一种西姆芽孢杆菌、制备方法及其用途技术

本发明专利技术公开了一种西姆芽孢杆菌、制备方法及其用途。所述西姆芽孢杆菌为西姆芽孢杆菌Bacillus siamensis sp HY‑075，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60680。该菌株具有防治菜蔬植物病害的用途。

A Bacillus Simm, its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种西姆芽孢杆菌、制备方法及其用途
本专利技术涉及微生物领域，尤其涉及一种西姆芽孢杆菌及其用途。
技术介绍
目前已申请专利的陆生土壤或植物内生的西姆芽孢杆菌(Bacillussiamensis)均是陆生土壤和植物内生，其用途是开发成肥料或者防治单一病害的生防菌剂。用于生防菌剂时，剂型配制工序复杂，大都是与多菌种、生化材料复配合成混合使用，工序复杂，成本高；而单一菌剂常以发酵液或发酵液提取物为原料，不易保存运输，使用不便。同时随着可利用的陆生生物资源的逐渐减少，人们将目光转向其他生态系统，占地球资源71％的海洋继而成为首选。海洋生物约占地球生物种群总数的80％，拥有生理活性物质和新陈代谢产物的庞大资源。而从海洋生物尤其是海洋微生物中寻找特殊的先导化合物，筛选具有杀虫、杀菌、除草的农用抗生素，成为农药开发的新方向。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种海生来源的西姆芽孢杆菌。为实现上述目的，本专利技术提供一种西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075，其特征在于，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC60680。进一步，采用梯度稀释法从海洋材料中分离微生物细菌；将分离的微生物细菌培养用LB培养基培养，挑取单菌落进行纯化培养，以7种常见农作物病原真菌为靶标，采用活菌对峙培养法结合纸片扩散法初筛，再采用活菌对峙培养法结合菌丝生长抑制率法复筛，选出对7种病原真菌均具有抗真菌活性的细菌即为西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075。进一步，所述海洋材料为南中国海-3000米科考挖取的深海沉积物。进一步，所述7种常见农作物病原真菌为柑桔生疫霉菌Phytophthoracitricola、草莓灰霉病灰葡萄孢菌BotrytiscinereaPers.exFr.、黄瓜枯萎病尖镰孢菌Fusariumoxysporum、白术白绢病齐整小核菌Sclerotiumrolfsii、菊花黑斑病细极链格孢菌Alternariatenuissima、甘蓝立枯病立枯丝核菌Rhizoctoniasolani和甘蓝黑斑病芸苔生链格孢菌Alternariabrassicicola。本专利技术还保护所述西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075的用途。进一步，所述用途为防治菜蔬植物病害的用途；优选的，植物病害为柑桔生疫霉菌Phytophthoracitricola、草莓灰霉病灰葡萄孢菌BotrytiscinereaPers.exFr.、黄瓜枯萎病尖镰孢菌Fusariumoxysporum、白术白绢病齐整小核菌Sclerotiumrolfsii、菊花黑斑病细极链格孢菌Alternariatenuissima、甘蓝立枯病立枯丝核菌Rhizoctoniasolani和甘蓝黑斑病芸苔生链格孢菌Alternariabrassicicola中的至少一种。进一步，采用西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-07的发酵液或粉剂稀释后直接喷施到菜蔬叶片以及灌根。进一步，所述粉剂为将西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075发酵，获得含菌量大于1×109CFU/mL浓度菌液，加10m/v％灭菌硅藻土后电磁搅拌器常温下中速搅拌后离心，取沉降物冷冻干燥，粉碎颗粒过60目筛混匀制得粉剂。进一步，所述粉剂稀释为用水将粉剂按照1:50-1:200的体积比进行稀释。即使是同种属细菌，海洋环境多样性孕育出的菌株也更具多样性，抗病潜力更大。单一菌株粉剂制备工序简单，生产成本低，便于保存及供农业使用。本技术方案：为获得对植物真菌具有稳定拮抗作用的菌株，从深海沉积物中分离纯化的菌株进行微生物分离，并以病害甘蓝炭疽病等7种病原菌为靶标菌株，采用平板对峙法和含药介质法对拮抗菌的抑菌活性进行评价，同时根据形态特征、培养特征及生理生化特征和16SrDNA序列分析对其进行鉴定，筛选出具有高效拮抗作用的菌株。通过人工发酵培养繁殖足量活性菌体，研制活性菌株粉剂。最后进行田间试验。本专利技术的技术方案具有如下优点：1、所用原料简单明了，使用单一生防菌种，添加物仅为硅藻土，加工省时省力，任何普通生物实验室都能具备研制的条件，适合大规模生产。2、活菌生物农药防治效果显著，田间包菜种植实验显示，在接种病原菌后，取粉剂按体积比1:200的纯净水配制成水溶液对包菜施药三周，对包菜病害的防预率接近90％。3、西姆芽孢杆菌为海洋菌株，相对陆生菌株其特异性更强，更具广谱抗菌性，试验证明可对多种植物病害真菌起抑制作用，后续研究及开发潜力更巨大。附图说明图1是本专利技术所述西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075的电子显微镜观察图。图2是包菜发病程度中判定为1级的示意图。图3是包菜发病程度中判定为4级的示意图。图4是实施例2包菜试验效果验证的结果图。图5是实施例中采用本专利技术所制备的西姆芽孢杆菌粉剂喷施组的效果图。图6是实施例中采用空白清水对照组的效果图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1：菌株的分离与提取海洋材料：海洋材料为南中国海-3000米科考挖取的深海沉积物，由国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室汤熙翔副研究员惠赠。7种常见农作物病原真菌：均购自中国农业微生物菌种保藏管中心，具体为柑桔生疫霉菌株编号36282(Phytophthoracitricola)、草莓灰霉病灰葡萄孢菌菌株编号37271(BotrytiscinereaPers.exFr.)、黄瓜枯萎病尖镰孢菌菌株编号36933(Fusariumoxysporum)、白术白绢病齐整小核菌菌株编号37946(Sclerotiumrolfsii)、菊花黑斑病细极链格孢菌菌株编号37286(Alternariatenuissima)、甘蓝立枯病立枯丝核菌菌株编号37289(Rhizoctoniasolani)、甘蓝黑斑病芸苔生链格孢菌菌株编号37290(Alternariabrassicicola)。采用梯度稀释法从海洋材料中分离微生物细菌。分离的微生物细菌培养用LB培养基培养。挑取单菌落进行纯化培养，根据菌株形态编号记录并超低温保存，备用。以7种常见农作物病原真菌为靶标，采用活菌对峙培养法结合纸片扩散法初筛，采用活菌对峙培养法结合菌丝生长抑制率法复筛，选出对7种病原真菌均具有抗真菌活性的细菌。初步筛选方法为：用直径约6mm的打孔器打取培养3d的靶标病菌菌饼置于PDA培养基中央，在菌饼中心等距约12mm处放置蘸透待测菌株菌液的6mm滤纸片，每平板接种4个待测菌株，以不接任何待测菌株的靶标菌株为对照，3次重复。28℃培养4～6d后，观察透明抑菌圈的有无以代表是否有抑菌作用。复筛选方法为：经初筛试验，菌株HY-075对7种病菌均能形成抑菌圈。进行单一生防菌与病菌对峙培养。将病本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种西姆芽孢杆菌Bacillus siamensis sp HY‑075，其特征在于，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60680。

