抗癫痫药物---盐酸噻加宾（TGB）的荧光检测方法技术

本发明专利技术公开了一种抗癫痫药物‑‑‑盐酸噻加宾(TGB)的荧光检测方法。通过对染料苝二酰亚胺衍生物(PDI)、人血清白蛋白(HSA)和盐酸噻加宾(TGB)的相互作用的研究，我们发现PDI的荧光能够被HSA淬灭，并且我们的研究表明PDI结合在HSA的位点II处，而TGB能够竞争结合在HSA的位点II处，使得PDI从HSA的位点II处被竞争下来，从而实现荧光恢复。基于此，本发明专利技术提出了一种TGB的荧光检测方法，以PDI‑HSA为探针，在TGB的作用下，实现荧光恢复，以此来检测TGB。本发明专利技术方法具有原始创新性、检测过程简单、实验条件温和、灵敏度高、选择性好、检测时间快、检测限低等优点，且具有良好的社会价值和应用前景。

Fluorescence Detection of Antiepileptic Drug Tigabine Hydrochloride (TGB)

【技术实现步骤摘要】
抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的荧光检测方法
本专利技术属于药物的检测领域，尤其涉及一种抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的荧光检测方法。
技术介绍
癫痫是神经系统最常见的疾病之一，主要临床表现为：发作时，感觉、运动、行为及自主神经等出现不同程度的障碍，严重威胁人类的健康及患者的生活质量。目前，癫痫最主要、最常用的治疗手段仍然是药物治疗。盐酸噻加宾(TGB)是一种新型抗癫痫药物，其作用机制是阻滞神经元和神经胶质细胞对γ-氨基丁酸(GABA)的再摄取，增加突触部位γ-氨基丁酸(GABA)的水平，达到抗惊厥的作用。然而，研究表明，TGB的过量使用会产生一系列的副作用，例如头晕无力、紧张、腹部疼痛、体重变化、思想异常、认知能力下降、精神运动迟缓等等，甚至还有可能导致患者产生自杀的想法或行为。因此，对TGB检测的研究尤为重要。目前，盐酸噻加宾(TGB)的检测方法主要采用高效液相色谱法。高效液相色谱法以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。例如AbdussalamSughir等(2-Hydroxypropylβ-Cyclodextrin:ANewToolfortheImprovementofChemicalStabilityofTiagabineHCl，LettersinDrugDesign&Discovery，2009，6，236-241)：采用高效液相色谱法(HPLC)对TGB进行定量检测，TGB的检测限和定量限分别为0.6494μgml-1和1.765μgml-1。RajakumariRajasingam等(StressDegradationStudiesandDevelopmentofaValidatedRP-HPLCMethodforDeterminationofTiagabineinPresenceofItsDegradationProducts，InternationalJournalofPharmacyandPharmaceuticalSciences，2016，8，230-236)：采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对TGB进行定量检测，在50～150μg/ml浓度范围内呈线性，检测限和定量限分别为31.93μgml-1和96.76μgml-1。高效液相色谱法检测TGB，是一种经典的检测方法，线性好，准确度高，但是该方法也存在一些缺点和不足，例如：分析成本高，分析过程较复杂，检测时间长等等。因此，探索检测过程简单、反应条件温和、灵敏度高、经济性好的检测TGB的新方法，对新型抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的临床治疗应用具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种简单实用的TGB的检测方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的荧光检测方法，包括以下步骤：构建荧光探针---PDI-HSA：在染料苝二酰亚胺衍生物(PDI)溶液中加入不同浓度的人血清白蛋白(HSA)，发现PDI的荧光发生淬灭，并且PDI的荧光随着HSA浓度的升高而逐渐降低；通过进一步的研究，结果表明人血清白蛋白对PDI具有很好的选择性；另外，研究结果也表明PDI与人血清白蛋白结合的结合位点是位点II。盐酸噻加宾(TGB)的检测：将一系列不同浓度的盐酸噻加宾溶液加入到PDI和人血清白蛋白的混合溶液体系中，通过荧光光谱法测溶液荧光强度的变化来检测TGB。上述的抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的检测方法，优选的，所述盐酸噻加宾的检测方法是荧光光谱法。