的方法包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备；(2)供试样品溶液的制备；(3)超高效液相色谱法测定条件的建立及测定。上述辣木叶UPLC指纹图谱的建立方法专属性强、操作简便、方法学考察试验证明其具有良好的稳定性、重复性和精密度，可较全面的检测辣木叶中的主要成分，为药材质量控制提供科学参考。

【技术实现步骤摘要】
辣木叶UPLC指纹图谱建立方法及其UPLC指纹图谱
本专利技术涉及一种辣木叶的质量检测方法，特别是涉及辣木叶UPLC指纹图谱的建立及其UPLC指纹图谱。
技术介绍
辣木叶为辣木科植物辣木(MoringaoleiferaLam.)的干燥叶，生长在非洲东部及印度北部，较常食用的品种有印度传统辣木、印度改良种辣木和非洲辣木。我国于20世纪60年代初开始引种，目前在云南、广东、广西、海南、福建和台湾等地均有种植。辣木的叶子含有丰富的营养成分，含钙量是牛奶的4倍，还含有很高的钾、铁、锌等微量元素和矿物质等，是一种含全营养素的功能食品，在2012年8月被批准为新资源食品。辣木叶中的化学成分有黄酮及其苷、酚类及其苷、木脂素类、核苷和有机酸类成分(孙一蕊等.中国药房，2012，23(31)：2965-2968.)辣木叶民间常用其治疗糖尿病、高血压、便秘等病症。文献报道辣木叶具有降血糖、降血压、降血脂、抗动脉粥样硬化、保肝、神经系统保护、抗氧化等多种药理作用(许敏等.食品科学，2016，37(23)：291-301)。其中黄酮类化合物为主要成分。近年来，市场上出现了许多辣木叶产品，但多为粗加工产品，附加值低，质量参差不齐，无适当的质量控制方法，因此，对辣木叶中的特征成分或主要成分进行质量控制迫在眉睫。金玲等人(金玲等.中国实验方剂学杂志，2017，23(8)：86-91)采用HPLC法测定5个不同产地12批辣木叶的指纹图谱，建立了辣木叶HPLC指纹图谱共有模式，标定14个共有峰，指认了三个成分峰，分别为没食子酸、芦丁和槲皮苷。被指认的三个成分峰为植物中常见的化合物，并不是辣木叶的特征性成分或主要成分，在辣木叶的鉴别和质量控制方面有一定局限性。因此，有必要建立一种快速、可以全面反映辣木叶内在质量的指纹图谱方法及其指纹图谱。超高效液相色谱(UPLC)技术已经成为一种常规的分析方法，是在传统HPLC系统基础上开发的，充分利用了小粒度色谱柱的优势，配备了超高压液相色谱泵和高速、灵敏的检测器，使色谱的分离度、速度和灵敏度均达到了新的高度，极大的缩短了分析时间，改善了色谱峰型，在很大程度上促进了中药及天然药物质量控制领域的发展。采用超高效液相色谱法建立辣木叶的指纹图谱，可为辣木叶的质量控制提供有效的方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种辣木叶UPLC指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，通过对辣木叶UPLC指纹图谱的研究，得到一种比较好的辣木叶质量控制方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备精密称取腺苷、L-苯丙氨酸、5-咖啡酰奎宁酸、L-色氨酸、4-咖啡酰奎宁酸、维采宁-2、牡荆素、异牡荆素、异槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、紫云英苷和山奈酚-3-O-(6″-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷，分别加入甲醇溶液稀释配制成浓度为0.05～1.0mg/mL的溶液，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。(2)供试品溶液的制备精确称取辣木叶细粉，加入一定比例的溶剂，提取方法采用加热回流或者超声提取，放至室温，补足重量。静置，取上清液，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。(3)色谱条件及系统适用性试验色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱检测波长：205-280nm流速：0.3-0.5mL/min柱温：30-45℃进样量：0.5-5.0μLa流动相：流动相A为三氟乙酸体积百分比为0.005％-0.02％的水溶液或者为甲酸体积百分比为0.05％-0.2％的水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0分钟时，流动相A的体积百分比为95％，流动相B体积百分比为5％；10分钟时，流动相A的体积百分比为87％，流动相B体积百分比为13％；20分钟时，流动相A的体积百分比为82％，流动相B体积百分比为18％；25分钟时，流动相A的体积百分比为70％，流动相B体积百分比为30％；b流动相：流动相A为三氟乙酸体积百分比为0.005％-0.02％的水溶液或者为甲酸体积百分比为0.05％-0.2％的水溶液。流动相B为甲醇，梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0分钟时，流动相A的体积百分比为95％，流动相B体积百分比为5％；12分钟时，流动相A的体积百分比为82％，流动相B体积百分比为18％；14分钟时，流动相A的体积百分比为70％，流动相B体积百分比为30％；30分钟时，流动相A的体积百分比为67％，流动相B体积百分比为33％；(4)测定：将步骤(2)的供试品溶液照超高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。(5)进一步的，步骤(3)中所述色谱柱为AgilentEclipsePlusC18RRHD柱，规格为2.1×100mm，1.8～2.1μm；AgilentEclipseXDBC18柱，规格为3.0×100mm，1.8～2.1μm；WatersACQUITYUPLCHSST3柱，规格为2.1×100mm，1.8～2.1μm。