一种RAGE拮抗多肽及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术和生物医药领域，具体涉及一种RAGE拮抗多肽及其应用。通过噬菌体展示技术，以RAGE为靶标筛选得到的RAGE拮抗多肽，可以与RAGE特异性结合，阻断其信号通路，从而抑制癌细胞增殖，为RAGE介导的癌症提供了有效的小分子药物，能够在医学与生物学领域得到广泛的应用。

A rage antagonistic peptide and its application

【技术实现步骤摘要】
一种RAGE拮抗多肽及其应用
本专利技术属于生物技术和生物医药领域，具体涉及一种RAGE拮抗多肽及其应用。
技术介绍
乳腺癌(Breastcancer)是指发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。4％～6％乳腺癌诊断时即为转移性乳腺癌，接受辅助治疗的早期患者30％～40％可发展为转移性乳腺癌，患者5年生存率约20％。而手术、放疗和化疗等传统治疗方式，作用的特异性和专一性不佳，不可避免的会对正常细胞和组织产生杀伤性作用，给患者带来极大的副作用。因此，寻找高效特异性的靶向药物，将极大提高乳腺癌的治疗效果。乳腺癌分子的靶向治疗是指针对乳腺癌发生、发展有关的信号通路及其癌基因相关表达产物进行治疗。晚期糖化终产物受体(Receptorforadvancedglycationendproducts，RAGE)是一种多配体受体，是免疫球蛋白超家族成员之一。RAGE最早是在研究糖尿病中发现，因其与糖尿病的主要致病因子晚期糖基化终末产物(Advancedglycationendproducts，AGE)结合，从而对组织造成伤害，故命名为晚期糖化终产物受体(RAGE)。RAGE结构分为N端和C端，N端为细胞外段，用来识别不同的配体，包含1个V区和2个C区，V区主要部分用来与配体结合，而C区用来稳定受体与配体的结合；中间包括跨膜段；C端为细胞内段，主要参与信号传导通路。RAGE在哺乳动物组织中的分布非常广泛，如淋巴细胞、内皮细胞、单核巨噬细胞、平滑肌细胞、肾小球系膜细胞、神经元等。在正常生理状态下，RAGE除了在肺组织中高表达外，在各种生理组织中均呈低水平表达。在很多炎症或慢性疾病中，如糖尿病、类风湿性关节炎、创伤、阿尔海默茨病等病理环境下及生长发育期，细胞表面的RAGE表达及配体明显增强。RAGE还在许多类型的癌症中过度表达，如乳腺癌、胃癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肺癌以及黑色素瘤等，并且与肿瘤细胞的增殖、运动、侵袭转移能力及肿瘤临床分期、预后等密切相关。近年来研究表明，不同亚型的乳腺癌细胞系中下调RAGE表达对癌细胞的增殖具有深远的影响，特异性靶向RAGE的siRNA可下调乳腺癌细胞的RAGE表达水平，能有效降低体内的乳腺癌增殖。但是siRNA治疗有着较为明显的缺点，就是siRNA进入人体内容易被机体降解，从而导致作用时间极大的降低。而多肽药物治疗，不仅靶向性更高，而且作用时间长，毒副作用小。以RAGE为治疗靶点是可以作为乳腺癌治疗的一种新策略。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种新的RAGE拮抗多肽及其衍生物与应用。本专利技术所采用的技术方案是：一种RAGE拮抗多肽，所述RAGE拮抗多肽包括氨基酸序列HPMSAPR(SEQNO.:1)。进一步地，所述RAGE拮抗多肽通过噬菌体展示随机肽库筛选得到。噬菌体展示技术(PhageDisplayTechnology)是一项特异性多肽或蛋白的筛选技术，此技术可将目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示于噬菌体表面，被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性，使得各种靶分子(如抗体、酶和细胞表面受体等)的多肽配体通过体外亲和淘选程序得以快速鉴定。进一步地，所述RAGE拮抗多肽可以是获自于天然蛋白中的多肽片段，也可以利用公知的肽合成方法来获得。进一步地，所述RAGE拮抗多肽与RAGE特异性结合。本专利技术还提供一种RAGE拮抗多肽的衍生物，为上述RAGE拮抗多肽氨基酸侧链基团上、上述RAGE拮抗多肽片段的氨基端或羧基端经修饰得到的产物，或上述RAGE拮抗多肽连接用于多肽或蛋白检测或纯化的标签所得的产物。进一步地，所述修饰包括氨基化、酰胺化、羟基化、羧基化、羰基化、烷基化、乙酰化、磷酸化、酯化、糖基化、环化、生物素化、荧光基团修饰、聚乙二醇PEG修饰或固定化修饰；所述的标签为His6、GST、EGFP、MBP、Nus、HA、IgG、FLAG、c-Myc或ProfinityeXact。进一步地，所述RAGE拮抗多肽的衍生物，采用现有技术中的公知方法进行，既可以用多肽自动合成仪进行化学合成；通过将短肽序列推导出核苷酸序列，然后克隆到载体中进行生物合成；也可以从现有存在的生物体内进行大量提取和纯化。本专利技术还提供一种编码上述RAGE拮抗多肽的核苷酸序列。