一种用于常温运输动物细胞的保护液、其制备方法以及用途技术

本发明专利技术涉及一种用于常温运输动物细胞保护液、其制备方法以及用途。该保护液包含氨基酸、葡萄糖、白蛋白、氯化钙、氯化钾、氯化钠和碳酸氢钠。该动物细胞保护液由医用材料配制而成，无热源，无化工物添加。可实现细胞在2℃～37℃下72小时常规快递运输，细胞存活率可达到85％以上。使用本发明专利技术的动物细胞保护液运送细胞，无需解冻，无需重筛选培养，无需洗涤，可直接用于临床或动物实验。

A protective solution for transporting animal cells at room temperature, its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种用于常温运输动物细胞的保护液、其制备方法以及用途
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种用于常温运输动物细胞的保护液、其制备方法以及用途。
技术介绍
近年来，细胞治疗技术发展迅猛。由于各种细胞治疗技术需要在体外对目的细胞进行适当处理，这些操作要求在GMP环境下完成，并且通常具有一定技术难度和需要一定时间，因此治疗用细胞的准备难以在医院内完成，通常由细胞制备实验室准备好后运送至医院使用。影响细胞治疗效果的因素除了细胞制备技术本身外，运输环节可能对细胞的活力和功能造成较大影响。特别是一些细胞治疗产品可能由一个细胞中心制备后供给多家研究机构或医院使用时，运输的距离和时间相对较长，运输环节对细胞质量的影响非常重要。目前细胞的运输主要有两种，一种是非培养状态低温液氮运输，另一种是培养状态下装满培养基常温运输。两种方法都有一定的弊端。其中，利用液氮运输可以在特定的液氮容器内存放大量的细胞后进行运输，但是存在一定的安全隐患，且造价高，冻存液成分不明确，一般含有不同比例的血清，会对后续实验造成一定的影响，同时冻存过的细胞活性会下降。装满培养基的常温运输方式可避免细胞复苏的技术操作同时运输费用低廉，但在该方式下，细胞的存活时间较短，因此该方式不适合于长距离与长时间运输。无论是低温液氮运输，还是常温保存运输，都需要使用细胞保护液。例如，中国专利申请CN102791278A公开了一种能够提高在低温下储存的细胞的存活性的细胞保护剂。然而，该细胞保护剂添加了胎盘提取物，该胎盘提取物成分复杂且具有携带传染病的危险，通常不能用于临床，只能用于实验室研究。再例如，中国专利CN101919380B公开了一种间充质干细胞保护液，其采用5％葡萄糖注射液代替TC199，使间充质干细胞在环境温度2-8℃时细胞活力在90％以上可以维持48小时。然而，该细胞保护液的使用只局限于间充质干细胞，且在保护液中添加了低分子肝素钙，在临床使用中会对患有凝血功能障碍的患者带来一定的风险。综合现有技术发现，常温保护液的使用温度在2℃～10℃左右，保存细胞85％以上存活率的时间通常也在24～48小时内。因此，探究出一种简便的能一次大量运输细胞的且能保证细胞活性的用于常温运输动物细胞的保护液就显得特别重要。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于常温运输动物细胞的保护液，它可使细胞在常温条件下的较长时间内保持较高的生物活性，因此能够使细胞在常温环境下进行长距离长时间的运输，且运输成本低廉。为实现上述目的，本专利技术提供了一种用于常温运输动物细胞的保护液，所述保护液包含氨基酸、葡萄糖、白蛋白、氯化钙、氯化钾、氯化钠和碳酸氢钠，其中，所述氨基酸包括脯氨酸或其生理上可接受的盐、丝氨酸或其生理上可接受的盐、丙氨酸或其生理上可接受的盐、异亮氨酸或其生理上可接受的盐、亮氨酸或其生理上可接受的盐、门冬氨酸或其生理上可接受的盐、酪氨酸或其生理上可接受的盐、谷氨酸或其生理上可接受的盐、苯丙氨酸或其生理上可接受的盐、精氨酸或其生理上可接受的盐、赖氨酸或其生理上可接受的盐、缬氨酸或其生理上可接受的盐、苏氨酸或其生理上可接受的盐、组氨酸或其生理上可接受的盐、色氨酸或其生理上可接受的盐、蛋氨酸或其生理上可接受的盐、胱氨酸或其生理上可接受的盐和甘氨酸或其生理上可接受的盐。