增强肺炎链球菌多糖-蛋白缀合物的免疫原性制造技术

本发明专利技术提供了具有一种或多种多糖‑蛋白缀合物的免疫原性组合物，其中来自肺炎链球菌细菌荚膜的一种或多种多糖在非质子溶剂如二甲基亚砜(DMSO)中与载体蛋白缀合。本发明专利技术还提供了对肺炎球菌多糖蛋白缀合物疫苗提供增强的免疫应答的方法，其包括向人受试者施用包含在DMSO条件下制备的多糖‑蛋白缀合物的免疫原性组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】增强肺炎链球菌多糖-蛋白缀合物的免疫原性
本专利技术提供了免疫原性组合物，其包含至少一种在非质子溶剂如二甲基亚砜(DMSO)中使用还原胺化与CRM197缀合的肺炎链球菌多糖。本专利技术还提供了增强具有一种或多种多糖-蛋白缀合物的免疫原性组合物的免疫原性的方法，其中使用在非质子溶剂如DMSO中进行的还原胺化将来自肺炎链球菌细菌荚膜的一种或多种多糖与载体蛋白缀合。
技术介绍
肺炎链球菌是一种革兰氏阳性细菌，是婴幼儿中侵袭性细菌性疾病(如肺炎、菌血症、脑膜炎和中耳炎)的最常见原因。肺炎球菌用化学连接的多糖包封，其赋予血清型特异性。已有超过90种已知的肺炎球菌血清型，并且荚膜是肺炎球菌的主要毒力决定因素，因为荚膜不仅保护细菌的内表面免受补体影响，而且本身具有很差的免疫原性。多糖是T细胞非依赖性抗原，不能在MHC分子上加工或呈递以与T细胞相互作用。然而，它们可以通过另一种机制刺激免疫系统，该机制涉及B细胞上表面受体的交联。2岁以下的儿童不会对大多数多糖疫苗产生免疫反应，因此有必要通过化学缀合至蛋白质载体而使多糖具有免疫原性。将多糖(T细胞非依赖性抗原)与蛋白质(T细胞依赖性抗原)偶联，赋予多糖T细胞依赖性的性质，包括同种型转换、亲和力成熟和记忆诱导。已经有许多缀合反应用于将多糖共价连接至蛋白质。三种较常用的方法包括：1)还原胺化，其中反应的一个组分上的醛或酮基团与另一个组分上的氨基或酰肼基团反应，并且形成的C＝N双键随后被还原剂还原为C-N单键；2)氰基化缀合，其中多糖被溴化氰(CNBr)或1-氰基-4-二甲基氨基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化以将氰酸酯基团引入羟基，其在加入蛋白质组分后与氨基或酰肼形成共价键；和3)碳二亚胺反应，其中碳二亚胺活化缀合反应的一个组分上的羧基，并且活化的羰基与另一组分上的氨基或酰肼基反应。这些反应也经常用于在缀合反应之前活化缀合物的组分。还原胺化已被用于缀合肺炎链球菌多糖。参见，例如，美国专利号8,192,746，美国专利申请公开号20170021006以及国际专利申请公开号WO2011/110381和WO2015/110941。还原胺化包括两个步骤：(1)抗原的氧化，和(2)还原抗原和载体蛋白以形成缀合物。还原步骤可以在含水溶剂或非质子溶剂如DMSO中进行。参见，例如，国际专利申请公开号WO2016/113644。
技术实现思路
本专利技术提供了免疫原性组合物，其包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6C，6D，7B，7C，8，9N，9V，11A，12F，14，15A，15C，16F，17F，18C，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35A，35B，35F和38中的一种或多种的多糖，其中将所述多糖缀合至所述载体蛋白的缀合反应是在非质子溶剂中。在一个实施方式中，对于具有相同血清型的组合物，与在水性条件下制备的相同的一种或多种血清型相比，在非质子溶剂中制备的一种或多种血清型具有增加的免疫原性。本专利技术提供了免疫原性组合物，其包含由与载体蛋白缀合的肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6C，6D，7B，7C，8，9N，9V，11A，12F，14，15A，15C，16F，17F，18C，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35A，35B，35F和38中的一种或多种制备的多糖蛋白缀合物，其中所述多糖蛋白缀合物是通过包括在非质子溶剂中将多糖与载体蛋白质缀合的步骤的方法制备的。本专利技术还提供了将来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6C，6D，7B，7C，8，9N，9V，11A，12F，14，15A，15C，16F，17F，18C，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35A，35B，35F或38的多糖缀合至载体蛋白的方法，其包括在非质子溶剂中将多糖与载体蛋白缀合的步骤。本专利技术还提供用免疫原性组合物治疗受试者的方法，所述免疫原性组合物包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6C，6D，7B，7C，8，9N，9V，11A，12F，14，15A，15C，16F，17F，18C，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35A，35B，35F或38的一种或多种多糖，其中所述多糖在非质子溶剂中与载体蛋白缀合。