上述辣木叶UPLC指纹图谱建立方法得到的指纹图谱中有15个特征共有峰，其中10号峰被选为参照峰；a当选用乙腈-0.01％三氟乙酸水为流动相时，数据采集时间为25分钟，具体如下：1号峰为腺苷，保留时间为1.237分钟，峰面积为200568；2号峰为L-苯丙氨酸，保留时间为2.034分钟，峰面积为318903；3号峰为5-咖啡酰奎宁酸，保留时间为3.281分钟，峰面积为202142；4号峰为L-色氨酸，保留时间为3.874分钟，峰面积为246032；5号峰所对应的成分有待确认，保留时间为5.880分钟，峰面积为176491；6号峰为4-咖啡酰奎宁酸，保留时间为6.290分钟，峰面积为175833；7号峰为维采宁-2，保留时间为10.228分钟，峰面积为260836；8号峰为牡荆素，保留时间为14.663分钟，峰面积为69981；9号峰为异牡荆素，保留时间为15.055分钟，峰面积为108018；10号峰为异槲皮素，保留时间为15.623分钟，峰面积为1091375；11号峰为槲皮素-3-O-(6″-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷，保留时间为17.184分钟，峰面积为374728；12号峰所对应的成分有待确认，保留时间为18.178分钟，峰面积为34760；13号峰为紫云英苷，保留时间为18.930分钟，峰面积为219008；14号峰所对应的成分有待确认，保留时间为20.104分钟，峰面积为45417；15号峰为山奈酚-3-O-(6″-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷，保留时间为21.360分钟，峰面积为105530。b当选用甲醇-0.01％三氟乙酸水为流动相时，数据采集时间为30分钟，具体如下：1号峰为腺苷，保留时间为1.887分钟，峰面积为203680；2号峰为L-苯丙氨酸，保留时间为3.461分钟，峰面积为302700；3号峰为5-咖啡酰奎宁酸，保留时间为5.419分钟，峰面积为193354；4号峰为L-色氨酸，保留时间为6.309分钟，峰面积为195124；5号峰所对应的成分有待确认，保留时间为8.484分钟，峰面积为167438；6号峰为4-咖啡酰奎宁酸，保留时间为10.492分钟，峰面积为164862；7号峰为维采宁-2，保留时间为15.449分钟，峰面积为246648；8号峰为牡荆素，保留时间为17.659分钟，峰面积为67844；9号本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种辣木叶UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备精密称取腺苷、L‑苯丙氨酸、5‑咖啡酰奎宁酸、L‑色氨酸、4‑咖啡酰奎宁酸、维采宁‑2、牡荆素、异牡荆素、异槲皮素、槲皮素‑3‑O‑(6″‑丙二酰基)‑β‑D‑葡萄糖苷、紫云英苷和山奈酚‑3‑O‑(6″‑丙二酰基)‑β‑D‑葡萄糖苷，分别加入甲醇溶液稀释配制成浓度为0.05～1.0mg/mL的溶液，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。(2)供试品溶液的制备精确称取辣木叶细粉，加入溶剂，称重，加热回流或者超声提取，放至室温，补足重量。静置，取上清液，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。(3)色谱条件及系统适用性试验色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱检测波长：205‑280nm流速：0.3‑0.5mL/min柱温：30‑45℃进样量：0.5‑5.0μL流动相：流动相A为三氟乙酸体积百分比为0.005％‑0.02％的水溶液或者为甲酸体积百分比为0.05％‑0.2％的水溶液，流动相B为乙腈或甲醇，梯度洗脱。(3)测定：将步骤(2)的样品照超高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

【技术特征摘要】
2018.04.02 CN 20181028709961.一种辣木叶UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备精密称取腺苷、L-苯丙氨酸、5-咖啡酰奎宁酸、L-色氨酸、4-咖啡酰奎宁酸、维采宁-2、牡荆素、异牡荆素、异槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、紫云英苷和山奈酚-3-O-(6″-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷，分别加入甲醇溶液稀释配制成浓度为0.05～1.0mg/mL的溶液，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。(2)供试品溶液的制备精确称取辣木叶细粉，加入溶剂，称重，加热回流或者超声提取，放至室温，补足重量。静置，取上清液，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。(3)色谱条件及系统适用性试验色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱检测波长：205-280nm流速：0.3-0.5mL/min柱温：30-45℃进样量：0.5-5.0μL流动相：流动相A为三氟乙酸体积百分比为0.005％-0.02％的水溶液或者为甲酸体积百分比为0.05％-0.2％的水溶液，流动相B为乙腈或甲醇，梯度洗脱。(3)测定：将步骤(2)的样品照超高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。2.根据权利要求1所述的辣木叶UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤(3)中所述色谱柱为AgilentEclipsePlusC18RRHD柱，规格为2.1×100mm,1.8～2.1μm；AgilentEclipseXDBC18柱，规格为3.0×100mm,1.8～2.1μm；WatersACQUITYUPLCHSST3柱，规格为2.1×100mm，1.8～2.1μm。3.根据权利要求1所述的辣木叶UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述流动相为B为乙腈，所述梯度洗脱程序为：0分钟时，流动相A的体积百分比为95％，流动相B体积百分比为5％；10分钟时，...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶文才，范春林，王英，许琳，曾瑚瑚，刘辉，张晓琦，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44