一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法技术

本发明专利技术公开了一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法，所述方法包括如下步骤：(1)在克氏原螯虾繁殖季节的规模化池塘中，用常规捕捞工具对抱卵亲虾进行批量捕捞和收集；(2)用灭菌生理盐水冲洗抱卵亲虾，将抱卵亲虾放在甲醛调配而成的消毒液中浸泡10分钟；(3)使用无菌容器作为苗床，用无菌镊子从亲虾腹部附肢上剥离相对发育早期的虾卵，放在准备好的苗床中，以灭菌淡水作为循环水源，灌入苗床中，浸没虾卵；(5)对环境因子进行调控，全程保持水源的微流动，注意水流不要过大防止冲散虾卵，及时镜检，并挑出死亡的虾卵；(6)14‑21日，虾卵便孵化成仔虾。本发明专利技术方法可以摆脱仔虾对亲虾抱卵生长的依赖，提高孵化率。

A method for in vitro culture of early crayfish eggs

【技术实现步骤摘要】
一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法
本专利技术涉及水产养殖
，具体涉及一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法。
技术介绍
当前我国淡水小龙虾(学名克氏原螯虾Procambarusclarkii，又称小龙虾)养殖产业发展呈现出井喷式增长态势。据不完全统计，2007至2017年，全国小龙虾养殖产量由约26.6万吨增加到约112.97万吨，增长约324％，全国养殖面积超过1000万亩。数据显示，2017年小龙虾经济总产值约2685亿元，全产业链从业人员已近500万人。小龙虾是高蛋白、低脂肪的世界性食用虾类，产量达到全世界淡水龙虾产量70％以上。该虾原产中、南美洲和墨西哥东北部，于二十世纪初引入我国。目前已归化为我国的一个水产物种，成为淡水虾类中一个重要经济品种，也是我国出口创汇的重要水产品之一。我国小龙虾人工养殖始于1980年代，巨大的消费需求和市场潜力带动了产业链加工、流通等各个环节的全面发展。小龙虾养殖产业现已形成全国性分布，主产区在长江中下游流域的湖北、江苏、安徽等地区，其产量占全国总产量的95％。随着养殖规模日益扩大，人工干预性腺同步化、人工育苗生产等关键技术瓶颈已严重制约产业发展。我国对于小龙虾(克氏原螯虾)繁育生物学研究起步较晚，有效开展小龙虾繁育机制研究日益迫切。克氏原螯虾卵巢发育持续时间较长，通常在交配以后，视水温不同，卵巢需继续发育一段时间，待成熟后产卵。产卵结束后尾扇弯至腹下，并展开游泳足抱住卵粒，以防止散失，随后产出黑色胶汁，将受精卵附着在游泳足的刚毛上，黏附在雌虾的腹部，称为“抱卵”。克氏原螯虾受精卵为圆球形，晶莹光亮，通过一个柄与游泳足相连。抱卵虾的腹部不停地摆动，保证受精卵孵化所需的氧气。刚产出的卵浅橘红色，直径1.5-2.5毫米，随着胚胎发育的进展，颜色逐渐加深，呈现褐色。每只抱卵虾平均抱卵量在300-600只。目前关于克氏原螯虾虾苗的培育方法主要是待虾卵孵化之后，再将亲虾和仔虾分离，之后对仔虾进行单独养殖。虾卵对抱卵亲虾的依赖性强，不可控因素多，孵化率很低。而且由于虾卵孵化时间不同步，使得仔虾发育不同步，因而导致仔虾规格不齐，干扰生产。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本专利技术申请人提供了一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法。本专利技术方法可以摆脱仔虾对亲虾抱卵生长的依赖，提高孵化率。本专利技术的技术方案如下：一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法，所述方法包括如下步骤：(1)在克氏原螯虾繁殖季节的规模化池塘中，用常规捕捞工具对抱卵亲虾进行批量捕捞和收集；(2)用灭菌生理盐水冲洗抱卵亲虾，将抱卵亲虾放在甲醛调配而成的消毒液中浸泡10分钟；(3)对亲虾附着的虾卵进行筛选和分拣，选择受精作用之后处在相对发育早期的虾卵，此时的虾卵呈透明圆形，直径1.5-3mm，处于组织分化加速阶段；(4)使用无菌容器作为苗床，用无菌镊子从亲虾腹部附肢上剥离虾卵，放在准备好的苗床中，以灭菌淡水作为循环水源，灌入苗床中，浸没虾卵；(5)对环境因子进行调控，浸泡深度为2-5cm，水质pH值维持在6.8-8.2，水温控制在18℃-25℃，每日光照6-8小时，全程保持水源的微流动，注意水流不要过大防止冲散虾卵，及时镜检，并挑出死亡的虾卵；(6)14-21日，虾卵便孵化成仔虾。步骤(1)中所述繁殖季节为每年的3-5月份。步骤(2)中所述消毒液中甲醛的质量浓度为0.5-1％。步骤(3)中所述虾卵为受精之后7-14天之间的虾卵。步骤(4)中所述无菌容器为大型培养皿或玻璃缸，容器底部铺设有基底。