在某些实施方式中，来自肺炎链球菌血清型1，3，4，5，9V，11A，12F和14中的一种或多种的多糖在非质子溶剂中与载体蛋白缀合。在某些实施方式中，来自肺炎链球菌血清型2，6C，6D，7B，7C，8，9N，15A，15C，16F，17F，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35A，35B，35F和38中的一种或多种的多糖在非质子溶剂中与载体蛋白缀合。在某些实施方式中，来自肺炎链球菌血清型3和18C中的一种或多种的多糖在非质子溶剂中与载体蛋白缀合。在该实施方式的一个方面中，来自肺炎链球菌血清型3的多糖在非质子溶剂中与载体蛋白缀合。在该实施方式的一个方面中，来自肺炎链球菌血清型18C的多糖在非质子溶剂中与载体蛋白缀合。在某些实施方式中，用于将多糖与载体蛋白缀合的缀合反应是还原胺化。在某些实施方式中，非质子溶剂是DMSO。在某些实施方式中，载体蛋白是CRM197。在某些实施方式中，在DMSO中制备的缀合物具有大于5.0的赖氨酸损失值。在一个方面中，在DMSO中制备的缀合物具有7.0和18.0之间的赖氨酸损失值，包括端值。在某些实施方式中，免疫原性组合物还包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型6A，6B，7F，10A，15B，19A，19F，22F，23F和33F中的一种或多种的多糖，其中由此将多糖与载体蛋白缀合的缀合反应是在非质子溶剂中。在该实施方式的某些方面中，缀合反应是还原胺化。在某些方面中，非质子溶剂是DMSO。在某些方面中，载体蛋白是CRM197。在一个方面中，免疫原性组合物包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型6A，6B，7F，18C，19A，19F和23F的多糖，其中由此将来自肺炎链球菌血清型6A，6B，7F，18C，19A，19F或23F的多糖与载体蛋白缀合的缀合反应是在非质子溶剂中。在某些方面中，多糖来自肺炎链球菌血清型18C，19A，19F或23F。在某些实施方式中，本专利技术的免疫原性组合物还包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6A，6B，6C，6D，7B，7C，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15A，15B，15C，16F，17F，18C，19A，19F，20，21，22A，22F，23A，23B，23F，24F，27，28A，31，33F，34，35A，35B，35F和38中的一种或多种的多糖，其中由此将来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6A，6B，6C，6D，7B，7C，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15A，15B，15C，16F，17F，18C，19A，19F，20，21，22A，22F，23A，23B，23F，24F，27，28A，31，33F，34，35A，35B，35F或38的多糖与载体蛋白缀合的缀合反本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.免疫原性组合物，其包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6C，6D，7B，7C，8，9N，9V，11A，12F，14，15A，15C，16F，17F，18C，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35A，35B，35F和38中的一种或多种的多糖，其中将所述多糖缀合至所述载体蛋白的缀合反应是在非质子溶剂中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.02.24 US 62/463,216;2017.09.07 US 62/555,4441.免疫原性组合物，其包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6C，6D，7B，7C，8，9N，9V，11A，12F，14，15A，15C，16F，17F，18C，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35A，35B，35F和38中的一种或多种的多糖，其中将所述多糖缀合至所述载体蛋白的缀合反应是在非质子溶剂中。2.权利要求1所述的免疫原性组合物，其中将来自肺炎链球菌血清型1，3，4，5，9V，11A，12F和14中的一种或多种的多糖与载体蛋白在非质子溶剂中缀合。3.权利要求1所述的免疫原性组合物，其中将来自肺炎链球菌血清型2，6C，6D，7B，7C，8，9N，15A，15C，16F，17F，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35B，35F和38中的一种或多种的多糖与载体蛋白在非质子溶剂中缀合。4.