一种胶原蛋白肽的制备方法技术

本发明专利技术涉及食品技术领域，具体涉及一种胶原蛋白肽的制备方法，所述制备方法包括超声辅助溶剂萃取、超声辅助碱性脂肪酶酶解以及多步酶解，本发明专利技术具有脱脂和脱杂蛋白效率高、蛋白利用率超过82％的优点，产品具有滋补性并可提升食品的咸味和鲜味。

Preparation of a Collagen Peptide

【技术实现步骤摘要】
一种胶原蛋白肽的制备方法
本专利技术涉及食品
，具体涉及一种胶原蛋白肽的制备方法。
技术介绍
肽是氨基酸通过肽键连接起来的一种物质，是介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，是使蛋白质具有数以千万种功能的基础。蛋白质在人体消化系统中通过多种蛋白酶水解形成多肽，不像之前被人们认为仅是以氨基酸的形式被人体吸收，更多的是以低聚肽的形式被吸收。胶原蛋白中含有大量的甘氨酸，约占总氨基酸的27％，脯氨酸和羟脯氨酸的含量也特别高，占14％，这两种是胶原蛋白的特有氨基酸，而色氨酸、酪氨酸以及蛋氨酸等必需氨基酸含量低，因此，胶原蛋白属不完全蛋白质。胶原蛋白呈白色，是一种多糖蛋白，含有少量的半乳糖和葡萄糖。胶原蛋白具有很强的延伸力，不溶于水，能溶于微温的稀酸中。胶原蛋白是动物皮肤、骨骼、软骨、牙齿、血管等的主要组成成分，有着支撑器官、保护机体的功能。胶原蛋白也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％-30％。胶原蛋白与组织的形成、成熟、细胞间信息的传递，以及关节润滑、伤口愈合、钙化作用、血液凝固和衰老等有着密切的关系，在医学材料、化妆品、食品工业等均有着广泛应用。胶原蛋白是人体的一种非常重要的蛋白质，主要存在于结缔组织中，是人体皮肤的主要成分，占皮肤干重70％-80％。皮肤的生长、修复和营养都离不开胶原蛋白。胶原蛋白使细胞变得丰满，从而使肌肤充盈，保持皮肤弹性与润泽，维持皮肤细腻光滑，皮肤健康的两大关键——抗皱与保湿都与胶原蛋白有关。医学研究提示：胶原蛋白中的羟脯氨酸是人体皮肤形成的关键物。骨骼中有机物的70％-80％是胶原蛋白，骨骼生成时，首先必须合成充足的胶原蛋白纤维来组成骨骼的框架，因此，有人称胶原蛋白为骨骼中的骨骼。胶原蛋白亦是眼睛角膜的主要成分，但以结晶形式组成。但是，大约25岁以后，人体内的胶原蛋白流失的速度就开始加快，供给不及耗损，再加上紫外线照射以及体内的氧化作用，都可能破坏胶原蛋白的结构，让它失去原有的弹力，这就是皱纹和脸部皮肤松弛提早出现的原因。因此，及时补充流失的胶原蛋白对人体的健康至关重要。但是，胶原蛋白具有独特的三股超螺旋结构，三条链相互平行而且由链间氢键相连，具有十分稳定的性质，一般的加工温度及短时间加热都难使其分解，因此难被人体吸收，直接食用利用率较低；如果将胶原蛋白水解为多肽后，消化吸收率几乎达到100％，而其营养剂生理功能也会显著提高。胶原蛋白资源丰富，通常分布在海洋生物和动物皮肤骨骼中，从胶原蛋白中提取的胶原蛋白肽因其分子量小，易被人体吸收利用及其具有众多生物功能性等特点越来越受到人们的关注。使用蛋白酶将胶原蛋白水解获得的胶原蛋白肽，不仅利于体内吸收，而且具有多种生物活性，如抗氧化，降血压，抑制肿瘤，促进皮肤胶原代谢等。因此探究胶原蛋白的水解方法至关重要。在胶原蛋白的水解过程中，脂肪和杂蛋白的脱除是非常重要的一步。目前，脱脂和脱除杂蛋白的方法主要有溶剂萃取法、脂肪酶法、酸或碱化法等。单独使用酸或碱法处理易导致胶原蛋白化学变性；单独采用酶法处理，尽管制备条件温和，但脱脂率较低；单独使用溶剂萃取法可脱除油脂但很难脱除杂蛋白，而且产物中可能会有溶剂的残留。中国专利申请CN104561206A公开了一种易吸收的胶原蛋白肽，其制备过程中以罗非鱼骨为原料，利用氯仿和乙醇进行脱脂，再选择胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶在酸性条件下通过三步酶法进行酶解，获得的胶原蛋白肽分子量较低，易于吸收，但是脱脂率和蛋白利用率有待提高。因此，利用开发一种能解决上述技术问题的胶原蛋白肽的制备方法是非常必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足而提供一种脱脂和脱杂蛋白效率高、蛋白利用率高的胶原蛋白肽的制备方法。本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：一种胶原蛋白肽的制备方法，包括如下步骤：(1)将动物皮肤或骨骼用清水洗净，粉碎，得物质A；(2)将物质A和有机溶剂混合，超声辅助萃取，过滤，得物质B；(3)将物质B与碱性脂肪酶溶液混合，超声辅助酶解，过滤，将过滤物洗涤至中性，得物质C；(4)将物质C和水混合，在所得混合溶液中依次加入木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶进行酶解，灭酶，离心，取上清液，干燥，即得。上述方法步骤(3)中所述物质C的脱脂率为80-99.5％，羟脯氨酸的含量为8-14mg/g，羟脯氨酸占总氨基酸的质量分数为9-12％。所述物质C为蛋白质，羟脯氨酸作为胶原蛋白的代表性氨基酸，如果羟脯氨酸的含量较高，则所述物质C中胶原蛋白的含量较高，杂蛋白的含量较低，说明脱杂蛋白的效果较好。