【技术特征摘要】
1.一种西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075，其特征在于，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC60680。2.如权利要求1所述西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075，其特征在于，采用梯度稀释法从海洋材料中分离微生物细菌；将分离的微生物细菌培养用LB培养基培养，挑取单菌落进行纯化培养，以7种常见农作物病原真菌为靶标，采用活菌对峙培养法结合纸片扩散法初筛，再采用活菌对峙培养法结合菌丝生长抑制率法复筛，选出对7种病原真菌均具有抗真菌活性的细菌即为西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075。3.如权利要求1所述西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075，其特征在于，所述海洋材料为南中国海-3000米科考挖取的深海沉积物。4.如权利要求3所述西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspHY-075，其特征在于，所述7种常见农作物病原真菌为柑桔生疫霉菌Phytophthoracitricola、草莓灰霉病灰葡萄孢菌BotrytiscinereaPers.exFr.、黄瓜枯萎病尖镰孢菌Fusariumoxysporum、白术白绢病齐整小核菌Sclerotiumrolfsii、菊花黑斑病细极链格孢菌Alternariatenuissima、甘蓝立枯病立枯丝核菌Rhizoctoniasolani和甘蓝黑斑病芸苔生链格孢菌Alternariabrassicicola。5.一种权利要求1所述西姆芽孢杆菌BacillussiamensisspH...

【专利技术属性】
技术研发人员：林志楷，林文珍，卢秋华，郭迟鸣，
申请(专利权)人：福建省亚热带植物研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35