上述的抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的检测方法，优选的，所述盐酸噻加宾的检测方法是荧光光谱法，所述检测工具是荧光探针---PDI-HSA，所述PDI与HSA加入的摩尔比例为1:8；所述PDI溶液的浓度为5μM，HSA的浓度为40μM。上述的抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的检测方法，优选的，所述人血清白蛋白可以使得PDI的荧光发生淬灭。上述的抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的检测方法，优选的，所述PDI与人血清白蛋白结合的结合位点是位点II。本专利技术中，所述盐酸噻加宾(TGB)的检测步骤为：将一系列不同浓度的TGB溶液加入到PDI-HSA的混合溶液体系中，通过荧光光谱法测溶液荧光强度进行定量分析。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术的抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的检测，首次采用荧光光谱法作为检测方法，检测过程方便快捷、灵敏度高、选择性好，可以用于尿液中TGB含量的测定。附图说明图1为实施例抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的荧光检测方法的原理图。图2为实施例步骤(1)中的20μMPDI溶液的紫外可见吸收光谱图。图3为实施例步骤(1)中在5μMPDI溶液中加入一系列不同浓度的人血清白蛋白之后的荧光光谱图。图4为实施例步骤(1)中不同氨基酸和蛋白质的选择性实验荧光光谱图。图5为实施例步骤(1)中PDI与HSA结合的结合位点实验三维荧光光谱图。图6为实施例步骤(1)中在5μMPDI和40μMHSA的混合溶液体系中加入不同浓度的位点II的标志物布洛芬(Ibuprofen)之后的三维荧光光谱图。图7为实施例步骤(1)中4μMHSA和一系列不同浓度的PDI结合之后的圆二色光谱图。图8为实施例步骤(2)中不同的温度对检测盐酸噻加宾(TGB)的影响柱状图。图9为实施例步骤(2)中在5μMPDI和40μMHSA的溶液体系中加入不同浓度的盐酸噻加宾(TGB)之后的时间扫描曲线图。图10为实施例步骤(2)中检测不同浓度的盐酸噻加宾(TGB)的荧光光谱图。图11为实施例步骤(2)中检测不同浓度的盐酸噻加宾(TGB)的误差线荧光散点图，内插图为检测1～100μM的盐酸噻加宾(TGB)的线性关系图。图12为实施例步骤(2)中药物的选择性实验柱状图。图13为实施例步骤(2)中TGB在尿液中的回收率。具体实施方式以下结合说明书附图和具体优选的实施例对本专利技术作进一步描述，但并不因此而限制本专利技术的保护范围。实施例：一种本专利技术的抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的荧光检测方法，包括以下步骤：(1)建立荧光探针---PDI-HSA将PDI和HSA分别溶于50％的乙醇溶液和超纯水中，均配成1mM的母液。分别取上述两种母液一定体积混合稀释成浓度分别为5μM和40μM，得到荧光探针PDI-HSA。具体包括以下步骤：①取上述PDI母液一定体积用超纯水稀释为20μM，通过紫外吸收光谱测PDI的最大激发波长。②取PDI母液一定体积用超纯水稀释为5μM，在最大激发波长处通过荧光光谱分析仪测荧光强度，再加入用超纯水稀释的一系列不同浓度的HSA溶液，测溶液荧光强度的变化。③氨基酸和蛋白质的选择性实验，随机选择了7种氨基酸和蛋白质，如：L-谷氨酸，L-精氨酸，葡萄糖氧化酶，木瓜蛋白酶，α-糜蛋白酶，胰蛋白酶，溶菌酶。将上述7种氨基酸和蛋白质以及人血清白蛋白(HSA)分别和5μMPDI溶液混合，氨基酸和蛋白质的浓度均为40μM，在最大激发波长处通过荧光光谱分析仪测荧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗癫痫药物‑‑‑盐酸噻加宾(TGB)的荧光检测方法，包括以下步骤：构建荧光探针‑‑‑PDI‑HSA：在染料苝二酰亚胺衍生物(PDI)溶液中加入人血清白蛋白(HSA)，发现PDI的荧光发生淬灭，并且通过位点研究表明PDI与HSA结合的结合位点是位点II。

【技术特征摘要】
1.一种抗癫痫药物---盐酸噻加宾(TGB)的荧光检测方法，包括以下步骤：构建荧光探针---PDI-HSA：在染料苝二酰亚胺衍生物(PDI)溶液中加入人血清白蛋白(HSA)，发现PDI的荧光发生淬灭，并且通过位点研究表明PDI与HSA结合的结合位点是位点II。2.将盐酸噻加宾(TGB)溶液加入到PDI-HSA体系中，TGB与HSA发生竞争性结合，游离出具有荧光性质的PDI，通过荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹振，廖小豆，杨荣华，闫奇，杨华，
申请(专利权)人：长沙理工大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43