在本专利技术所述的保护液中，优选地，所述氨基酸包含L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-门冬氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸盐酸盐、L-赖氨酸盐酸盐、L-缬氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸盐酸盐、L-色氨酸、L-蛋氨酸、L-胱氨酸和甘氨酸。优选地，按质量份数计，所述保护液包含：氨基酸24～60份；葡萄糖32～60份；白蛋白12～24份；氯化钙0.016～0.036份；氯化钾0.016～0.036份；氯化钠4～7.2份；和碳酸氢钠2.4～4.8份；更优选地，按质量份数计，所述保护液包含：氨基酸30～50份；葡萄糖40～50份；白蛋白15～20份；氯化钙0.02～0.03份；氯化钾0.02～0.03份；氯化钠5～6份；和碳酸氢钠3～4份。优选地，按质量份数计，所述氨基酸包含：L-脯氨酸0.8～1.2份；L-丝氨酸0.8～1.2份；L-丙氨酸1.6～2.4份；L-异亮氨酸2.8～4.3份；L-亮氨酸3.9～5.9份；L-门冬氨酸2～3份；L-酪氨酸0.2～0.3份；L-谷氨酸0.6～0.9份；L-苯丙氨酸4.2～6.4份；L-精氨酸盐酸盐4～6份；L-赖氨酸盐酸盐3.4～5.2份；L-缬氨酸2.8～4.4份；L-苏氨酸2～3份；L-组氨酸盐酸盐2～3份；L-色氨酸0.7～1.1份；L-蛋氨酸1.8～2.7份；L-胱氨酸0.08～0.12份；和甘氨酸6～9.2份；更优选地，按质量份数计，所述氨基酸包含：L-脯氨酸1份；L-丝氨酸1份；L-丙氨酸2份；L-异亮氨酸3.52份；L-亮氨酸4.9份；L-门冬氨酸2.5份；L-酪氨酸0.25份；L-谷氨酸0.75份；L-苯丙氨酸5.33份；L-精氨酸盐酸盐5份；L-赖氨酸盐酸盐4.3份；L-缬氨酸3.6份；L-苏氨酸2.5份；L-组氨酸盐酸盐2.5份；L-色氨酸0.9份；L-蛋氨酸2.25份；L-胱氨酸0.1份；和甘氨酸7.6份。优选地，所述保护液还包含山梨醇和/或亚硫酸氢钠；更优选地，按质量份数计，所述保护液包含：山梨醇40～60份；和/或亚硫酸氢钠0.4～0.6份；进一步优选地，按质量份数计，所述保护液包含：山梨醇50份；和/或亚硫酸氢钠0.5份。根据本专利技术的一个实施方案，按质量份数计，所述保护液包含：L-脯氨酸1份；L-丝氨酸1份；L-丙氨酸2份；L-异亮氨酸3.52份；L-亮氨酸4.9份；L-门冬氨酸2.5份；L-酪氨酸0.25份；L-谷氨酸0.75份；L-苯丙氨酸5.33份；L-精氨酸盐酸盐5份；L-赖氨酸盐酸盐4.3份；L-缬氨酸3.6份；L-苏氨酸2.5份；L-组氨酸盐酸盐2.5份；L-色氨酸0.9份；L-蛋氨酸2.25份；L-胱氨酸0.1份；甘氨酸7.6份葡萄糖40或50份；白蛋白15或20份；氯化钙0.02或0.03份；氯化钾0.02或0.03份；氯化钠5或6份；碳酸氢钠3或4份；山梨醇50份；和亚硫酸氢钠0.5份，余量为水。优选地，所述水为注射用水。本专利技术还提供一种上述保护液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)将氨基酸溶于水制得复合氨基酸溶液；(2)将葡萄糖、白蛋白、氯化钙、氯化钾、氯化钠和碳酸氢钠以及任选的山梨醇和/或亚硫酸氢钠溶于步骤(1)制得的复合氨基酸溶液，制成保护液。