通过测量物质C的脱脂率和羟脯氨酸的含量，可以作为质量指标指示步骤(1)-(3)脱杂蛋白和脱脂的效果，实现产品的质量控制。上述方法步骤(4)中所述木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶购买于广西庞博生物科技公司或诺维信公司。优选地，步骤(1)中所述动物皮肤或骨骼为去除指尖的鸡脚。鸡脚皮及骨骼中含有丰富的胶原蛋白。更优选地，所述去除指尖的鸡脚切段3-5cm。更优选地，所述步骤(1)包括如下步骤：将去除指尖的鸡脚切段3-5cm，用清水洗净，粉碎成糜状，得物质A。优选地，步骤(2)中所述有机溶剂为石油醚和无水乙醇的混合溶剂。更优选地，所述石油醚和无水乙醇体积比为1:0.5-2。优选地，步骤(2)中所述有机溶剂和物质A按照质量比1-10:1混合。优选地，步骤(2)中所述物质A和有机溶剂在10-50℃条件下混合。优选地，步骤(2)中所述超声的功率为100-500w。优选地，步骤(2)中所述超声时间5-60min。更优选地，所述步骤(2)包括如下步骤：将石油醚/无水乙醇(体积比1:0.5-2)的混合溶剂和物质A按照质量比1-10:1，在10-50℃条件下混合，超声辅助萃取，超声的功率为100-500w，超声时间5-60min，过滤，去除溶剂，得物质B。优选地，所述步骤(2)还包括过滤后将过滤物和有机溶剂混合，超声辅助，过滤，重复1-5次，得产物B。更优选地，所述步骤(2)包括如下步骤：将石油醚/无水乙醇(体积比1:0.5-2)的混合溶剂和物质A按照质量比1-10:1，在10-50℃条件下混合，超声辅助萃取，超声的功率为100-500w，超声时间5-60min，过滤，去除溶剂，将过滤物按照上述步骤重复处理1-5次，得物质B。优选地，步骤(3)所述碱性脂肪酶溶液中的脂肪酶的质量分数为1-8％。优选地，步骤(3)所述碱性脂肪酶溶液中的碱的浓度以氢氧根离子计为0.01-1mol/L。更优选地，所述碱为氢氧化钠。优选地，步骤(3)中所述碱性脂肪酶溶液与物质B按照质量比1-10:1混合。优选地，步骤(3)中所述超声的功率为100-500w。优选地，步骤(3)中所述超声时间20-60min。优选地，步骤(3)中所述洗涤至中性用水洗涤。更优选地，所述步骤(3)包括如下步骤：将碱性脂肪酶溶液与物质B按照质量比1-10:1混合，碱性脂肪酶溶液中的脂肪酶的质量分数为1-8％，碱的浓度以氢氧根离子计为0.01-1mol/L，超声辅助酶解，超声的功率为100-500w，超声时间20-60min，过滤，将过滤物用水洗涤至中性，得物质C。优选地，步骤(4)中将所述水和物质C按照质量比1:1-10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将动物皮肤或骨骼用清水洗净，粉碎，得物质A；(2)将物质A和有机溶剂混合，超声辅助萃取，过滤，得物质B；(3)将物质B与碱性脂肪酶溶液混合，超声辅助酶解，过滤，将过滤物洗涤至中性，得物质C；(4)将物质C和水混合，在所得混合溶液中依次加入木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶进行酶解，灭酶，离心，取上清液，干燥，即得。

【技术特征摘要】
1.一种胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将动物皮肤或骨骼用清水洗净，粉碎，得物质A；(2)将物质A和有机溶剂混合，超声辅助萃取，过滤，得物质B；(3)将物质B与碱性脂肪酶溶液混合，超声辅助酶解，过滤，将过滤物洗涤至中性，得物质C；(4)将物质C和水混合，在所得混合溶液中依次加入木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶进行酶解，灭酶，离心，取上清液，干燥，即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述动物皮肤或骨骼为去除指尖的鸡脚。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述有机溶剂为石油醚和无水乙醇的混合溶剂；所述有机溶剂和物质A按照质量比1-10:1，在10-50℃条件下混合；所述超声的功率为100-500w，所述超声时间5-60min。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述石油醚和无水乙醇体积比为1:0.5-2。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)包括将物质A和有机溶剂混合，超声辅助，过滤，重复1-5次，得产物B。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述碱性脂肪酶溶液中的脂肪酶的质量分数为1-8％，碱的浓度以氢氧根离子计为0.01-1m...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢建春，谭佳，王雅欣，杜文斌，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：北京,11