细胞培养方法以及细胞培养系统技术方案

本发明专利技术提供细胞培养方法及细胞培养系统，以接触角为84°以下、并且选自聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、环状烯烃聚合物、环状烯烃共聚物、聚氯乙烯、聚氨酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚酯、聚酰胺、离聚物、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、乙烯－乙烯醇共聚物、乙烯－丙烯酸共聚物、乙烯－丙烯酸甲酯共聚物、乙烯－甲基丙烯酸共聚物、乙烯－甲基丙烯酸甲酯共聚物等中、并且进行了辐射处理或亲水化处理的基材形成培养容器的培养面的至少一部分，在培养容器中收容含有作为细胞粘附因子的层粘连蛋白或其片段的培养基和细胞，培养贴壁细胞，由此能够不向培养容器涂布层粘连蛋白地合适地培养贴壁细胞。

Cell Culture Method and Cell Culture System

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞培养方法以及细胞培养系统
本专利技术涉及细胞的培养技术，特别涉及使细胞粘附于培养容器而进行培养的细胞培养方法以及细胞培养系统。
技术介绍
近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，要求在人工环境下高效地大量培养细胞或组织、微生物等。在此种状况下，实行向培养容器注入细胞和培养基、并培养细胞的做法。通常，在培养容器中对多能干细胞(iPS细胞等)、胚胎干细胞(ES细胞)进行粘附培养的情况下，需要向培养容器的培养面涂布层粘连蛋白等细胞粘附因子的前处理(参照专利文献1)。具体而言，例如将层粘连蛋白溶液加入培养容器，在37℃静置1小时以上而进行层粘连蛋白的涂布后，从培养容器除去层粘连蛋白溶液，将细胞和培养基加入培养容器，进行细胞的粘附培养。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2015－178526号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的问题然而，为了像这样对细胞进行粘附培养，必须向培养容器涂布层粘连蛋白，存在有操作烦杂的问题。另外，在供给已涂布层粘连蛋白的培养容器的情况下，存在有其制造、品质管理辛苦的问题。因而，本专利技术人等对于是否可以如下所示地培养进行了研究，即，不向培养容器涂布层粘连蛋白，而是使层粘连蛋白混合于培养基中而进行培养，由此使细胞粘附于培养容器而培养。其结果是，在使用了由疏水性材料形成的培养容器的情况下，即使使层粘连蛋白混合于培养基中而进行培养，也无法使细胞粘附于培养容器而培养。对于其理由可以如下所示地推测。如图1所示，在培养基中含有各种各样的蛋白质，培养容器的培养面成为由白蛋白等蛋白质覆盖的状态。此时，在培养面由亲水性材料形成的情况下，可以认为，因层粘连蛋白与白蛋白等在培养面发生交换吸附，而将层粘连蛋白涂布于培养面。另一方面，在培养面由疏水性材料形成的情况下，可以认为，由于白蛋白等与培养面疏水结合，因此无法与层粘连蛋白交换吸附，无法将层粘连蛋白涂布于培养面。此处，专利文献1中记载的专利技术中，虽然向培养容器涂布层粘连蛋白，然而对于使用添加有层粘连蛋白的培养基培养细胞的情况也有记载。然而，对于用于实现它的具体构成没有给出，对于使用何种特性的培养容器才可以使用添加有层粘连蛋白的培养基培养细胞没有研究。本专利技术是鉴于上述情况而完成的，其目的在于，提供能够在不向培养容器涂布层粘连蛋白的情况下合适地培养贴壁细胞的细胞培养方法及细胞培养系统。用于解决问题的方法为了达成上述目的，本专利技术的细胞培养方法是使细胞粘附于培养容器而进行培养的细胞培养方法，采用了如下的构成，即，以接触角为84°以下、并且选自聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、环状烯烃聚合物、环状烯烃共聚物、聚氯乙烯、聚氨酯、聚酯、聚酰胺、离聚物、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、乙烯－乙烯醇共聚物、乙烯－丙烯酸共聚物、乙烯－丙烯酸甲酯共聚物、乙烯－甲基丙烯酸共聚物、乙烯－甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚二甲基硅氧烷、氟系树脂中、并且进行了辐射处理或亲水化处理的基材来形成所述培养容器的培养面的至少一部分，在所述培养容器中，收容含有作为细胞粘附因子的层粘连蛋白或其片段的培养基和所述细胞，对所述细胞进行培养的构成。另外，本专利技术的细胞培养系统是使细胞粘附于培养容器而进行培养的细胞培养系统，采用了如下的构成，即，具备培养容器和培养基容器，所述培养容器以接触角为84°以下、并且选自聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、环状烯烃聚合物、环状烯烃共聚物、聚氯乙烯、聚氨酯、聚酯、聚酰胺、离聚物、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、乙烯－乙烯醇共聚物、乙烯－丙烯酸共聚物、乙烯－丙烯酸甲酯共聚物、乙烯－甲基丙烯酸共聚物、乙烯－甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚二甲基硅氧烷、氟系树脂中、并且进行了辐射处理或亲水化处理的基材形成了所述培养容器的培养面的至少一部分，所述培养基容器收容含有作为细胞粘附因子的层粘连蛋白或其片段的培养基，通过从所述培养基容器向所述培养容器转移所述培养基并且向所述培养容器注入所述细胞，而进行所述细胞的培养的构成。