优选地，复合氨基酸溶液(18AA)的组成为每1000ml含：L-脯氨酸(C5H9NO2)1.00g、L-丝氨酸(C3H7NO3)1.00g、L-丙氨酸(C3H7NO2)2.00g、L-异亮氨酸(C6H13NO2)3.52g、L-亮氨酸(C6H13NO2)4.90g、L-门冬氨酸(C4H7NO4)2.50g、L-酪氨酸(C9H11NO3)0.25g、L-谷氨酸(C5H9NO4)0.75g、L-苯丙氨酸(C9H11NO2)5.33g、L-精氨酸盐酸盐(C6H14N4O2HCl)5.00g、L-赖氨酸盐酸盐(C6H1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于常温运输动物细胞的保护液，所述保护液包含氨基酸、葡萄糖、白蛋白、氯化钙、氯化钾、氯化钠和碳酸氢钠，其中，所述氨基酸包括脯氨酸或其生理上可接受的盐、丝氨酸或其生理上可接受的盐、丙氨酸或其生理上可接受的盐、异亮氨酸或其生理上可接受的盐、亮氨酸或其生理上可接受的盐、门冬氨酸或其生理上可接受的盐、酪氨酸或其生理上可接受的盐、谷氨酸或其生理上可接受的盐、苯丙氨酸或其生理上可接受的盐、精氨酸或其生理上可接受的盐、赖氨酸或其生理上可接受的盐、缬氨酸或其生理上可接受的盐、苏氨酸或其生理上可接受的盐、组氨酸或其生理上可接受的盐、色氨酸或其生理上可接受的盐、蛋氨酸或其生理上可接受的盐、胱氨酸或其生理上可接受的盐和甘氨酸或其生理上可接受的盐。

【技术特征摘要】
1.一种用于常温运输动物细胞的保护液，所述保护液包含氨基酸、葡萄糖、白蛋白、氯化钙、氯化钾、氯化钠和碳酸氢钠，其中，所述氨基酸包括脯氨酸或其生理上可接受的盐、丝氨酸或其生理上可接受的盐、丙氨酸或其生理上可接受的盐、异亮氨酸或其生理上可接受的盐、亮氨酸或其生理上可接受的盐、门冬氨酸或其生理上可接受的盐、酪氨酸或其生理上可接受的盐、谷氨酸或其生理上可接受的盐、苯丙氨酸或其生理上可接受的盐、精氨酸或其生理上可接受的盐、赖氨酸或其生理上可接受的盐、缬氨酸或其生理上可接受的盐、苏氨酸或其生理上可接受的盐、组氨酸或其生理上可接受的盐、色氨酸或其生理上可接受的盐、蛋氨酸或其生理上可接受的盐、胱氨酸或其生理上可接受的盐和甘氨酸或其生理上可接受的盐。2.根据权利要求1所述的保护液，其中，所述氨基酸包含L-脯氨酸L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-门冬氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸盐酸盐、L-赖氨酸盐酸盐、L-缬氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸盐酸盐、L-色氨酸、L-蛋氨酸、L-胱氨酸和甘氨酸。3.根据权利要求1或2所述的保护液，其中，按质量份数计，所述保护液包含：氨基酸24～60份；葡萄糖32～60份；白蛋白12～24份；氯化钙0.016～0.036份；氯化钾0.016～0.036份；氯化钠4～7.2份；和碳酸氢钠2.4～4.8份；优选地，按质量份数计，所述保护液包含：氨基酸30～50份；葡萄糖40～50份；白蛋白15～20份；氯化钙0.02～0.03份；氯化钾0.02～0.03份；氯化钠5～6份；和碳酸氢钠3～4份。4.根据权利要求1-3中任一项所述的保护液，其中，按质量份数计，所述氨基酸包含：L-脯氨酸0.8～1.2份；L-丝氨酸0.8～1.2份；L-丙氨酸1.6～2.4份；L-异亮氨酸2.8～4.3份；L-亮氨酸3.9～5.9份；L-门冬氨酸2～3份；L-酪氨酸0.2～0.3份；L-谷氨酸0.6～0.9份；L-苯丙氨酸4.2～6.4份；L-精氨酸盐酸盐4～6份；L-赖氨酸盐酸盐3.4～5.2份；L-缬氨酸2.8～4.4份；L-苏氨酸2～3份；L-组氨酸盐酸盐2～3份；L...

【专利技术属性】
技术研发人员：高文勇，邓鹏，
申请(专利权)人：科索瑞生物科技天津有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12