所述基底为医用玻璃棉毡；玻璃棉毡属于人造无机纤维，存在大量微小的孔隙，是一种多孔性棉状材料，用于培养基底的玻璃棉毡裁剪成1mm×10mm×10mm的小方块，均匀铺设在容器底部，保持底部平整，使用之前灭菌，作为低龄虾卵的孵化苗床。本专利技术有益的技术效果在于：1、孵化迅速，避免由于亲虾受到攻击导致的胚胎死亡，孵化率较高；虾卵的孵化率为50-70％；2、不受亲虾母体的限制，可孵化量大，仔虾规格整齐，研究价值高；3、培养成本占地小，用水量小，管理成本低，培育过程全程可控；4、没有运输条件的限制，方便运输。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术进行具体描述。实施例1：一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法，所述方法包括如下步骤：(1)在克氏原螯虾繁殖季节(4月中旬)的规模化池塘中，用常规捕捞工具对抱卵亲虾进行批量捕捞和收集。(2)用灭菌生理盐水轻缓冲洗抱卵亲虾3次，除去体表黏附的淤泥浮游生物等，之后将抱卵亲虾放在0.5％甲醛消毒液中浸泡10分钟；除去体表细菌、芽孢、真菌等。(3)对虾卵进行筛选和分拣，选择受精卵发育较早期的虾卵，即受精作用之后7-14天的虾卵，此时的虾卵呈透明圆形，直径1-2mm。(4)用无菌镊子从亲虾腹部附肢上剥离虾卵，放在上述准备好的无菌苗床中；使用无菌玻璃缸作为苗床，底部铺设有医用玻璃棉毡作为基底。玻璃棉以裁剪成1mm×10mm×10mm的小方块，均匀铺设在容器底部，保持底部平整，使用之前灭菌。(5)实施对环境因子的调控，浸泡深度为3cm，水质pH值维持在6.8，水温控制在18℃，每日光照8小时，全程保持水源的微流动。及时镜检，并挑出死亡的虾卵。(6)18日，虾卵孵化成仔虾，虾卵的孵化率为66％。实施例2：一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法，所述方法包括如下步骤：(1)在克氏原螯虾繁殖季节(5月中旬)的规模化池塘中，用常规捕捞工具对抱卵亲虾进行批量捕捞和收集。(2)用灭菌生理盐水轻缓冲洗抱卵亲虾3次，除去体表黏附的淤泥浮游生物等，之后将抱卵亲虾放在1％甲醛消毒液中浸泡10分钟；除去体表细菌、芽孢、真菌等。(3)对虾卵进行筛选和分拣，选择受精卵发育较早期的虾卵，即受精作用之后7-14天的虾卵，此时的虾卵呈透明圆形，直径2-3mm。(4)用无菌镊子从亲虾腹部附肢上剥离虾卵，放在上述准备好的无菌苗床中，使用无菌玻璃缸作为苗床，底部铺设有医用玻璃棉毡作为基底。玻璃棉以裁剪成1mm×10mm×10mm的小方块，均匀铺设在容器底部，保持底部平整，使用之前灭菌。(5)实施对环境因子的调控，浸泡深度为5cm，水质pH值维持在7.2，水温控制在22℃，每日光照6小时，全程保持水源的微流动。及时镜检，并挑出死亡的虾卵。(6)21日，虾卵孵化成仔虾，虾卵的孵化率为71％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)在克氏原螯虾繁殖季节的规模化池塘中，用常规捕捞工具对抱卵亲虾进行批量捕捞和收集；(2)用灭菌生理盐水冲洗抱卵亲虾，将抱卵亲虾放在甲醛调配而成的消毒液中浸泡10分钟；(3)对亲虾附着的虾卵进行筛选和分拣，选择受精作用之后处在相对发育早期的虾卵，此时的虾卵呈透明圆形，直径1.5‑3mm，处于组织分化加速阶段；(4)使用无菌容器作为苗床，用无菌镊子从亲虾腹部附肢上剥离虾卵，放在准备好的苗床中，以灭菌淡水作为循环水源，灌入苗床中，浸没虾卵；(5)对环境因子进行调控，浸泡深度为2‑5cm，水质pH值维持在6.8‑8.2，水温控制在18℃‑25℃，每日光照6‑8小时，全程保持水源的微流动，注意水流不要过大防止冲散虾卵，及时镜检，并挑出死亡的虾卵；(6)14‑21日，虾卵便孵化成仔虾。

【技术特征摘要】
1.一种克氏原螯虾早期虾卵离体培育方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)在克氏原螯虾繁殖季节的规模化池塘中，用常规捕捞工具对抱卵亲虾进行批量捕捞和收集；(2)用灭菌生理盐水冲洗抱卵亲虾，将抱卵亲虾放在甲醛调配而成的消毒液中浸泡10分钟；(3)对亲虾附着的虾卵进行筛选和分拣，选择受精作用之后处在相对发育早期的虾卵，此时的虾卵呈透明圆形，直径1.5-3mm，处于组织分化加速阶段；(4)使用无菌容器作为苗床，用无菌镊子从亲虾腹部附肢上剥离虾卵，放在准备好的苗床中，以灭菌淡水作为循环水源，灌入苗床中，浸没虾卵；(5)对环境因子进行调控，浸泡深度为2-5cm，水质pH值维持在6.8-8.2，水温控制在18℃-25℃，每日光照6-8小时，全程保持水源的微流动，注意水流不要过大防止冲散虾卵，及时镜检，并...

【专利技术属性】
技术研发人员：水燕，唐建清，徐增洪，刘国锋，朱光艳，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，江苏省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32