本专利技术还提供一种表达载体，所述表达载体含有上述核苷酸序列。本专利技术还提供一种宿主细胞，所述宿主细胞含有上述表达载体。本专利技术还提供一种产生能够结合RAGE的蛋白质的方法，包括在宿主细胞中表达包含HPMSAPR(SEQNO.:1)氨基酸序列的载体。本专利技术还提供一种药物组合物，包括上述RAGE拮抗多肽或上述RAGE拮抗多肽的衍生物。进一步地，所述药物组合物还包括能杀伤癌细胞的制剂；优选地，所述制剂为能杀伤癌细胞的化学药物、纳米药物、生物药物、放射性药物、光热治疗或光动力治疗药物中的至少一种；优选地，所述制剂为化学药物或生物药物。进一步地，所述药物组合物还包括药物学上可接受的载体；优选地，所述载体为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂中的至少一种。本专利技术还提供一种上述RAGE拮抗多肽在制备靶向识别RAGE的组合物中的应用。本专利技术还提供一种上述RAGE拮抗多肽或上述RAGE拮抗多肽的衍生物或上述药物组合物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的应用。进一步地，所述癌症为RAGE过表达癌症。进一步地，所述癌症为乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌和胰腺癌。进一步地，所述癌症为三阴性乳腺癌。进一步地，所述药物还包括药物学上可接受的载体。进一步地，所述药物可制成片剂、粒剂、胶囊、口服液或注射剂。本专利技术还提供一种上述RAGE拮抗多肽的衍生物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种RAGE拮抗多肽，以RAGE为靶标筛选得到；与RAGE结合，从而阻断其介导的信号通路，抑制了癌细胞的增殖，可用于制备预防和/或治疗RAGE过表达的癌症，例如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌和胰腺癌等，能够在医学与生物学领域得到广泛的应用，并产生巨大的社会与经济效益。附图说明图1示出了QPCR检测不同细胞中的RAGE表达水平；图2示出了HPLC检测RAGE拮抗多肽的纯度；图3示出了MS质谱鉴定RAGE拮抗多肽的大小；图4示出了共聚焦检测RAGE拮抗多肽与RAGE的特异性结合；图5示出了MTT法检测RAGE拮抗多肽对于不同癌细胞增殖能力的影响；图6示出了MTT法检测RAGE拮抗多肽在不同时间对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响；图7示出了EDU染色检测RAGE拮抗多肽对于MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。具体实施方式以下结合附图和具体的实施例对本专利技术的技术方案做进一步说明，但本专利技术并不限于这些具体实施方式。实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1QPCR检测不同癌细胞中RAGE蛋白表达水平取正常乳腺细胞MCF-10A，雌激素阳性(ER+)细胞MCF-7以及三阴性细胞MDA-MB-231细胞。RNA提取：以6cm的培养皿为例，当细胞生长状态良好，细胞汇合度达到80-90％时，将细胞培养液弃掉，加入1×PBS清洗细胞去除残本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RAGE拮抗多肽，其特征在于，所述RAGE拮抗多肽包括如SEQ NO.：1所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种RAGE拮抗多肽，其特征在于，所述RAGE拮抗多肽包括如SEQNO.：1所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的RAGE拮抗多肽，其特征在于，所述RAGE拮抗多肽与RAGE特异性结合。3.一种如权利要求1所述的RAGE拮抗多肽的衍生物，其特征在于，所述衍生物为如权利要求1所述的RAGE拮抗多肽的氨基酸侧链基团、氨基端或羧基端经修饰得到，或者如权利要求1所述的RAGE拮抗多肽连接有用于检测或纯化的标签；其中，所述修饰包括氨基化、酰胺化、羟基化、羧基化、羰基化、烷基化、乙酰化、磷酸化、酯化、糖基化、环化、生物素化、荧光基团修饰、聚乙二醇PEG修饰或固定化修饰；所述的标签为His6、GST、EGFP、MBP、Nus、HA、IgG、FLAG、c-Myc或ProfinityeXact。4.一种编码如权利要求1所述的RAGE拮抗多肽的核苷酸序列。5.一种表达载体，其特征在于，含有如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄来强，代小勇，蒋盛威，刘可为，邓婷，王丽君，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，
类型：发明
国别省市：广东,44