权利要求1所述的免疫原性组合物，其中将来自肺炎链球菌血清型3和18C中的一种或多种的多糖与载体蛋白在非质子溶剂中缀合。5.权利要求4所述的免疫原性组合物，其中将来自肺炎链球菌血清型3的多糖与载体蛋白在非质子溶剂中缀合。6.权利要求4所述的免疫原性组合物，其中将来自肺炎链球菌血清型18C的多糖与载体蛋白在非质子溶剂中缀合。7.权利要求1至6中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述缀合反应是还原胺化。8.权利要求1至7中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述非质子溶剂是二甲基亚砜(DMSO)。9.权利要求1至8中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述载体蛋白是CRM197。10.权利要求8或9所述的免疫原性组合物，其中在DMSO中制备的所述缀合物具有大于5.0的赖氨酸损失值。11.权利要求10所述的免疫原性组合物，其中在DMSO中制备的所述缀合物具有7.0至18.0之间的赖氨酸损失值，包括端值。12.权利要求1-11中任一项所述的免疫原性组合物，其还包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型6A，6B，7F，10A，15B，19A，19F，22F，23F和33F中的一种或多种的多糖，其中将所述多糖缀合至所述载体蛋白的缀合反应是在非质子溶剂中。13.权利要求12所述的免疫原性组合物，其中所述缀合反应是还原胺化。14.权利要求12或13所述的免疫原性组合物，其中所述非质子溶剂是DMSO。15.权利要求12-14中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述载体蛋白是CRM197。16.权利要求12-15中任一项所述的免疫原性组合物，其包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型6A，6B，7F，18C，19A，19F和23F的多糖，其中将来自肺炎链球菌血清型6A，6B，7F，18C，19A，19F和23F的所述多糖缀合至所述载体蛋白的缀合反应是在非质子溶剂中。17.权利要求1-16中任一项所述的免疫原性组合物，其还包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6A，6B，6C，6D，7B，7C，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15A，15B，15C，16F，17F，18C，19A，19F，20，21，22A，22F，23A，23B，23F，24F，27，28A，31，33F，34，35A，35B，35F和38中的一种或多种的多糖，其中将来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6A，6B，6C，6D，7B，7C，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15A，15B，15C，16F，17F，18C，19A，19F，20，21，22A，22F，23A，23B，23F，24F，27，28A，31，33F，34，35B，35F或38的所述多糖缀合至所述载体蛋白的缀合反应是在水性溶剂中。18.权利要求17所述的免疫原性组合物，其中在DMSO条件下使用还原胺化制备35-100％之间的所述血清型，并在水性条件下制备剩余的多糖蛋白缀合物。19.权利要求17所述的免疫原性组合物，其基本上由与CRM197多糖缀合的来自肺炎链球菌血清型1，3，4，5，6A，6B，7F，9V，14，18C，19A，19F，22F，23F和33F的多糖组成，其中肺炎链球菌血清型6A，6B，7F，18C，19A，19F和23F的缀合反应是在非质子溶剂中，其中所述非质子溶剂是DMSO，并且肺炎链球菌血清型1，3，4，5，9V，14，22F和33F的缀合反应是在水性溶剂中，并且还包含约0.2％w/v的PS-20。20.一种用于在人类受试者中诱导保护性免疫应答的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1-19中任一项所述的免疫原性组合物。21.权利要求20所述的方法，其中所述受试者为50岁或更大。22.权利要求20所述的方法，其中所述受试者是免疫受损的。23.一种用于向肺炎球菌多糖蛋白缀合物疫苗提供增强的免疫应答的方法，其包括向动物受试者施用包含多糖-蛋白缀合物的免疫原性组合物，所述多糖-蛋白缀合物包含与一种或多种载体蛋白缀合的来自第一组的两种或更多种肺炎球菌血清型的肺炎链球菌荚膜多糖，其中来自第一组的所述两种或更多种多糖-蛋白缀合物是在二甲基亚砜(DMSO)条件下使用还原胺化制备的...

【专利技术属性】
技术研发人员：何健，J·E·麦克奈尔，W·J·史密斯，M·A·温特斯，J·G·乔伊斯，C·阿拜古纳瓦达纳，L·穆西，H·普贾尔，J·M·斯金纳，E·温，P·麦克休，J·M·威廉姆斯，C·兰卡斯特，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：发明
国别省市：美国,US