另外，本专利技术的细胞培养系统是使细胞粘附于培养容器而进行培养的细胞培养系统，采用了如下的构成，即，具备培养容器、培养基容器和层粘连蛋白供给容器，所述培养容器以接触角为84°以下、并且选自聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、环状烯烃聚合物、环状烯烃共聚物、聚氯乙烯、聚氨酯、聚酯、聚酰胺、离聚物、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、乙烯－乙烯醇共聚物、乙烯－丙烯酸共聚物、乙烯－丙烯酸甲酯共聚物、乙烯－甲基丙烯酸共聚物、乙烯－甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚二甲基硅氧烷、氟系树脂中、并且进行了辐射处理或亲水化处理的基材形成所述培养容器的培养面的至少一部分，所述培养基容器收容培养基，所述层粘连蛋白供给容器收容作为细胞粘附因子的层粘连蛋白或其片段，通过从所述培养基容器向所述培养容器转移所述培养基、从所述培养容器注入所述细胞以及从所述层粘连蛋白供给容器向所述培养容器转移层粘连蛋白或其片段，而进行所述细胞的培养的构成。专利技术效果根据本专利技术，能够提供可以不向培养容器涂布层粘连蛋白地合适地培养贴壁细胞的细胞培养方法及细胞培养系统。附图说明图1是关于无法将本专利技术的细胞培养方法应用于具有疏水性的培养面的培养容器的理由的说明图。图2是表示本专利技术的实施方式的细胞培养系统的概略构成的说明图。图3是表示本专利技术的实施方式的细胞培养系统的变形例的概略构成的说明图。图4是表示比较例1～4及实施例1～9的培养容器的培养面的处理条件、接触角、培养天数以及细胞粘附的结果的图。图5是表示实施例10～11的培养容器的培养面的处理条件、接触角、培养天数以及细胞粘附的结果的图。图6是表示利用比较例1～4的培养容器的培养结果(培养面的状态)的显微镜照片的图。图7是表示利用实施例1～4的培养容器的培养结果(培养面的状态)的显微镜照片的图。图8是表示利用实施例5～9的培养容器的培养结果(培养面的状态)的显微镜照片的图。图9是表示利用实施例10的培养容器的培养结果(培养面的状态)的显微镜照片的图。图10是表示利用实施例11的培养容器的培养结果(培养面的状态)的显微镜照片的图。具体实施方式以下，对本专利技术的细胞培养方法及细胞培养系统的实施方式进行详细说明。本实施方式的细胞培养方法的特征在于，是使细胞粘附于培养容器而进行培养的细胞培养方法，以接触角为84°以下、并且选自聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、环状烯烃聚合物、环状烯烃共聚物、聚氯乙烯、聚氨酯、聚酯、聚酰胺、离聚物、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、乙烯－乙烯醇共聚物、乙烯－丙烯酸共聚物、乙烯－丙烯酸甲酯共聚物、乙烯－甲基丙烯酸共聚物、乙烯－甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚二甲基硅氧烷、氟系树脂中、并且进行了辐射处理或亲水化处理的基材形成培养容器的培养面的至少一部分，在培养容器中收容含有作为细胞粘附因子的层粘连蛋白或其片段的培养基和细胞，对细胞进行培养。所谓培养容器的培养面，是粘附细胞而进行培养的培养容器内的表面。所谓接触角，是静止了的液体的表面与固体壁接触处液面与固体面所成的角，也称作静态接触角。存在有接触角大时表面的疏水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞培养方法，其特征在于，是使细胞粘附于培养容器而进行培养的细胞培养方法，以接触角为84°以下、并且从聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、环状烯烃聚合物、环状烯烃共聚物、聚氯乙烯、聚氨酯、聚酯、聚酰胺、离聚物、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、乙烯－乙烯醇共聚物、乙烯－丙烯酸共聚物、乙烯－丙烯酸甲酯共聚物、乙烯－甲基丙烯酸共聚物、乙烯－甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚二甲基硅氧烷、氟系树脂中选自、并且进行了辐射处理或亲水化处理的基材形成所述培养容器的培养面的至少一部分，在所述培养容器中，收容含有作为细胞粘附因子的层粘连蛋白或其片段的培养基和所述细胞，对所述细胞进行培养。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.02.20 JP 2017-0291631.一种细胞培养方法，其特征在于，是使细胞粘附于培养容器而进行培养的细胞培养方法，以接触角为84°以下、并且从聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、环状烯烃聚合物、环状烯烃共聚物、聚氯乙烯、聚氨酯、聚酯、聚酰胺、离聚物、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、乙烯－乙烯醇共聚物、乙烯－丙烯酸共聚物、乙烯－丙烯酸甲酯共聚物、乙烯－甲基丙烯酸共聚物、乙烯－甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚二甲基硅氧烷、氟系树脂中选自、并且进行了辐射处理或亲水化处理的基材形成所述培养容器的培养面的至少一部分，在所述培养容器中，收容含有作为细胞粘附因子的层粘连蛋白或其片段的培养基和所述细胞，对所述细胞进行培养。2.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于，所述基材为进行了辐射处理或亲水化处理的、聚乙烯、环状烯烃共聚物或聚对苯二甲酸乙二醇酯的任意一种。3.根据权利要求1或2所述的细胞培养方法，其特征在于，所述细胞为多能干细胞、胚胎干细胞或它们的分化细胞。4.根据权利要求1～3中任一项所述的细胞培养方法，其特征在于，利用所述培养容器在封闭系统中培养所述细胞。5.一种细胞培养系统，其特征在于，是使细胞粘附于培养容器而进行培养的细胞培养系统，其具备培养容器和培养基容器，所述培养容器中，以接触角为84°以下、并且从聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、环状烯烃聚合物、环状烯烃共聚物、聚氯乙烯、聚氨酯、聚酯、聚酰胺、离聚物、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、乙烯－乙烯醇共聚物、乙烯－...

【专利技术属性】
技术研发人员：户谷贵彦，松冈洋佑，田中乡史，
申请(专利权)人：东洋制罐集团控股株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP